一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法、修复方法以及饲料技术

本发明专利技术公开了一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，涉及转基因猪检测领域。本发明专利技术公开的转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，其包括：检测转fat‑1基因猪的血液生理生化指标和尿液生理生化指标。该评价方法可以对转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物对转基因猪的生长性能的影响进行准确、可靠地评价，有助于在转fat‑1基因猪育种过程中准确控制fat‑1基因表达。

【技术实现步骤摘要】
一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法、修复方法以及饲料
本专利技术涉及转基因猪检测领域，具体而言，涉及一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法、修复方法以及饲料。
技术介绍
饮食中总脂肪和饱和脂肪的摄入量占总热量的比例不断减少，ω-6脂肪酸(ω-6PUFAs，polyunsaturatedfattyacids)摄入增加和ω-3脂肪酸(ω-3PUFAs)减少，会导致ω-6和ω-3比例达到18:1以上，这种情况对心血管疾病、慢性疾病具有明显影响，而且会使超重和肥胖的患病率显著增加。红细胞(RBC)膜磷脂中ω-6脂肪酸和ω-6与ω-3比例提高了肥胖的风险，红细胞膜磷脂高水平ω-3减少肥胖的风险。通过增加摄入二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)能够减少疾病产生，ω-6/ω-3比率平衡对身体健康和肥胖的预防具有重要意义。ω-3PUFAs能够降低膜脂中胆固醇含量，增加细胞膜的流动性，降低心脑血管疾病产生的比例，具有抗炎、抗凝血等作用，抑制肿瘤生长，影响多种人类神经性疾病。人和哺乳动物缺少多不饱和脂肪酸脱氢酶，不能够生成ω-6和ω-3PUFAs，两种物质必须从食物中获取。秀丽线虫Fat-1(Fattyaciddesaturases，ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶)基因编码的ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶具有将ω-6PUFAs转化生成ω-3PUFAs的能力。采用转基因动物方法生产长链ω-3PUFAs是解决ω-3PUFAs食物短缺的有效方法之一，转fat-1基因猪提高猪肉营养价值,具有很好的应用前景。转fat-1基因猪育种需要采用PCR和Southern印迹杂交方法对转fat-1基因原代及传代生产仔猪进行检测，确定fat-1基因在猪基因组中的整合情况。转fat-1基因猪外源fat-1基因是否有效表达，表达产物能否到达预期生理效果以及基因整合表达对转基因猪和人体健康有没有危害，是转基因猪育种和实现商业应用的重要测试内容。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，该评价方法可以对转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物对转基因猪的生长性能的影响进行准确、可靠地评价，有助于在转fat-1基因猪育种过程中准确控制fat-1基因表达。本专利技术的另一目的在于提供一种转基因猪基因整合位置效应副作用的修复方法，该修复方法可消除转基因猪基因整合位置效应对转基因猪生长发育带来的副作用，恢复转基因猪受损器官的正常生理功能。本专利技术的另一目的在于提供一种用于修复转基因猪基因整合位置效应副作用的饲料，转基因猪食用该饲料后，可消除基因整合位置效应对生长发育带来的副作用。本专利技术是这样实现的：一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，其包括：检测转fat-1基因猪的血液生理生化指标和尿液生理生化指标。一种转基因猪基因整合位置效应副作用的修复方法，其包括：将F1代转基因猪与阴性生产猪杂交，得到F2代转基因阳性猪；对获得的F2代转基因阳性猪饲喂含红花籽油复合添加剂的饲料。一种用于修复转基因猪基因整合位置效应副作用的饲料，其含有红花籽油复合添加剂，所述红花籽油复合添加剂包括：红花籽食用油、鱼粉以及维生素添加剂。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供的转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，通过检测转基因猪(例如转fat-1基因猪)的血液生理生化指标和尿液生理生化指标等数据，建立生理生化指标与繁殖性能、猪生长发育情况关联分析方法，判断转fat-1基因猪基因整合位置效应，规范检测实验操作，有助于更完整、可靠以及准确地对转基因猪的生长性能和发育情况作出判断；此外，本专利技术提供的转基因猪基因整合位置效应副作用的修复方法，通过将F1代转基因猪(例如F1代转fat-1基因猪)与阴性生产猪杂交，得到F2代转基因阳性猪，并饲喂含红花籽油复合添加剂的饲料来消除外源基因整合位置效应副作用。该修复方法可消除转基因猪(例如转fat-1基因猪)基因整合位置效应对转基因猪生长发育带来的副作用，恢复转基因猪受损器官的正常生理功能，为转fat-1基因猪育种改进试验方法提供可靠材料，增加转基因猪肉食用安全性，有益保障人们的身体健康。另外，本专利技术提供的用于修复转基因猪基因整合位置效应副作用的饲料，其含有红花籽油复合添加剂，红花籽油复合添加剂包括：红花籽食用油、鱼粉以及维生素添加剂。转基因猪(例如转fat-1基因猪)食用后，可消除基因整合位置效应对生长发育带来的副作用，恢复转基因猪(例如转fat-1基因猪)由于基因整合位置效应导致的受损器官的生理功能，使转基因猪正常生长，提高其抗病能力。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1提供的对转fat-1基因猪的PCR鉴定结果；图2为本专利技术实施例1提供的对转fat-1基因猪的Southern印迹分析结果。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法、修复方法以及饲料进行具体说明。ω-3多聚不饱和脂肪酸(PUFAs)在预防和治疗心血管疾病、关节炎、癌症等多种疾病方面有重要作用，参与多种生理病理过程，减少心血管疾病的发生，对肿瘤具有抑制作用。利用转基因技术在猪基因组中导入fat-1基因，提高猪肉中ω-3多聚不饱和脂肪酸含量，有益于人的身体健康，转fat-1基因猪的培育在提高猪肉营养价值方面有重要研究意义和应用前景。ω-3PUFAs生理功能很多，食用量少作用不明显，食用量过大会抑制免疫力、损害细胞膜功能，促进肿瘤、血管疾病发展。需要增加检测项目评价转fat-1基因猪外源基因是否合适高效表达以及得到预期生理功效，多方面评价内源性产生的ω-3PUFAs的生理功能。目前，用于判断转fat-1基因猪基因整合位置效应的材料只有肝功能损伤检测报道，因此需要增加检测项目和临床数据，准确判断转fat-1基因猪基因整合位置效应对猪肾功能、心血管疾病、胃肠道消化功能的影响程度。建立合理关联分析方法，同时需要规范操作，节约检测费用，提高工作效率。基于此，一方面，本专利技术提供了转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，其包括：检测转fat-1基因猪的血液生理生化指标和尿液生理生化指标。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述血液生理生化指标包括：乳酸(LD)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、胆碱脂酶(CHE)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、血糖(GLU)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述尿液生理生化指标包括：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，其特征在于，其包括：检测转fat‑1基因猪的血液生理生化指标和尿液生理生化指标。

【技术特征摘要】
1.一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，其特征在于，其包括：检测转fat-1基因猪的血液生理生化指标和尿液生理生化指标。2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述血液生理生化指标包括：乳酸、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、胆碱脂酶、总蛋白、白蛋白、球蛋白、血糖、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。3.根据权利要求1或2所述的评价方法，其特征在于，所述尿液生理生化指标包括：胆红素、尿胆原、酮体、维生素C、尿糖、尿蛋白、尿潜血、pH、亚硝酸盐、白细胞以及比重。4.根据权利要求3所述的评价方法，其特征在于，所述转基因猪为转fat-1基因猪。5.一种转基因猪基因整合位置效应副作用的修复方法，其特征在于，其包括：将F1代转基因猪与阴性生产猪杂交，得到F2代转基因阳性猪；对...

【专利技术属性】
技术研发人员：华文君，华再东，郑新民，毕延震，任红艳，肖红卫，李莉，刘西梅，张立苹，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42