一种雷公藤甲素‑叶酸靶向纳米药物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种雷公藤甲素‑叶酸靶向纳米药物及其制备方法和应用，制备方法如下：(1)Mal‑PEG‑PLGA溶解在溶剂中，配置A液；(2)巯基叶酸溶解在溶剂中，配置B液；(3)将上述A液和B液混合，得FA‑PEG‑PLGA；(4)将FA‑PEG‑PLGA溶解在溶剂中，配置C液；(5)雷公藤甲素溶解在溶剂中，配置D液；(6)将C液和D液混合作为有机相，以去离子水作为水相，将有机相和水相置于微流控中进行反应，收集反应液，透析，既得。本发明专利技术将雷公藤甲素制备成靶向纳米材料，通过叶酸‑叶酸受体系统将雷公藤甲素介导进入银屑病特殊皮损部位，发挥其药理作用的同时降低雷公藤的毒副作用，可直接外用治疗银屑病皮损。

A triptolide folic acid targeted nano drug and preparation method and application thereof

The invention relates to a triptolide folic acid targeted nano drug preparation method and application thereof. The preparation method is as follows: (1) Mal PEG PLGA dissolved in the solvent, the configuration of A solution; (2) - folic acid is dissolved in the solvent, the configuration of B solution; (3) the A solution B and liquid mixing, FA PEG PLGA; (4) FA PEG PLGA dissolved in the solvent, the configuration of C solution; (5) triptolide is dissolved in the solvent, the configuration of D solution; (6) C solution and D solution as mixed with deionized water as the organic phase. The aqueous phase, the organic phase and aqueous phase in the microfluidic reaction, collecting the reaction liquid, dialysis, both. The invention of triptolide was prepared through targeted nano materials, folic acid folate receptor system of triptolide mediated into special psoriasis lesions, exert their pharmacological effect and reduce the side effects of Tripterygium wilfordii, direct topical treatment of psoriasis.

【技术实现步骤摘要】
一种雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医药
，具体地说，是一种雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物及其制备方法和应用。
技术介绍
中药雷公藤是卫矛科植物雷公藤TripterygiumwilfordiiHook.f.的根或根的木质部。具有祛风除湿，活血通络，消肿止痛，杀虫解毒的功效。现代药理学研究显示其具有明显的抗炎，免疫抑制，抗肿瘤及抗雄性生育等生物活性药理作用，在临床多用于治疗湿疹，痒疹，类风湿性关节炎等疾病。然而，临床常用的雷公藤及其口服制剂，具有诸多不良反应，如消化不良、肝肾毒性，抑制血液系统以及皮肤粘膜损害等，特别是其生殖毒性，严重影响了在育龄期患者中的使用，极大的限制了其在临床的广泛运用。叶酸是一种小分子维生素，它可与叶酸受体发生特异性结合，叶酸分子中的α羧基通过共价键与多种外源分子偶联，并且在叶酸偶联复合物中，叶酸分子保留了与叶酸受体之间高亲和力结合的性质。有研究显示，银屑病等高度增殖性疾病皮损处表现出叶酸受体高的特点，而正常皮肤不表达(或者低表达)，基于叶酸受体表达差异可实现叶酸-偶联物的主动靶向输送。与单克隆抗体靶向系统相比，叶酸小分子穿透力强，到达靶点时间短、稳定、价格低，可携带靶向药物通过细胞受体介导的内吞作用进入细胞内部，具有靶向性且应用范围广的优点。雷公藤甲素是雷公藤提取物中的主要活性成分之一，也是雷公藤多苷片的重要成份，但雷公藤甲素具有一定的毒性导致其无法直接使用，因此如何将雷公藤甲素制备成靶向纳米材料，使雷公藤甲素直接发挥药理作用的同时，降低其对正常细胞的毒副作用是其中难点。中国专利2014100393814公开了一种叶酸-纳米TiO2复合光催化剂及制备方法和应用，它是表面修饰叶酸的TiO2/SiO2纳米粒子，其结构式是FA-CONH-TiO2/SiO2，将纳米TiO2/SiO2复合材料与叶酸通过氨基化偶联增加复合物的稳定性，同时增强其靶向性，在纳米TiO2表面包覆SiO2提高纳米光催化效率及热稳定性，杀伤效率高且靶向性强。然而现有技术中，关于本专利技术雷公藤甲素-叶酸靶向药物，目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供一种雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物制备方法。本专利技术的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供由如上所述方法制备得到的雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物。本专利技术的第三个目的是针对现有技术中的不足，提供如上所述雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物的用途。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物制备方法，所述雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物制备方法如下：(1)Mal-PEG-PLGA溶解在溶剂中，配置A液；(2)巯基叶酸溶解在溶剂中，配置B液；(3)将上述A液和B液混合，反应后除去多余的巯基叶酸，得FA-PEG-PLGA；(4)将FA-PEG-PLGA溶解在溶剂中，配置C液；(5)雷公藤甲素溶解在溶剂中，配置D液；(6)将C液和D液混合作为有机相，以去离子水作为水相，将有机相和水相置于微流控中进行反应，收集反应液，透析，既得。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述Mal-PEG-PLGA中PEG的分子量为5000-20000Da，所述Mal-PEG-PLGA中PLGA的分子量为5000-20000Da。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述Mal-PEG-PLGA中PEG的分子量为5000Da，所述Mal-PEG-PLGA中PLGA的分子量为20000Da。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述步骤3中巯基叶酸与Mal-PEG-PLGA质量比为2：1。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述FA-PEG-PLGA与雷公藤甲素质量比为8-30：3。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述FA-PEG-PLGA与雷公藤甲素质量比为20：3。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述步骤1和步骤4的溶剂为乙腈，所述步骤2的溶剂为乙腈水溶液，所述步骤5的溶剂为甲醇。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：如上任一所述制备方法制备获得的雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述药物还包括药学上允许的辅料，所述药学上允许的辅料包括但不限于：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、红糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是：如上所述雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物在制备治疗银屑病的药物中的应用。本专利技术优点在于：1、本专利技术将雷公藤甲素制备成靶向纳米材料，通过叶酸-叶酸受体系统将雷公藤甲素介导进入银屑病特殊皮损部位，发挥其药理作用的同时降低雷公藤的毒副作用，可直接外用治疗银屑病皮损。2、本专利技术通过实验筛选对制备方法进行优化，所制备的雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物对正常的人源化HaCaT细胞毒性显著降低，而对叶酸受体高表达的Hacat细胞杀伤率显著增强。附图说明附图1为本专利技术靶向纳米颗粒紫外吸收谱图。附图2为非靶向纳米颗粒透射电镜图片。附图3为靶向纳米颗粒透射电镜图片。附图4为雷公藤纳米靶向作用原理示意图。附图5为银屑病皮损与皮损旁组织处叶酸受体的免疫荧光与mRNA分析。附图6为咪喹莫特诱导的小鼠银屑病动物模型表皮叶酸受体表达增强。附图7为银屑病模型小鼠用药前后的皮肤组织化学分析。附图8为质粒转染过表达叶酸受体，显示细胞分泌叶酸受体蛋白增高(NC：正常；OE：过表达)。附图9为雷公藤纳米靶向干预体外细胞情况。附图10为不同HaCaT细胞模型对波长450nm的光吸收率随时间变化曲线。以OD450反映具有活力的细胞的数量。其中OE是叶酸受体过表达，sgRNA是叶酸受体敲出。实验结果表明，OE叶酸受体过表达HaCaT细胞的生长与正常HaCaT细胞相比增殖更旺盛。附图11为FA-PEG-PLGA的靶向性验证实验。以Ce6为疏水模型药物，结果显示：在与细胞孵育24h后，靶向组细胞的平均荧光强度是非靶向组与靶向抑制组的2.5倍，是分子药物组(Ce6)的7倍。在12h时，靶向组是非靶向组的1.5-2倍。上述结果表明经过叶酸孵育后，在加入靶向性雷公藤甲素，其效能下降，也说明依赖叶酸受体的靶向性的正确性。具体实施方式下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1雷公藤甲素-叶酸靶向药物的制备(一)一、原料及设备1.1原料Mal-PEG-PLGA：(分子量：PEG：PLGA＝5000:20000)(sigma，Aldrich-900339,100MG)纯度：99％。PEG-PLGA：(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种雷公藤甲素‑叶酸靶向纳米药物制备方法，其特征在于，所述雷公藤甲素‑叶酸靶向纳米药物制备方法如下：(1)Mal‑PEG‑PLGA溶解在溶剂中，配置A液；(2)巯基叶酸溶解在溶剂中，配置B液；(3)将上述A液和B液混合，得FA‑PEG‑PLGA；(4)将FA‑PEG‑PLGA溶解在溶剂中，配置C液；(5)雷公藤甲素溶解在溶剂中，配置D液；(6)将C液和D液混合作为有机相，以去离子水作为水相，将有机相和水相置于微流控中进行反应，收集反应液，透析，既得。

【技术特征摘要】
1.一种雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物制备方法，其特征在于，所述雷公藤甲素-叶酸靶向纳米药物制备方法如下：(1)Mal-PEG-PLGA溶解在溶剂中，配置A液；(2)巯基叶酸溶解在溶剂中，配置B液；(3)将上述A液和B液混合，得FA-PEG-PLGA；(4)将FA-PEG-PLGA溶解在溶剂中，配置C液；(5)雷公藤甲素溶解在溶剂中，配置D液；(6)将C液和D液混合作为有机相，以去离子水作为水相，将有机相和水相置于微流控中进行反应，收集反应液，透析，既得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Mal-PEG-PLGA中PEG的分子量为5000-20000Da，所述Mal-PEG-PLGA中PLGA的分子量为5000-20000Da。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其特征在于，所述Mal-PEG-PLGA中PEG的分子量为5000Da，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李福伦，邓禹，吴闽枫，郭冬婕，陈瑜，张亚南，李斌，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，
类型：发明
国别省市：上海,31