The invention discloses a sugarcane and Sorghum Mosaic Virus indirect ELISA detection kit, antibody and horseradish including specific identification of Sorghum Mosaic Virus polyclonal rabbit anti peroxidase labeled Goat anti rabbit lgG standard solution. Among them, polyclonal antibody was prepared from the N terminal conserved domain polypeptide of P3 protein of sugarcane Sorghum Mosaic virus. Accordingly, the indirect ELISA detection method was established and applied to the detection of Sorghum Mosaic Virus in sugarcane. Compared with the prior art, the invention has the advantages of high sensitivity, high specificity, low cost, high throughput and rapid detection of the advantages, not only suitable for rapid field detection of small samples, rapid detection of a large number of samples in the laboratory is also suitable for high throughput.
【技术实现步骤摘要】
高粱花叶病毒间接ELISA检测方法及其试剂盒与应用
本专利技术属于高粱花叶病毒检测领域,尤其涉及一种高粱花叶病毒间接ELISA检测方法及其试剂盒与应用。
技术介绍
甘蔗是世界上最重要的糖料作物,也是最具潜力的可再生能源作物。甘蔗生长过程中会受到病毒的危害,且经过长期无性繁殖,多种病毒会积累在不同甘蔗品种及种质材料中,导致其种性退化,产量和品质下降,给甘蔗产业带来严重损失。甘蔗花叶病是甘蔗主要病害之一,其主要病原是马铃薯Y病毒属甘蔗花叶病毒亚组的甘蔗高粱花叶病毒(SrMV),该病毒可经蚜虫叮咬和机械损伤进行近距离传播,其自然寄主为禾本科的高粱和甘蔗等。甘蔗主要通过种茎进行无性繁殖,会造成该病毒的积累和远距离传播。被感染植株的叶面会出现黄绿相间不规则的嵌纹、条斑或斑驳,叶色褪绿等症状,病状在幼嫩叶片的基部较明显,影响光合作用的效率,会造成甘蔗产量和含糖量下降。因此,建立一种操作简单、特异灵敏、成本低廉的SrMV高效检测方法,对田间病毒调查,防止该病毒传播,以及建立无毒甘蔗种苗体系等具有重要意义。目前检测病毒常用的方法可分为分子检测技术和血清学检测技术两类。分子检测技术是一种基于核酸水平的检测,具有准确高效、灵敏快速的特点,但操作比较复杂,成本很高。常见的SrMV检测方法为PCR检测技术,首先需要对甘蔗提取总RNA,反转录为cDNA,再进行PCR扩增,最后进行电泳分析,甚至还要进行基因组序列测定。PCR技术操作过程繁琐、耗时长,并且该技术完全依赖于PCR仪器和商业化的试剂,所以实验成本较高,不利于田间病毒病的大规模检测。此外,PCR技术假阳性较高,整个过程需要专 ...
【技术保护点】
一种高粱花叶病毒间接ELISA检测试剂盒,其特征在于主要包括特异性识别高粱花叶病毒的兔抗多克隆抗体和辣根过氧化酶标记的羊抗兔lgG标准液。
【技术特征摘要】
1.一种高粱花叶病毒间接ELISA检测试剂盒,其特征在于主要包括特异性识别高粱花叶病毒的兔抗多克隆抗体和辣根过氧化酶标记的羊抗兔lgG标准液。2.根据权利要求1所述的高粱花叶病毒间接ELISA检测试剂盒,其特征在于所述多克隆抗体以甘蔗高粱花叶病毒的P3蛋白N端保守区多肽为抗原制备。3.根据权利要求1所述的高粱花叶病毒间接ELISA检测试剂盒,其特征在于所述制备按以下操作进行:从NCBI网站获得SrMV的P3基因序列,预测P3蛋白的氨基酸序列,选取N端暴露于天然蛋白外表的多肽为抗原,合成该多肽,将此多肽与弗氏佐剂混合免疫兔子,采集兔子血液,经亲和层析纯化获得多克隆抗体。4.根据权利要求1所述的高粱花叶病毒间接ELISA检测方法及其试剂盒与应用,其特征在于:所述多肽具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列。5.一种高粱花叶病毒间接ELISA检测方法,其特征在于以兔抗的甘蔗高粱花叶病毒P3蛋白N端保守区制备的多克隆抗体作为一抗,辣根过氧化酶标记的羊抗兔lgG标准液作为二抗对甘蔗中的高粱花叶病毒进行ELISA检测。6.根据权利要求5所述的高粱花叶病毒间接ELISA检测方法,其特征在于按以下步骤进行操作:A.样品处理:称取待检甘蔗样品,将其制成匀浆,离心或静置沉淀,取上清液用包被缓冲液...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈保善,温荣辉,王凤林,黄增飞,李书巧,
申请(专利权)人:广西大学,
类型:发明
国别省市:广西,45
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。