可用于诊断人肠道病毒感染的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供可用于诊断人肠道病毒感染的试剂盒。本发明专利技术的检测试剂盒包括一个或多个固体载体、以及独立地连接于所述固体载体上的SEQ ID NO：1～10所示的多肽。当以是否SEQ ID NO：1～10所示的多肽整体上对受试者来源的血液样本中的IgM有响应作为判定受试者是否已被人肠道病毒感染的指标的情况下，可以以94％以上的灵敏度和7％以下的假阳性率诊断人肠道病毒感染。

Kit for the diagnosis of human enterovirus infection

The present invention provides a kit for the diagnosis of human enterovirus infection. The detection kit includes one or more polypeptide solid carrier, and independently connected to the solid support of SEQ ID NO:1 ~ 10 shows. As to whether the SEQ ID NO:1 to polypeptide 10 shown on the subjects from the blood samples in the IgM response as to determine whether the subjects had been enterovirus infection index, with false positive rate of more than 94% sensitivity and 7% following diagnosis of human enterovirus infection.

【技术实现步骤摘要】
可用于诊断人肠道病毒感染的试剂盒
本专利技术主要涉及检测试剂盒。具体而言，本专利技术涉及可用于检测人肠道病毒感染的试剂盒。
技术介绍
肠道病毒感染是由人肠道病毒(EV)引起的疾病的总称，临床上主要表现为手足口病，手足口病多在婴幼儿中爆发流行，部分EV感染患儿表现为疱疹性咽峡炎，重症患者出现病毒性脑炎、病毒性脑脊髓膜炎、肺水肿、肺出血等。引起手足口病的病原，最常见的是柯萨奇病毒A16和肠道病毒71型；由肠道病毒感染引起的疾病发生重症感染的比例较大，病死率也较高，重症病例病死率可达10％-25％，因此病原学诊断意义重大。肠道病毒的临床诊断主要依据三个方面:一是临床表现，二是血清学证据，三是病原学证据。由于肠道病毒EV感染临床表现多，因此肠道病毒的血清学检测和病原学检测是目前最主要的依据。EV感染产生免疫保护，感染后可检出IgM和IgG抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新的可用于诊断人肠道病毒感染的试剂盒及诊断方法。本专利技术人令人惊奇地发现，当以是否SEQIDNO：1～10所示的多肽整体上对受试者来源的血液样本中的IgM有响应作为判定受试者是否已被人肠道病毒感染的指标的情况下，可以以94％以上的灵敏度和7％以下的假阳性率诊断人肠道病毒感染。因此，本专利技术包括：1.一种检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述固体载体上的SEQIDNO：1～10所示的多肽。2.根据项1所述的检测试剂盒，其中，所述SEQIDNO：1～10所示的多肽独立地连接于同一固体载体上。3.根据项1所述的检测试剂盒，其中，所述固体载体是SJ改性硅胶。4.根据项1所述的检测试剂盒，其用于诊断人肠道病毒感染。5.一种诊断受试者是否为人肠道病毒感染的方法，该方法包括：使用项1～4中任一项所述的检测试剂盒检测所述SEQIDNO：1～10所示的多肽对受试者来源的血液样本中的IgM是否有响应；其中，当所述SEQIDNO：1～10所示的多肽整体上对受试者来源的血液样本中的IgM有响应时，判定该受试者为人肠道病毒感染；否则，判定该受试者为非人肠道病毒感染。6.根据项5所述的方法，其中，所述血液样本为全血、血浆或血清。7.根据项5所述的方法，其中，所述受试者为具有手足口病临床症状的受试者。专利技术的具体实施方式多肽SEQIDNO：1所示的多肽序列为YHSSVYSLPPDPDHFDGYKQ；SEQIDNO：2所示的多肽序列为HPYVLDAGIPISQLTVCPHQ；SEQIDNO：3所示的多肽序列为ISDLLASVDSEEVRQYCRDQ；SEQIDNO：4所示的多肽序列为GHFTMLGVRDRLAVLPRHSQ；SEQIDNO：5所示的多肽序列为AREKVEFLNNLKQLPLLENQ；SEQIDNO：6所示的多肽序列为GKGELCAVFRADPGRNGPWQ；SEQIDNO：7所示的多肽序列为EDTHPPYKQTQPGADGFELQ；SEQIDNO：8所示的多肽序列为SLDFALSLLRRNIRQVQTDQ；SEQIDNO：9所示的多肽序列为NKEPAVLHSRDPRLEVDFEQ；SEQIDNO：10所示的多肽序列为GHFTMLGVRDPLAVLPRHSQ。所述多肽可以适宜采用(1)化学合成方法、或(2)酶反应合成方法等公知方法来获得，其中化学合成更为简便。在化学合成本专利技术的多肽情况下，通过使用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学合成方法，可以列举出例如肽固相合成法等。这样合成的肽可以采用常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱等进行纯化。这样的肽固相合成方法以及其后的肽纯化都是本
公知的。此外，在通过酶反应生产本专利技术的多肽的情况下，可以采用例如国际公开小册子WO2004/011653号所述的方法。即，可以这样来生产：将一方的氨基酸或二肽的羧基末端被酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、与氨基酸处于游离状态的氨基酸(例如羧基保护的氨基酸)在肽合成酶的存在下进行反应，生成的二肽或三肽。作为肽合成酶，可以列举出：具有生成肽的能力的微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体处理物、或该微生物来源的肽合成酶。特别是多肽的化学合成已经实现了商业化，可以通过委托专业的多肽合成公司来合成所述多肽。试剂盒本专利技术提供一种检测试剂盒(本专利技术的试剂盒)，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述固体载体上的SEQIDNO：1～10所示的多肽。优选地，本专利技术还提供一种检测器件以及所述检测器件在制备本专利技术的试剂盒中的用途，所述检测器件包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述固体载体上的SEQIDNO：1～10所示的多肽。令人惊奇的是，本专利技术的试剂盒能够以94％以上的灵敏度和7％以下的假阳性率诊断人肠道病毒感染。本说明书中，灵敏度是指：用“金标准”方法确认的阳性样本中，被其他方法测定为阳性样本的比例。假阳性率是指：用“金标准”方法确认的阴性样本中，被其他方法测定为阳性样本的比例。本
检测人肠道病毒感染的“金标准”方法是核酸检测法、即PCR法。本说明书中，“诊断”可以是确诊，也可以是为确诊提供参考信息。本说明书所称的肠道病毒感染，包括但不限于肠道病毒71型感染。在本专利技术中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料(例如是可以通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料)的载体即可。构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶(聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纤维素、特氟隆TM、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚丙烯、尼龙、聚偏二氟乙烯、胶乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纤维、金、铂、银、铜、铁、不锈钢、铁氧体、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白(白蛋白等)、碳或它们的组合等。固体载体的形状包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、板、微量板、碳纳米管、传感器芯片等。正如本
公知的那样，薄膜或板等平坦的固体载体上可以设置凹坑、沟槽、滤膜底部等。磁珠可以具有约25nm～约1mm范围的球体直径。在优选的实施方式中，磁珠具有约50nm～约10μm范围的直径。磁珠的尺寸可以根据特定的用途来进行选择。由Sepharose等高交联球形琼脂糖制成的珠子具有约24μm～约165μm范围的直径。优选地，高交联球形琼脂糖珠具有约24μm～约44μm范围的直径。高交联球形琼脂糖珠的尺寸可以根据特定的用途来进行选择。具有疏水性表面的固体载体的例子包括可从Polysciences，Warrington，PA或Spherotech，Liberville，IL购买的制品等聚苯乙烯胶乳珠。二氧化硅(SiO2)-处理或二氧化硅(SiO2)基的固体载体的例子包括可从Polysciences，Warrington，PA购买的超常磁性二氧化硅珠等，其可以用于捕捉核酸(例如DNA)。或者，还可以使用可从DynalBiotech购买的M-280等。具有亲水性表面的磁珠可用于捕捉增殖期的细菌细胞、核酸以及其它成分。作为该磁珠的例子，可以列举出Polysciences，Warrington，PA销售的珠子(名称：Biomag(注册商标)羧基)、或者BangsLaboratory，In本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述固体载体上的SEQ ID NO：1～10所示的多肽。

【技术特征摘要】
1.一种检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述固体载体上的SEQIDNO：1～10所示的多肽。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其中，所述SEQIDNO：1～10所示的多肽独立地连接于同一固体载体上。3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其中，所述固体载体是SJ改性硅胶。4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其用于诊断人肠道病毒感染。5.一种诊断受试者是否为人肠道病毒感染的方法，该方法包括：使用权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：马东礼，钟山，
申请(专利权)人：深圳市儿童医院，
类型：发明
国别省市：广东,44