血浆S100A12在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用制造技术

本发明专利技术属于医学生物学技术领域，尤其涉及血浆S100A12在ST段抬高型心肌梗死(STEMI)极早期诊断中的应用。S100A12是主要由心肌细胞、血管壁动脉粥样硬斑块的血管平滑肌细胞、血液中性粒细胞分泌的钙结合蛋白家族成员。S100A12为分子量12KD的蛋白质，含有2个EF手型钙离子结合区，由于其分子量较小，因此在急性心肌梗死发生后，从心肌细胞、血管平滑肌细胞、中性粒细胞中迅速释放进入循环血中，可以在急性心肌梗死发生的早期(胸痛30min内)血浆中检测其表达水平的增高，可作为STEMI早期诊断的生物标志物。

【技术实现步骤摘要】
血浆S100A12在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用
本专利技术属于医学生物学
，尤其涉及血浆S100A12在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用，具体为S100A12蛋白在ST段抬高型心肌梗死(STEMI)极早期诊断中的应用。
技术介绍
急性心肌梗死，是严重威胁人类健康的常见的重要疾病之一。急性心肌梗死尤其是ST段抬高型心肌梗死发病急，发病率和死亡率呈持续升高趋势，早期诊断并进行再灌注治疗是提高急性心肌梗死生存率的关键。世界卫生组织规定急性心肌梗死的诊断基于胸痛的临床症状，心电图的改变及生物标记物如心肌酶学的升高。目前，传统的生物标记物各有缺陷，CK-MB虽然是诊断STEMI患者的金标准，但是敏感性差，在发病早期(发病前4h内)不升高；在1990年，大量的临床研究证实，肌钙蛋白(TnT、TnI)可以用于STEMI的早期诊断及对病情的评估，美国心脏病学学会/美国心脏病协会修改了对STEMI诊断标准，把肌钙蛋白纳入为诊断STEMI的心肌标记物，STEMI定义更新为心肌标记物，特别是肌钙蛋白升高达到心肌损伤的界定值，即可诊断为STEMI。但是，肌钙蛋白在发病后3-4h开始升高，10-24h才能达到高峰，对STEMI患者早期诊断意义有限；CK-MB及肌钙蛋白在STEMI患者发病早期(发病后3h)升高幅度小，诊断效能低，肌红蛋白在STEMI患者发病后1h开始升高，但是诊断特异性低，多需要联合其他指标对STEMI进行诊断。临床上约有1/3的STEMI患者早期临床症状及心电图表现不典型，目前在临床使用的心肌损伤标记物又存在上述不足，CK-MB升高较迟，且诊断敏感性较低；肌钙蛋白亦不能在STEMI发病2h内被检出；肌红蛋白虽然在STEMI发病后的1-2h开始升高，但特异性差，不具有单独诊断价值。因此，研发在发病内1-2h内即可被检测敏感性及特异性均较高的STEMI标志物，对于STEMI患者的极早期诊断,显得尤为重要。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的在于提供血浆S100A12在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用，具体为S100A12蛋白在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用。所述的S100A12的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示：MetThrLysLeuGluGluHisLeuGluGlyIleValAsnIlePheHisGlnTyrSerValArgLysGlyHisPheAspThrLeuSerLysGlyGluLeuLysGlnLeuLeuThrLysGluLeuAlaAsnThrIleLysAsnIleLysAspLysAlaValIleAspGluIlePheGlnGlyLeuAspAlaAsnGlnAspGluGlnValAspPheGlnGluPheIleSerLeuValAlaIleAlaLeuLysAlaAlaHisTyrHisThrHisLysGlu。所述的S100A12蛋白可以作为ST段抬高型心肌梗死早期诊断的生物标志物；具体的，具体为S100A12蛋白制备ST段抬高型心肌梗死早期诊断试剂盒。为了实现上述问题，本专利技术提供的一种S100A12蛋白检测试剂盒直接购于日本CircuLexTM公司。所述的S100A12蛋白检测试剂盒应用于ST段抬高型心肌梗死极早期诊断。所述的S100A12蛋白在ST段抬高型心肌梗死患者早期诊断中的应用，方法如下。步骤1、血浆的采集：研究对象入选后即刻抽取其静脉血，用含EDTA真空抗凝管收集血标本5ml；连续抽取发病小于2hSTEMI患者的静脉血，采血时间点为STEMI发病30min、1h、2h、4h、6h、12h、24h、3d、7d、30d共10个时间点。步骤2、样本的处理：抽取静脉血10分钟内，抗凝管3000转/min离心处理10min，分离血浆，将处理好的血浆储藏于-80℃冰箱保存，用S100A12ELISA检测试剂盒(购于日本CircuLexTM公司)统一检测入选研究对象血浆S100A12浓度；促凝管采集血标本即刻送本院检验科，检测其hscTnT、CK-MB及MYO浓度。步骤3、ELISA方法检测血浆中S100A12表达含量：S100A12ELISA检测试剂盒(采用双抗体夹心酶联免疫试验法)购于日本CircuLexTM公司，检测入选研究对象的血浆中S100A12浓度的变化，以实验孔和副孔的平均值作为检测对象的测定值。步骤4、数据的标准化处理：按照试剂盒说明书配制S100A12标准品浓度，根据说明书要求按浓度梯度依次加入标准品，建立标准曲线。步骤5、血浆心肌酶谱的检测：用电化学发光法检测入选对象血浆hscTnT和MYO浓度，用酶法检测入选对象血浆CK-MB活性。步骤6、急性心肌梗死患者血浆中S100A12的表达水平：结合其它诊断参数，根据测得的血浆中的S100A12的水平，与诊断临界值比较，大于临界值则诊断心肌梗死，小于临界值则为非心肌梗死的患者。步骤7、免疫组织化学检测S100A12在心源性猝死的患者冠状动脉(尸检标本)的表达及STEMI患者罪犯冠状动脉内血栓组织的表达。本专利技术的有益效果。本专利技术中，S100是新发现的钙调节蛋白家族，其主要在中性粒细胞内表达，并且在激活的单核巨噬细胞内也有表达。S100A12是S100家族新发现的成员，S100A12分子量为12KD，主要由心肌细胞、血管壁动脉粥样硬化的平滑细胞、血液中性粒细胞分泌，S100A12含有2个EF手型钙离子结合区；在动脉粥样硬化炎症病灶处即斑块内中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞及内皮细胞有大量S100A12表达，S100A12与其糖基化终产物受体结合，可引起细胞核内转录因子κB的表达上调，从而导致NF-κB介导的细胞因子的释放，动脉粥样硬化病变部位炎症反应的加剧；S100A12具有较强的趋化作用，趋化炎症细胞游走到动脉粥样硬化炎症病变局部，并通过炎症的级联放大效应引起炎性因子的释放，介导并加强炎症反应和导致动脉粥样硬化不稳定斑块的形成；早发冠状动脉疾病患者(不合并糖尿病)的外周血单个核细胞内S100A12高表达，导致单个核细胞的不稳定性增加，并促进单个核细胞转化成巨噬细胞；猝死的糖尿病患者的冠状动脉尸检发现，患者的冠状动脉粥样硬化斑块内S100A12大量表达，说明S100A12与动脉粥样硬化不稳定斑块的形成存在相关关系；急性心肌梗死的发病基础是冠状动脉内粥样硬化斑块破裂和血栓形成，造成持久而严重的心肌缺血，导致心肌急性坏死，约90％-95％透壁性心肌梗死是由冠状动脉斑块破裂导致局部血栓形成所致。在猝死的冠状动脉尸检标本中，我们发现冠状动脉不稳定斑块破裂口处S100A12的表达明显增强，同时在STEMI患者罪犯血管的血栓标本中S100A12表达明显增强。因此，血浆S100A12可以在早期精确的诊断出ST段抬高型心肌梗死疾病。附图说明图1为对照组、UA组、NSTEMI组及STEMI组S100A12蛋白浓度变化。图2为STEMI患者血浆S100A12浓度的ROC曲线。图3为STEMI患者发病后各生物标记物血浆浓度的时相性改变；其中3-1为血浆S100A12浓度的时相性改变；3-2为MYO浓度的时相性改变；3-3为CK-MB浓度的时相性改变；3-4为hscTnT浓度的时相性改变。本文档来自技高网...

【技术保护点】
血浆S100A12在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用。

【技术特征摘要】
1.血浆S100A12在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用。2.如权利要求1所述的S100A12蛋白在ST段抬高型心肌梗死早期诊断中的应用，其特征在于，所述的S100A12蛋白可以作为ST段抬高型心肌梗死早期诊断的生物标志物。3.如权利要求1所述的S100A12蛋白在ST段抬高型心肌梗死早期...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩雅玲，程茗慧，张效林，高乃婧，闫承慧，田孝祥，李毅，刘丹，
申请(专利权)人：中国人民解放军沈阳军区总医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21