一种检测沙丁胺醇的试纸条及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测沙丁胺醇的试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，所述反应膜上具有包被有沙丁胺醇半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有沙丁胺醇单克隆抗体‑胶体金标记物。本发明专利技术还提供了一种应用上述沙丁胺醇试纸条检测尿液、鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、饲料中沙丁胺醇残留的方法。本发明专利技术所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

【技术实现步骤摘要】
一种检测沙丁胺醇的试纸条及其应用
本专利技术涉及一种检测沙丁胺醇的试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测沙丁胺醇的胶体金试纸条，其特别适用于尿液、鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、饲料中沙丁胺醇残留的检测。
技术介绍
沙丁胺醇是一种强效选择性β-受体兴奋剂药物，临床上常用于治疗支气管哮喘、哮喘性支气管炎和肺气肿患者的支气管痉挛等呼吸系统疾病。因此药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。其残留量可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康极有危害，我国农业部发布的《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》明确规定沙丁胺醇等β-兴奋剂被禁止所有用途，禁用所有食品动物。目前，对于沙丁胺醇的残留检测主要有高效液相色谱法、液相色谱～质谱联用分析法、气相色谱法、毛细管区带电泳法、免疫测定法等检测方法，仪器检测方法具有检测精确度高的优点，但其仪器化程度高，样品处理较复杂、检测费用高等，不适合用作大批样品的检测，免疫学检测方法操作简单、快速、灵敏，可同时检测多数样品，是理想的快速筛选手段。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的沙丁胺醇残留检测试纸条。本专利技术所提供的检测沙丁胺醇残留的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)；所述反应膜上具有包被有沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物。所述沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物是由沙丁胺醇半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。所述沙丁胺醇单克隆抗体是以沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由沙丁胺醇单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次粘贴在底板(7)上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：1)制备喷涂有沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；2)制备具有包被有沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。具体地说，步骤包括：1)半抗原制备：将1,3-苯二甲醇与半琥珀醛反应得到沙丁胺醇半抗原产物；2)将沙丁胺醇半抗原与载体蛋白偶联，得到沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物；3)用沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到沙丁胺醇单克隆杂交瘤细胞株；4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；5)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；6)将步骤3)制备的沙丁胺醇单克隆抗体加入步骤5)制备的胶体金中，得到沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物；7)将沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；8)将沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线；9)将样品吸收垫用含0.5％牛血清白蛋白(体积分数)、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；10)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，样品吸收垫盖住结合物释放垫，最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4～30℃条件下可保存12个月。本专利技术的另一个目的是提供一种应用上述试纸条检测尿液、鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、饲料中沙丁胺醇残留的方法，它包括步骤：(1)样品前处理；(2)用试纸条进行检测；(3)分析检测结果。本专利技术的沙丁胺醇快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，将沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的沙丁胺醇在流动过程中，与结合物释放垫上的沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物结合，形成药物-抗体-胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物，根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中是否含有沙丁胺醇残留。检测时，样品经处理后滴入试纸条卡孔内，当沙丁胺醇在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线(T)和质控线(C)内各出现一条红色条带；如果沙丁胺醇在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与沙丁胺醇全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。如图2所示。阴性：当质控线(C)显示出红色条带，检测线(T)同时也显示出红色条带，判为阴性。阳性：当质控线(C)显示出红色条带，而检测线(T)不显色，判为阳性。无效：当质控线(C)不显示出红色条带，则无论检测线(T)显示出红色条带与否，该试纸条均判为无效。本专利技术的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本专利技术试纸条检测沙丁胺醇残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。附图说明图1为试纸条剖面结构示意图。图2为试纸条检测结果判定图。图3为沙丁胺醇半抗原合成图。具体实施方式下面结合具体的实施例来进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不用来限制本专利技术的范围。实施例1沙丁胺醇检测试纸条的制备该试纸条的制备方法主要包括以下步骤：1)制备喷涂有沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；2)制备具有包被有沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸条。下面分步详细叙述：1、沙丁胺醇半抗原的制备取1,3-苯二甲醇1.0g，加乙醇溶解，加半琥珀醛0.61g，加吡啶0.5ml，60℃搅拌3h，冷却到室温，转入0℃，搅拌20min，加硼氢化钠0.24g，继续搅拌2h。停止反应，加水，稀盐酸调节PH值到5，乙酸乙酯萃取，分层静置，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥蒸干，得到黄色油状物，乙醇/石油醚(1/2,v/v)重结晶，得到琥珀醛沙丁胺醇半抗原产物1.2g，收率86％。1HNMR(CDCl3,300MHZ)δ:11.0(COOH，s,1H)，2.371(CH2,2H,t,J＝7.367),1.899(-CH2-,2H,tt,J＝7.367,J＝2.670),2.528(-CH2-,2H,t,J＝2.670),2.863(-CH2-,1H,d,J＝5.780),2.863(-CH2-,1H,d,J＝5.781),本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测沙丁胺醇的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，其特征在于所述反应膜上具有包被有沙丁胺醇半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有沙丁胺醇单克隆抗体‑胶体金标记物，所述沙丁胺醇半抗原的制备方法如下：取1,3‑苯二甲醇1.0g，加乙醇溶解，加半琥珀醛0.61g，加吡啶0.5ml，60℃搅拌3h，冷却到室温，转入0℃，搅拌20min，加硼氢化钠0.24g，继续搅拌2h；停止反应，加水，稀盐酸调节pH值到5，乙酸乙酯萃取，分层静置，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥蒸干，得到黄色油状物，乙醇和石油醚的体积比为1:2进行重结晶，得到琥珀醛沙丁胺醇半抗原1.2g，收率86％。

【技术特征摘要】
1.一种检测沙丁胺醇的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，其特征在于所述反应膜上具有包被有沙丁胺醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有沙丁胺醇单克隆抗体-胶体金标记物，所述沙丁胺醇半抗原的制备方法如下：取1,3-苯二甲醇1.0g，加乙醇溶解，加半琥珀醛0.61g，加吡啶0.5ml，60℃搅拌3h，冷却到室温，转入0℃，搅拌20min，加硼氢化钠0.24g，继续搅拌2h；停止反应，加水，稀盐酸调节pH值到5，乙酸乙酯萃取，分层静置，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥蒸干，得到黄色油状物，乙醇和石油醚的体积比为1:2进行重结晶，得到琥珀醛沙丁胺醇半抗原1.2g，收率86％。2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次粘贴在底板(7)上。3.如权利要求1-2任一项所述的试纸条，其特征在于所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。...

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，崔海峰，曹东山，贾芳芳，王兆芹，冯才伟，杨昌松，彭正学，
申请(专利权)人：北京望尔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11