The invention belongs to the field of molecular biology and gene engineering, in particular to the preparation method of a recombinant thermostable xylanase. The present invention by codon optimization technology was optimized from the thermophilic bacterium Thermotoga petrophila RKU beta 1,4 endo xylanase gene TX, TX gene was optimized into Pichia pastoris by recombinant expression of 1,4 beta heat endoxylanase TX bacteria. Finally, high density fermentation technology was used to achieve the high expression of thermostable xylanase TX, which laid the foundation for its industrial application.
【技术实现步骤摘要】
一种重组耐热木聚糖酶的制备方法
本专利技术属于分子生物学及基因工程领域,具体涉及一种重组耐热木聚糖酶的制备方法。
技术介绍
木聚糖是植物细胞壁半纤维素的主要成分,是自然界中第二大含量丰富的可再生资源。木聚糖酶能够将木聚糖水解为低聚木糖及木糖,根据木聚糖酶的作用方式可将木聚糖酶分为β-1,4-内切木聚糖酶,β-木糖苷酶,α-葡萄糖醛酸苷酶,α-L-呋喃型阿拉伯糖苷酶等。β-1,4-内切木聚糖酶能够水解木聚糖主链的β-1,4糖苷键,产生低聚木糖和少量木糖,是降解木聚糖的关键酶。由于β-1,4-内切木聚糖酶能够有效的水解木聚糖主链的β-1,4糖苷键,使其在饲料、造纸等工业领域具有巨大的应用潜力。目前限制β-1,4-内切木聚糖酶在饲料、造纸等工业领域产业化应用的主要因素是耐热性能差、生产成本高。饲料及造纸等工业领域均涉及到高温加工环节,普通的β-1,4-内切木聚糖酶经过高温环节后,酶容易变性失活,不能发挥作用。因此筛选及高效表达高温耐热β-1,4-内切木聚糖酶可以有效的推动β-1,4-内切木聚糖酶在饲料、造纸等工业领域的产业化应用。中国专利申请(CN103602645A)公开了一种木聚糖酶的制备方法,木聚糖酶的制备方法,包括下述步骤:活化菌种:用YPD培养基,对含有耐热木聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌进行活化,活化条件为28~32℃,20~26h,所述的YPD培养基为酵母浸出粉胨葡萄糖培养基;扩大培养:将活化好的菌种接入摇瓶中,于28~32℃下,以180~220r/min的转速进行扩大培养;二次扩大培养:22~26h后接入种子罐,28~32℃条件下进一步扩大培养;发酵 ...
【技术保护点】
一种重组耐热木聚糖酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1.根据毕赤酵母密码子偏好性,对来源于嗜热细菌Thermotoga petrophila RKU的耐热木聚糖酶基因tx进行优化;优化后的耐热木聚糖酶基因tx序列如SEQ ID NO.1所示;S2.合成步骤S1中优化后的耐热木聚糖酶基因tx,构建重组表达载体,将构建成功的重组表达载体转入毕赤酵母得到重组工程菌株,然后进行高酶活转化子筛选;S3.将筛选出来的高酶活转化子进行高密度发酵,即得。
【技术特征摘要】
1.一种重组耐热木聚糖酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1.根据毕赤酵母密码子偏好性,对来源于嗜热细菌ThermotogapetrophilaRKU的耐热木聚糖酶基因tx进行优化;优化后的耐热木聚糖酶基因tx序列如SEQIDNO.1所示;S2.合成步骤S1中优化后的耐热木聚糖酶基因tx,构建重组表达载体,将构建成功的重组表达载体转入毕赤酵母得到重组工程菌株,然后进行高酶活转化子筛选;S3.将筛选出来的高酶活转化子进行高密度发酵,即得。2.根据权利要求1所述重组耐热木聚糖酶的制备方法,其特征在于,步骤S2中表达载体为pPICZαA或pPIC9K。3.根据权利要求1所述重组耐热木聚糖酶的制备方法,其特征在于,步骤S3高密度发酵步骤为:I.种子培养液制备:将筛选得到的高酶活转化子接种于100mLBMGY培养基中,30℃、240rpm培养20h进行活化,取活化的菌液以1:50的比例接种到300mLBMGY培养基中,30℃、240rpm培养至OD600=5;II.向发酵罐中加入20L...
【专利技术属性】
技术研发人员:李阳源,王建荣,杨玲,瞿曼,周银华,
申请(专利权)人:广东溢多利生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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