一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用。本发明专利技术根据毕赤酵母密码子的偏好性，对枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶编码基因进行了优化，优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。进一步利用毕赤酵母表达系统对该所述优化的壳聚糖酶编码基因进行高效分泌表达，获得枯草芽孢杆菌壳聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术获得的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶对不同脱乙酰度的壳聚糖底物均有较高的水解活性，摇瓶发酵产生的粗酶液即具有1mL(蛋白含量0.3mg)降解5g壳聚糖的水解能力，而降解相同量的壳聚糖约需要非特异性商品酶150mg，理论上效率提高500倍；具有良好的工业应用前景。

Bacillus subtilis chitosan enzyme and preparation method and application thereof

The invention discloses a Bacillus subtilis chitosan enzyme and a preparation method and an application thereof. According to the invention of Pichia pastoris codon preference of Bacillus subtilis chitosanase gene encoding optimized nucleotide sequence after optimization is shown as SEQ ID NO.2. The further use of Pichia pastoris expression system for the optimization of the chitosanase gene encoding efficient secretory expression, obtain chitosanase from Bacillus subtilis, its amino acid sequence is shown as SEQ ID NO.1. The hydrolytic activity of Bacillus subtilis enzyme chitosan deacetylation of Chitosan on different substrate were higher, crude enzymes produced by fermentation with 1mL (protein 0.3mg) hydrolysis ability of 5g degradation of chitosan, and the degradation of the same amount of chitosan is about to nonspecific commercial enzyme 150mg in theory, the efficiency is increased by 500 times; with good prospects for industrial applications.

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用
本专利技术属于壳聚糖酶
，具体涉及一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用。
技术介绍
壳聚糖酶(Chitosanases，EC.3.2.1.132)广泛存在于古菌、细菌及真核生物中，在糖苷水解酶(GlycosideHydrolases，GH)家族3、5、7、8、46、75及80中均有分布，其中，家族46、75及80中仅包含壳聚糖酶。在工业上，由于缺乏经济高效的特异性壳聚糖酶，往往使用蛋白酶及纤维素酶等非特异性商品酶类水解壳聚糖以制备壳寡糖。由于具有壳聚糖酶水解活性的酶类在这些商品酶中所占比例极低，用酶量较大，壳寡糖的生产成本也相应增加。因此，迫切需要研发出一系列经济高效的壳聚糖酶以满足工业壳寡糖生产的需求。本专利技术研发人员前期在多种食品级商品酶中筛选具有壳聚糖水解酶活性的酶制剂时发现，使用枯草芽孢杆菌发酵生产的淀粉酶及中性蛋白酶均具有较好的壳聚糖水解活性(1g粗酶干粉约可彻底水解30g壳聚糖)，提示这些商品酶的来源菌株枯草芽孢杆菌中具有壳聚糖酶编码基因。我们通过基因组检索发现，枯草芽孢杆菌中存在壳聚糖酶的编码基因。为获得更安全高本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的编码基因，其特征在于：该基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法，该方法为：将核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的壳聚糖酶基因构建至表达载体中，然后导入毕赤酵母细胞，诱导并获得分泌表达的壳聚糖酶。4.如权利要求3所述的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法，其特征在于：所述表达载体为pGBG1，表达载体pGBG1通过如下方式获得：将表达载体pPIC9中的信号肽序列如SEQIDNO.4所示进行密码子优化，获得适合在毕赤酵母中表达的信号肽序列如SEQIDNO.5所示；利用NsiI/XhoI双酶切，将表达载体pPIC9中如SEQIDNO.4所示的序列替换为如SEQIDNO.5所示的信号肽序列，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜昱光，程功，任立世，焦思明，孙明，冯翠，
申请(专利权)人：中科荣信苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32