一种从浒苔中提取叶绿素的方法技术

本发明专利技术涉及色素提取工艺领域，具体涉及一种采用加酶提取叶绿素的方法。将原料浒苔预处理，然后采用加纤维素酶破壁，有机溶剂提取叶绿素的方法。采用本发明专利技术方法所得到的叶绿素提取率高，纯度好。方法操作简单、环保高效、适合浒苔中提取高纯度叶绿素的规模化操作。

A method for extracting chlorophyll from Enteromorpha.

The invention relates to the field of pigment extraction technology, in particular to a method for extracting chlorophyll by adding enzyme. The raw materials of Enteromorpha pretreatment, then adding cellulase broken, chlorophyll extraction method of organic solvent. The chlorophyll extraction rate obtained by the method is high and the purity is good. The method has the advantages of simple operation, environmental protection and high efficiency, suitable for the extraction of large scale operation and high purity of chlorophyll in enteromorpha.

【技术实现步骤摘要】
一种从浒苔中提取叶绿素的方法
本专利技术涉及色素提取工艺领域，具体涉及一种采用酶解有机溶剂提取叶绿素的方法。
技术介绍
叶绿素是存在于植物细胞中的一类极重要的绿色色素，是绿色植物和藻类进行光合作用时吸收、转化和传递光能的主要物质。含有四吡咯环构成的卟啉环，其骨架结构与血红素相似，不同的是四吡咯环中央是一个镁原子。叶绿素主要包括叶绿素a、b两种，他们之间的区别仅仅是一个基团的不同。叶绿素的分子结构与人类和大多数动物体内的血红蛋白分子结构十分相似，在某中意义上讲，叶绿素也是维持生命不可缺少的物质。近年来，由于全球变暖，大气中二氧化碳含量增加，使得海水在与空气交换时增加了碳的含量，而浒苔繁殖力极强，从而导致浒苔的疯长与大面积的扩大。浒苔的爆发可影响海底其它生物的生长，死亡的浒苔还会消耗海水中的氧气，使养殖贝类死亡，大量繁殖还会严重影响景观，干扰旅游观光和水上运动的进行，对环境和水产养殖的负面影响较大，现在国外已经把浒苔一类的大型绿藻大规模爆发称为“绿潮”，并视作和赤潮一样的海洋灾害。我国浒苔资源丰富，特别是近年来青岛近海海域涌现大量浒苔藻类植物并侵入岸边，为此，如何利用浒苔这一资源，变废为宝成为一个热点话题。
技术实现思路
本专利技术在于提供一种利用目前我国丰富的浒苔提取叶绿素的方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种从浒苔中提取叶绿素的方法，将原料浒苔用清水浸提，过滤后采用酶解有机溶剂浸提叶绿素的方法。所述原料浒苔为新鲜采取的浒苔，洗净后自然阴干后，粉碎，得到干浒苔样品；或，为用自来水洗净的新鲜采取的浒苔。进一步的说，将原料浒苔样品与水按照固液(g/ml)比1：5-40的比例混合后，在35-45℃，90-120r/min振荡提取60-120min，过滤，得去除杂质的滤饼；将滤饼与蒸馏水按照固液比1：1-20的比例混合,再加入纤维素酶，而后在恒温振荡器中，40-45℃下进行酶解3-24h，酶解后过滤，滤液待用，滤渣用不同的有机溶剂提取，固液比为1:10-40,35-45℃下，避光提取3-10h，得叶绿素提取物，再进一步纯化得叶绿素油状物。所述叶绿素提取物过滤，40℃旋蒸后置于40℃烘箱中烘干得叶绿素油状物。干浒苔加酶量为150-200U/g，湿浒苔加酶量为100-150U/g，水浴酶解时干浒苔与蒸馏水固液比为1：5-20，湿浒苔与蒸馏水固液比为1：1-5。所述有机溶剂为无水乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇或乙酸乙酯，优选为无水乙醇。所述叶绿素的提取率为干浒苔0.099％，纯度为4.10％；湿浒苔0.038％，纯度为3.07％。本专利技术所具有的优点：与传统的有机溶剂提取方法相比，采用本专利技术方法叶绿素提取率高，纯度高，且在叶绿素提取的过程中，其他浒苔中的活性成分如可溶性多糖、可溶性蛋白、海藻淀粉等得到了充分的利用。该方法操作简单、环保高效、适合浒苔中提取高纯度叶绿素的规模化操作。附图说明图1为叶绿素a，b混合物标准品在652nm处吸光度标准曲线图。图2为本专利技术实施例提供的不同pH条件下叶绿素浓度变化图。图3为本专利技术实施例提供的光照对叶绿素含量影响变化图。图4金属离子对叶绿素稳定性的影响(A)初始反应(B)反应24h之后。图5不同氧化剂对叶绿素稳定性的影响(A)初始反应(B)反应24h之后。图6为本专利技术实施例提供的提取出叶绿素产品图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步的解释说明。实施例1原料预处理，在实验中，取新鲜采取的浒苔，洗净。取100克鲜浒苔样品，按照1:5固液(g/ml)比加入蒸馏水，充分搅碎得到湿浒苔样品。上述样品在震荡培养箱中，45℃浸提2h后，过滤，滤液用于提取浒苔的可溶性活性组分，滤渣用于进一步的叶绿素提取。用于与本专利技术方法的实验对比，首先采用直接浸提法提取叶绿素，实验中分别取滤渣2g，而后各自与无水乙醇按料液比为1:20(g/ml)混合，置于振荡器以120r/min，温度45℃下提取4h。提取后过滤，滤液在645nm和663nm下测定吸光值，计算提取率。表1无水乙醇为溶剂，料液比为1:20条件下，提取温度对鲜浒苔叶绿素提取率的影响表2无水乙醇为溶剂，料液比为1:20条件下，提取时间对鲜浒苔叶绿素提取率的影响提取时间A645A663提取率1h0.2460.4670.018％2h0.3270.6160.023％3h0.2620.4990.019％4h0.3420.6200.024％5h0.3260.6120.023％表3无水乙醇为溶剂，45℃条件下，料液比对鲜浒苔叶绿素提取率的影响料液比A645A663提取率1：100.2630.4590.018％1：200.2740.5010.019％1：300.2760.5030.019％由上表1-3可知，传统的有机溶剂提取法，提取率很低。实施例2原料预处理与实施例1中相同，水提取后的滤渣用于本专利技术方法酶解醇提的叶绿素提取。滤渣按照固液比1:5加入蒸馏水，然后按照干浒苔样品中酶加量为150U/g，湿浒苔样品酶加量为100U/g加入纤维素酶。加入酶后将样品置于恒温振荡器中，于40℃条件下酶解3h进行酶解处理。酶解后，过滤，滤渣用固液比1:20(g/mL)的无水乙醇提取，浸提后过滤，滤液在645nm和663nm下测定吸光值，计算提取率。表4不同加酶量对湿浒苔叶绿素提取率的影响加酶量A645A663提取率25U/g0.4660.8700.033％50U/g0.5190.9080.036％100U/g0.5340.8800.036％150U/g0.5200.8040.034％200U/g0.4700.7820.032％表5不同加酶量对干浒苔叶绿素提取率的影响加酶量A645A663提取率25U/g0.7911.2170.078％50U/g0.8451.4110.086％100U/g0.9261.5880.095％150U/g0.9801.6110.099％200U0.9081.5640.093％表9不同提取方法对叶绿素提取率和纯度的影响不同条件A645A663提取率纯度干浒苔不加酶0.8771.3540.056％2.06％湿浒苔不加酶0.3460.6200.024％1.46％干浒苔加酶0.9801.6110.099％4.10％湿浒苔加酶0.5190.9080.036％3.07％由上述结果可知，通过本专利方法所得叶绿素的提取率和纯度都得到了大幅度提高。实施例3提取的叶绿素的稳定性研究1、将上述实施例提取所得叶绿素进行色素的热处理检测：精确称取适量提取出的叶绿素配成待测液5份，每份10mL，放入具塞试管中，在4℃,37℃，45℃,60℃及常温25℃各不同温度的水浴中保温，待冷却后，用比色皿在645nm和663nm处测定吸光度值，并记录颜色变化。由上述的检测可见温度升高会在一定程度上破坏叶绿素的稳定性，且观察可见不同温度(4℃,37℃，45℃,60℃及常温25℃)保存一小时后叶绿素颜色并无明显变化。故叶绿素应在低温下保存。2、将上述实施例提取所得叶绿素进行pH对叶绿素稳定检测：取叶绿素待测液10份，每份10mL，用0.1mol/L的HCl或0.1mol/L的NaOH调节pH＝3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0并且本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从浒苔中提取叶绿素的方法，其特征在于：将原料浒苔用清水浸提，过滤后采用酶解有机溶剂浸提叶绿素的方法。

【技术特征摘要】
1.一种从浒苔中提取叶绿素的方法，其特征在于：将原料浒苔用清水浸提，过滤后采用酶解有机溶剂浸提叶绿素的方法。2.按权利要求1所述的浒苔中提取叶绿素的方法，其特征在于：所述原料浒苔为新鲜采取的浒苔，洗净后自然阴干后，粉碎，得到干浒苔样品；或，为用自来水洗净的新鲜采取的浒苔。3.按权利要求1所述的浒苔中提取叶绿素的方法，其特征在于：将原料浒苔样品与水按照固液(g/ml)比1：5-40的比例混合后，在35-45℃，90-120r/min振荡提取60-120min，过滤，得去除杂质的滤饼；将滤饼与蒸馏水按照固液比1：1-20的比例混合,再加入纤维素酶，而后在恒温振荡器中，40-45℃下进行酶解3-24h...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢荣娥，徐超杰，杨皓月，张恩惠，王金霞，刘松，李鹏程，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37