利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，包括：将新鲜的水稻叶片采摘后进行干燥、粉碎处理，过筛得到水稻叶片干粉；称取水稻叶片干粉，加入超声用的水，经超声波处理得到水稻叶片粗提液，经过过滤去杂后，滤液中补充水配制成水稻叶片提取液；用水稻叶片提取液代替水配制小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；用稻叶提取液培养基对小球藻进行第一轮培养和第二轮培养，经细胞分离得到小球藻细胞沉淀。本发明专利技术技术操作简单，具有快速增加小球藻细胞生长量和提高藻细胞叶绿素含量的显著技术效果，成本低，收益高，前景广阔。

Culture method for improving chlorophyll production of Chlorella by using rice leaf extract

The invention discloses a method using rice leaf extract to improve the training methods, including: the yield of Chlorella chlorophyll in rice leaves after picking fresh dry, crushing, sieving the rice leaf powder; weighing of rice leaf powder, adding ultrasound with water, obtained by ultrasonic treatment of rice leaf extract, after to the complex after filtration, filtrate supplement water for preparing rice leaf extract; rice leaf extract preparation of Chlorella medium instead of water, get the rice leaf extract medium with rice leaf; extraction based for the first round and second round of training on Chlorella cultured Chlorella cells, obtained by precipitation cell separation. The invention has the advantages of simple technical operation, rapid increase of Chlorella cell growth and increased chlorophyll content of algae cells, low cost, high yield and wide prospect.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及小球藻培养
，具体涉及一种利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法。
技术介绍
小球藻(Chlorella)是一种具有较高经济价值的单细胞绿藻，属于绿藻门小球藻属，包括约10个种，我国常见的小球藻种有蛋白核小球藻、椭圆小球藻、普通小球藻等，其中蛋白核小球藻蛋白含量丰富，营养价值最高(孔维宝，李龙囡，张继，等.小球藻的营养保健功能及其在食品工业中的应用.食品科学，2010，Vol.31，No.09323.)。研究表明，小球藻光合效率高，含有多糖、蛋白质、细胞色素、不饱和脂肪酸和生长因子等多种营养物质，藻细胞的蛋白和色素提取物具有抗肿瘤、增强免疫力和抗氧化等保健功效，人工培养的小球藻细胞可用于开发保健食品或提取具有医疗效果的生物产品。其中叶绿素化学结构与血红素相似，具有改善人体贫血功效，还具有消炎、抗胃溃疡、脱口臭以及机体排毒、降胆固醇、改善肌肤等生理功效。藻细胞产量和藻细胞中叶绿素含量是影响小球藻叶绿素产量的关键因素。科学研究表明植物提取液具有促进小球藻生长的效应(郭长城,李鑫,胡洪营.芦苇生物活性组分对小球藻生长的促进效应[J].中国环境科学,2009,29(11):1186-1189；李庆华,郭沛涌,田美燕,等.柳树叶浸提液对蛋白核小球藻的化感作用[J].生态学杂志,2009,28(5):884-888.)，应用植物粗提物提高小球藻的产量和叶绿素含量具有成本低廉，操作方便等优点，对小球藻的生产具有重要价值。水稻是我国的主要农作物，光合作用效率高，植株生长快，分蘖期叶片产量大，营养丰富。制备水稻叶片提取液用于小球藻的人工培养具有重要的经济价值和应用前景。
技术实现思路
本专利技术提供了一种利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，应用水稻叶片提取液达到快速增加小球藻生长速率和提高小球藻细胞叶绿素含量的目的效果。一种利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，包括：1)将新鲜的水稻叶片采摘后进行干燥、粉碎处理，过筛得到水稻叶片干粉；2)称取水稻叶片干粉，加入超声用的水，经超声波处理得到水稻叶片粗提液，水稻叶片粗提液经过过滤去杂后，滤液中补充水配制成水稻叶片提取液；3)用水稻叶片提取液代替水(通常为蒸馏水)配制小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；4)用稻叶提取液培养基对小球藻进行第一轮培养，将第一轮培养获得的藻细胞离心、重悬后，接入新的稻叶提取液培养基进行第二轮培养，第二轮培养结束后经细胞分离得到小球藻细胞沉淀和内含水稻叶片提取液的上清液。以下作为本专利技术的优选技术方案：步骤1)中，所述的新鲜的水稻叶片为田间或人工培养的水稻植株分蘖盛期叶片。所述的干燥为：置于40-70℃烘箱中烘干24-36h，进一步优选，60℃烘箱中烘干24h。干燥的水稻叶片进行粉碎处理，为了保证提取效果，将粉碎后的粗粉过筛，作为优选，过40目筛(筛孔径0.25-0.5mm)得到水稻叶片干粉，密封于干燥容器中避光备用。即所述的过筛采用筛孔径0.25-0.5mm。步骤2)中，所述的水稻叶片干粉与超声用的水的料液比为1g：20～50mL，进一步优选为1g：30mL。所述的超声波处理的条件为：超声功率30W～50W中，70℃～80℃超声提取30min～50min。进一步优选，所述的超声波处理的条件为：超声功率40W中，75℃超声提取40min。所述的滤液中补充水的标准为：补充水加入后，所述的水稻叶片干粉的质量与水稻叶片提取液的体积为0.2～5g：100mL，进一步优选，所述的水稻叶片干粉的质量与水稻叶片提取液的体积为0.5～2g：100mL，更进一步优选，所述的水稻叶片干粉的质量与水稻叶片提取液的体积为2g：100mL，能够更好地促进小球藻的生长，同时提高小球藻叶绿素含量。如水稻叶片干粉的质量为10g，将水稻叶片提取液定容至500mL，则水稻叶片干粉的质量与水稻叶片提取液的体积为2g：100mL。步骤3)中，稻叶提取液培养基的制备条件为，用步骤2)获得的水稻叶片提取液代替蒸馏水按常规方法配制小球藻的液体培养基，如常用BG11培养基、AE培养基等，配方含量和其他组分不变。步骤4)中，所述的第一轮培养的条件为：培养温度为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，主要为静置培养，每天(即每24hr周期内)摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为6～28天。进一步优选，所述的第一轮培养的条件为：培养温度为28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，主要为静置培养，每天(即每24hr周期内)摇动培养瓶混匀4次直至培养周期结束，培养周期为8天。所述的第二轮培养的条件为：培养温度为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，主要为静置培养，每天(即每24hr周期内)摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为2～8天。进一步优选，所述的第二轮培养的条件为：培养温度为28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，主要为静置培养，每天(即每24hr周期内)摇动培养瓶混匀4次直至培养周期结束，培养周期为4-6天。第一轮培养达到提高细胞产量的目的效果；第二轮培养达到提高藻细胞叶绿素含量的目的效果。所述的小球藻，可采用市售产品，可采用中国科学院野生生物种质库淡水藻种库(FACHB)市售的编号为FACHB-1222的蛋白核小球藻。步骤4)中，所述的藻细胞沉淀获得为离心法，所述的细胞分离的条件为：在10000～14000r/min离心3～15min。进一步优选，所述的细胞分离的条件为：12000r/min离心10min，使的小球藻细胞沉淀下来。所获得的内含水稻叶片提取液的上清液，可以一定配比添加到藻细胞培养液中重复利用，促进藻细胞生长。采用本专利技术获得的小球藻细胞沉淀经洗涤重悬后可作为水中氮、磷、偶氮染料降解等污水净化处理的生物基料。小球藻细胞沉淀经处理后得到绿色小球藻细胞干粉，所述的处理包括：洗涤、离心和干燥，将小球藻细胞沉淀加入蒸馏水重悬洗涤后，经6000～10000r/min离心5～20min后收集，之后在30℃～50℃低温条件下烘干，得到小球藻藻细胞干品。进一步优选，将小球藻细胞沉淀加入蒸馏水重悬洗涤后，经8000r/min离心10min后收集，之后在40℃低温条件下烘干，得到小球藻藻细胞干品。本专利技术中，获得小球藻细胞干品可作为制备食品、饲料或者提取药物、油脂、蛋白、色素和生长因子等相关生物产品的原料。本专利技术水稻叶片提取液培养提高小球藻叶绿素产量的技术的机理在于：前人报道水稻鲜叶除含有多糖、蛋白质、酶等成分外，还含有丰富的黄酮类化合物，包括麦黄酮、花青素、木犀草素、芹黄素等生物活性成分。本专利技术技术目的是用水将稻叶中的活性物质溶解出来。本专利技术加水提取时，为了使水稻叶片细胞破裂，内容物释放，采用了超声波处理，利用超声波热效应、空化效应和机械效应致使叶片细胞快速破裂，同时热水增大了胞内水溶性物质的溶解度，大大缩短了提取时间，从而保证了提取效果。水稻叶片提取液培养提高小球藻产量和叶绿素产量含量的技术机理在于：稻叶提取液促进蛋白核小球藻生长的原因一方面稻叶提取液可能含有内源激素本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，其特征在于，包括：1)将新鲜的水稻叶片采摘后进行干燥、粉碎处理，过筛得到水稻叶片干粉；2)称取水稻叶片干粉，加入超声用的水，经超声波处理得到水稻叶片粗提液，水稻叶片粗提液经过过滤去杂后，滤液中补充水配制成水稻叶片提取液；3)用水稻叶片提取液代替水配制小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；4)用稻叶提取液培养基对小球藻进行第一轮培养，将第一轮培养获得的藻细胞离心、重悬后，接入新的稻叶提取液培养基进行第二轮培养，第二轮培养结束后经细胞分离得到小球藻细胞沉淀和内含水稻叶片提取液的上清液。

【技术特征摘要】
1.一种利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，其特征在于，包括：1)将新鲜的水稻叶片采摘后进行干燥、粉碎处理，过筛得到水稻叶片干粉；2)称取水稻叶片干粉，加入超声用的水，经超声波处理得到水稻叶片粗提液，水稻叶片粗提液经过过滤去杂后，滤液中补充水配制成水稻叶片提取液；3)用水稻叶片提取液代替水配制小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；4)用稻叶提取液培养基对小球藻进行第一轮培养，将第一轮培养获得的藻细胞离心、重悬后，接入新的稻叶提取液培养基进行第二轮培养，第二轮培养结束后经细胞分离得到小球藻细胞沉淀和内含水稻叶片提取液的上清液。2.根据权利要求1所述的利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，其特征在于，步骤1)中，所述的新鲜的水稻叶片为水稻植株分蘖盛期叶片。3.根据权利要求1所述的利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，其特征在于，步骤1)中，所述的干燥为：置于40-70℃烘箱中烘干24-36h；所述的过筛采用筛孔径0.25-0.5mm。4.根据权利要求1所述的利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，步骤2)中，所述的水稻叶片干粉与超声用的水的料液比为1g：20～50mL；所述的超声波处理的条件为：超声功率30W～50W中，70℃～80℃超声提取30min～50min。5.根据权利要求4所述的利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的培养方法，步骤2)中，所述的水稻叶片干粉与超声用的水的料液比为1g：30mL；所述的超声波处理的条件为：超声功率40W中，75℃超声提取40min。6.根据权利要求1所述的利用水稻叶片提取液提高小球藻叶绿素产量的...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵艳，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33