从荞麦花粉中分离的鞣质类化合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了从荞麦花粉中分离的鞣质类化合物及其应用，属于食品、保健品、化妆品和医药领域。本发明专利技术从荞麦花粉或蜂花粉中提取鞣质类化合物，利用大孔树脂、MCI柱层析和ODS柱层析进行分离得到两种鞣质类化合物。经

Tannin compounds isolated from buckwheat pollen and their application

The present invention discloses tannin compounds isolated from buckwheat pollen and their application, belonging to the fields of food, health care products, cosmetics and medicine. Tannins are extracted from buckwheat pollen or bee pollen, and two tannin compounds are separated by macroporous resin, MCI column chromatography and ODS column chromatography. through

【技术实现步骤摘要】
从荞麦花粉中分离的鞣质类化合物及其应用
本专利技术涉及从荞麦花粉中分离的鞣质类化合物及其应用，属于食品、药品、保健品和化妆品领域。
技术介绍
荞麦花粉是蓼科荞麦属草本双子叶植物荞麦(Buckwheat)的花粉，荞麦蜂花粉是蜜蜂从荞麦花中采集花粉后，与自身腺体分泌的物质及唾液混合后，形成的不规则扁圆形团状物，富含人体所需的多种营养物质，具有多种生理功能。目前对荞麦花粉和蜂花粉的研究主要集中多糖和黄酮方面，荞麦花粉和蜂花粉多糖能降低四氧嘧啶所致高血糖大鼠的血糖值，黄酮对毛细血管壁具有很强的保护作用，能增强心脏的收缩，用于心悸、心脑衰弱和毛细血管脆弱等症状。而目前对荞麦花粉和蜂花粉用于美白化妆品、预防前列腺疾病方面研究的相关报道甚少，更无从了解这些功能的物质基础。
技术实现思路
本专利技术首次从荞麦花粉和荞麦蜂花粉中分离鉴定出一类鞣质类化合物，主要由1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-D-葡萄糖和1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-2-O-间-双没食子酰-D-葡萄糖二种成分组成。荞麦花粉和蜂花粉鞣质类化合物的提取制备方法如下：(1)乙醇提取物的制备：荞麦蜂花粉经粉碎后，加入体积分数为60-80％的乙醇溶液，荞麦蜂花粉与乙醇溶液的比例为1:(8-10)kg/L，于30-45℃条件下搅拌提取3-5h，过滤取上清液，如此重复2-3次，合并所得上清液减压浓缩后即得荞麦蜂花粉醇提物。(2)乙酸乙酯萃取物的制备将荞麦蜂花粉醇提物用2-5倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取二次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，得乙酸乙酯萃取物。(3)分离纯化将乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，大孔树脂为AB-8或X-5型，依次用去离子水、体积分数为30-95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，具体是用乙醇溶液洗脱是用30％、50％、95％体积浓度的乙醇溶液分别20L、40L、30L进行洗脱或者用40％、50％、75％体积浓度的乙醇溶液分别20L、40L、30L进行洗脱，收集以体积分数50％的乙醇溶液洗脱部分，减压浓缩后上样到MCI柱，依次用浓度30-50％的乙醇进行洗脱，TLC法跟踪检测洗脱液中的成分，并根据TLC检测结果将具有相同成分的洗脱液合并，得两个洗脱组分，减压浓缩后再分别将两个组分反复上ODS柱，用30-45％体积浓度的乙醇溶液洗脱，TLC法跟踪检测洗脱液中的成分，最后得二个单体化合物A，B，均为黄色无定形粉末，易溶于水、甲醇、乙醇等溶剂；本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次从荞麦花粉和荞麦蜂花粉中提取分离到1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-D-葡萄糖和1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-2-O-间-双没食子酰-D-葡萄糖两种化合物；本专利技术得到的乙醇提取物，乙酸乙酯萃取物，化合物A，化合物B浓度为1000μg/mL时，对酪氨酸酶活性的抑制作用分别达到50.27％、55.83％、68.86％、63.98％，具有美白的功效；本专利技术制备的乙酸乙酯萃取物、化合物A、化合物B均具有抑制前列腺炎症的功能，在对角叉菜胶所致大鼠前列腺炎症的抑制效果试验中，与模型组相比，乙酸乙酯萃取物对前列腺湿重、前列腺指数、IL-8和脾脏指数这四个指标有显著的抑制作用，显著性分析结果显示化合物A、化合物B有非常明显的差异。附图说明图1：化合物A的13CNMR谱图图2：化合物B的13CNMR谱图图3：化合物A的1HNMR谱图图4：化合物B的1HNMR谱图图5：化合物A的135dept谱图图6：化合物B的135dept谱图具体实施方式实施例1荞麦蜂花粉经粉碎后，加入体积分数为80％的乙醇溶液，荞麦蜂花粉与乙醇溶液的比例为1:10(kg/L)，于45℃条件下搅拌提取3h，过滤取上清液，如此重复3次，合并所得上清液减压浓缩后即得荞麦蜂花粉醇提物。将荞麦蜂花粉醇提物用2倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取二次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，得乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，大孔树脂为AB-8，依次用去离子水、体积分数为30％、50％、95％的乙醇溶液分别20mL、40mL、30mL进行梯度洗脱，收集以体积分数50％的乙醇溶液洗脱部分，减压浓缩后上样到MCI柱，依次用浓度30-50％的乙醇进行洗脱，TLC法跟踪检测洗脱液中的成分，并根据TLC检测结果将具有相同成分的洗脱液合并，得两个洗脱部分，减压浓缩后再分别将各部分反复上ODS柱，用30％体积浓度的乙醇溶液洗脱，TLC法跟踪检测洗脱液中的成分，最后得二个单体化合物A，B。实施例2化合物A、B结构鉴定由化合物A的1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)谱可知，δ7.08、δ7.05、δ6.92、δ6.87、δ6.82(2H，s)处共有5组质子信号，每组含2个H，说明该化合物存在对称结构。δ6.39处有一个H，J＝8.0，推测这个H为糖上的端基质子信号，δ5.98～δ4.31处为糖上的其他质子信号。从化合物A的13C-NMR(DMSO-d6，125MHz)谱可知，δ91.7、δ72.2、δ72.0、δ70.6、δ67.8、δ61.5处为吡喃葡萄糖基上的糖的6个碳信号。δ165.5～δ164.0、δ145.7～δ145.4、δ139.7～δ138.8、δ118.9～δ117.4、δ109.1～δ108.8处共有5组碳信号，每组含5个碳。从135dept谱中只见到δ109.1～δ108.8，为CH信号，其余为季碳。根据以上结果并参照相关文献可得该化合物含有5个没食子酰，综合分析得出该化合物为1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-D-葡萄糖。化合物B的1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)谱和13C-NMR(DMSO-d6，125MHz)谱与化合物A的类似。从化合物B的1H-NMR谱可见，δ6.46处有一个H(J＝8.0)，推测这个H为糖上的端基质子信号，δ6.04～δ4.31处为糖上的其他质子信号。从化合物B的13C-NMR谱可见，δ165.7～δ163.7、δ146.9～δ144.7、δ140.2～δ139.1、δ119.2～δ117.5、δ109.6～δ108.6处共有5组碳信号。另外，δ164.9，δ150.8，δ146.9，δ140.2，δ126.8，δ109.1有1组碳信号，这组碳信号应为一个没食子酰基上再连一个没食子酰。根据以上结果推测，结合化合物B的135dept谱图，确定该化合物为1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-2-O-间-双没食子酰-D-葡萄糖。下面实施例3和实施例4活性的研究以实施例1制备的乙醇提取物，乙酸乙酯萃取物，化合物A，化合物B为研究对象。实施例3对酪氨酸酶活性的抑制作用表1加样表按表1依次向试管中加入pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液，样品溶液，浓度为0.5g/mL的酪氨酸溶液，浓度为1mg/mL的熊果苷对照液，于35℃水浴10min，然后加入酪氨酸酶液，在35℃下孵育30min，迅速转入比色皿中，在475nm处测吸光度值。样品用空白对照1调零，阴性对照用空白对照2调零，阳性对照用空白对照3调零，抑制率的计算如下式式中：A1为样品吸光值；A2为阴性对照吸光值；A3为阳性对照吸光值。表2荞麦蜂花粉不同组分对酪氨酸酶活性的抑制作用(％)由表2的实验结果可知，乙醇提取物，乙酸乙酯萃取物，化合物A，化合物B对酪氨酸酶活本文档来自技高网...

【技术保护点】
花粉来源的鞣质类组合物，其特征在于，主要包括化合物A：1，2，3，4，6‑五‑O‑没食子酰‑D‑葡萄糖和化合物B：1，2，3，4，6‑五‑O‑没食子酰‑2‑O‑间‑双没食子酰‑D‑葡萄糖；所述花粉包括荞麦花粉和荞麦蜂花粉。

【技术特征摘要】
1.花粉来源的鞣质类组合物，其特征在于，主要包括化合物A：1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-D-葡萄糖和化合物B：1，2，3，4，6-五-O-没食子酰-2-O-间-双没食子酰-D-葡萄糖；所述花粉包括荞麦花粉和荞麦蜂花粉。2.一种制备权利要求1所述的鞣质类组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取荞麦花粉或荞麦蜂花粉粉碎，用乙醇溶液提取，过滤，取滤液，重复提取2-3次，合并乙醇提取液，减压浓缩得荞麦花粉乙醇提取物；(2)将荞麦花粉乙醇提取物用2-5倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取2-3次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，得乙酸乙酯萃取物；(3)分离：将乙酸乙酯萃取物上大孔树脂柱，依次用去离子水、体积分数为30-95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集以体积分数50％的乙醇溶液洗脱部分，减压浓缩后将所得洗脱物进行MCI柱层析，用乙醇溶液洗脱，TLC法跟踪检测，得两个洗脱组分，减压浓缩后再分别将两个组分反复上ODS柱，最后得二个单体化合物A，B。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取是用体积分数为60％～80％的乙醇溶液于30-45℃条件下搅拌提取3-5h，荞麦花粉与乙醇溶液的比例为1:(8-10)kg/L。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中大孔树脂为AB-8或X-5。5.根据权利要求2所述的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐德平，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32