一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记及其应用，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。(1)本发明专利技术所述分子标记具有良好的敏感性、特异性和重复性，具有敏感、特异、快速的优点，为我国动物源细菌磺胺类药物耐药基因的检测及流行病学调查提供新的技术手段；(2)本发明专利技术所述分子标记的应用方式，无需质粒DNA的提取，且经过三轮PCR可准确检测动物源性葡萄球菌磺胺类药物的耐药基因。

Molecular marker for detecting resistance gene of Staphylococcus sulfa drug and application thereof

The invention discloses a method for molecular marker and application of staphylococcal sulfa drug resistance gene detection, the molecular marker and its sequence: P1, SEQ ID NO.1 ~ 2; P2, SEQ ID NO.3 ~ 4; P3, SEQ ID NO.5 ~ 6. (1) has good sensitivity, specificity and reproducibility of the invention has the advantages of molecular markers, sensitive, specific and rapid, provide a new method for the detection and epidemiological investigation of animal source bacteria in China sulfonamides resistance genes; (2) the application of the invention of the molecular marker. No need to extract the plasmid DNA, and PCR after three resistance genes accurate detection of animal derived staphylococcal sulfonamides.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种采用分子生物学手段检测微生物耐药基因的方法，具体为一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记及其应用。
技术介绍
随着动物养殖业向规模化、集约化方向发展，饲养密度提高，应激因素增多，为疾病的流行提供了有利条件，导致动物细菌性疾病的危害加重。国内外大量资料表明，多年来由于临床抗生素广泛及不合理的使用，给细菌带来了选择压力，其最终结果是选择性保留了耐药能力强的致病菌，给感染性疾病的治疗带来了严重的危机。细菌耐药性已成为全球关注的热点。我国已成为世界上细菌耐药性最严重的国家之一。1997年解放军总医院报道大肠埃希菌对环丙沙星的耐药率从1994年的41.9％上升至1997年的60.4％。王红宁、朱力军、高松等的研究表明，鸡源、猪源大肠杆菌对常用抗菌药如氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类等产生的耐药率在38～95％，并且有70.2％以上的菌株是多重耐药；郝秀红、马聪等对临床病原菌的研究发现，大肠杆菌、沙门氏菌以及金葡萄球菌对庆大霉素、头孢唑啉、青霉素的平均耐药率超过50.0％。分子生物学方法在细菌耐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记，其特征在于，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记，其特征在于，所述分子标记及其序列为：P1，SEQIDNO.1～2；P2，SEQIDNO.3～4；P3，SEQIDNO.5～6。2.根据权利要求1所述的一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记，其特征在于，所述分子标记P1、P2和P3的上游引物5，端进行氨基化修饰并附加10个碱基T。3.权利要求1或2所述分子标记在制备检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因试剂盒中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒的组分包括：分子标记、dNTP、LATaq、PCR反应缓冲液、MgCl2、双蒸水。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的步骤包括：(1)取样：选取纯化后的葡萄球菌，划线接种培养基，形成单个菌落，向无菌EP管中加入10～60μL60％的甘油，用接种针挑取单菌落于甘油中洗涤数次，-20℃保存；(2)以步骤(1)收集的菌体作为PCR模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释200～5...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕少波，李苏杨，李卓才，
申请(专利权)人：苏州乔纳森新材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32