一种具有预防治疗肥胖作用的三萜化合物制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开了一种从五加植物中分离的三萜化合物齐墩果酸3‑O‑[β‑D‑吡喃葡萄糖‑(1→3)]‑β‑D‑吡喃半乳糖‑(1→2)‑α‑L‑吡喃阿拉伯糖苷(Glycoside St‑E2)的制备方法及其用途。本发明专利技术的制备方法步骤简单、提取效率高、产品纯度高。本发明专利技术所述三萜化合物在小鼠前体脂肪细胞培养试验中，发现其能通过AMPK‑PPARγ‑C/EBPα机制显著抑制脂肪形成，是预防改善肥胖的有效药物。

Three terpene compound with preventing and treating obesity effect, preparation method and application thereof

The invention discloses a separation from Acanthopanax plants in three monoterpenes oleanolic acid 3 O [beta D D-glucopyranose (1, 3)] beta D galactopyranose (1 - 2) alpha L pyran (Glycoside St Arabia glucoside E2) the preparation method and application thereof. The preparation method of the invention has the advantages of simple steps, high extraction efficiency and high product purity. The three terpene compounds in mouse preadipocyte culture test, it can through the AMPK PPAR C/EBP gamma alpha mechanism significantly inhibit fat formation, is an effective drug for prevention and improve obesity.

【技术实现步骤摘要】
一种具有预防治疗肥胖作用的三萜化合物制备方法及其用途
本专利技术涉及天然药物
，具体涉及一种五加植物中分离的具有预防治疗肥胖作用的三萜化合物齐墩果酸3-O-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)]-β-D-吡喃半乳糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(GlycosideSt-E2)的制备方法及其用途，尤其是在制备预防肥胖作用的食品及预防治疗肥胖作用的药品、保健品方面的用途。
技术介绍
近几十年，随着生活水平不断提高，生活方式不断改变，肥胖症的发病率呈逐年增加之势，并且低龄化趋势明显。肥胖人群的快速增多造成了严重的社会和经济挑战。另外肥胖也是癌症、糖尿病、高血压、高血脂、代谢症候群等各种成人疾病的原因，所以治疗肥胖是预防很多疾病的方法。目前，研究报道较多的减肥化药的减肥机理明确，药效研究深入，但是其具有副作用大的缺点；相对于减肥化药，中药成分复杂，研究中药减肥所用的实验模型比较简单，机理研究处于较低水平，而且对中药的活性成分研究不够深入。而本专利技术以中草药五加植物为原料，从中分离得到一种三萜化合物，对其从分子水平进行减肥机理的研究。五加植物的活性成分有很多生物活性，但是其减肥作用目前尚无相关研究报道。小鼠前脂肪细胞3T3-L1是用来研究脂肪形成分子机制的模型之一。诱导前脂肪细胞3T3-L1分化进入成熟的脂肪细胞中。分化后，成熟脂肪细胞就有了细胞内脂质。这个过程就叫脂肪形成.脂肪细胞储藏过量的能量在身体中并且释放一些控制许多不同信号通路的脂肪因子。脂肪细胞的分化带来细胞表型、激素平衡和转录因子表达的改变。在前脂肪细胞分化为脂肪细胞的过程中，PPARγ和C/EBPα调控相关基因的表达，对于脂肪积聚起关键的作用。本专利技术通过体外培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞，检测三萜化合物对其增殖和分化的影响，及对相关调控因子PPAPγ和C/EBPα的表达变化。同时通过对AMPK表达的检测，结果表明磷酸化AMPK能通过抑制转录因子PPARγ和C/EBPα的表达来抑制脂肪前体细胞的分化。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种五加植物中具有预防治疗肥胖作用的三萜化合物GlycosideSt-E2及其分离制备技术方法。本专利技术的化合物能通过AMPK-PPARγ-C/EBPα机制显著抑制脂肪形成，可以在药品、食品、保健品等领域作为一种更安全、更有效的预防治疗肥胖作用的活性成分的应用。本专利技术涉及一种式1三萜化合物GlycosideSt-E2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：将干燥五加植物用甲醇和/或乙醇为溶剂，在30～80℃提取1～3次，合并后减压回收溶剂后得浸膏；(2)脱脂：步骤(1)浸膏用石油醚进行脱脂处理；(3)提取：步骤(2)脱脂后浸膏上大孔树脂柱，用30％-100％的乙醇梯度洗脱，收集60％-95％乙醇部分，合并后回收乙醇，干燥至干膏；将干膏用硅胶拌匀，通过硅胶柱层析，用按体积比氯仿∶甲醇∶水为25-50∶1∶0、15-25∶1∶0、10-15∶1∶0、5-10∶1∶0.1梯度洗脱，其中，5-10∶1∶0.1部分再用按体积比氯仿∶甲醇∶水为5-10∶1∶0.1、4-6∶1∶0.15梯度洗脱，收集5-10∶1∶0.1部分，除去溶媒，经葡聚糖凝胶柱SephadexLH-20，以75％-100％甲醇洗脱得到式1化合物。所述的五加为糙叶五加(Acanthopanaxhenryi(Oliv.)Harms)、细柱五加(AcanthopanaxgracilistylusW.W.Smith)、吴茱萸五加(AcanthopanaxevodiaefoliusFranch.)、藤五加(Acanthopanaxleucorrhizus(Oliv.)Harms)、红毛五加(AcanthopanaxgiraldiiHarms)、短梗五加(AcanthopanaxbrachypusHarm)、柔毛五加(AcanthopanaxgracilistylusW.W.Smithvar.vilosulus(Harms)Li)、刺五加(Acanthopanaxsenticosus(Rupr.Maxim.)Harms)、无梗五加(Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.Maxim)Seem)、白毛五加(Acanthopanaxdivaricatusvar.albeofructus)、唐五加(AcanthopanaxseboldianusMakino)、岛五加(Acanthopanaxkoreanum)、异柱五加(AcanthopanaxsieboldianusMakino)、民家氏五加(Acanthopanaxdivaricatusf.inermis)、智异山五加(Acanthopanaxchiisanesis)中的一种或多种。本专利技术中所述的五加优选为糙叶五加。本专利技术中所述的提取方法为加热回流提取、闪式提取、超声提取、冷浸提取中的一种或多种。本专利技术中所述三萜化合物GlycosideSt-E2能通过AMPK-PPARγ-C/EBPα机制显著抑制脂肪形成。本专利技术中所述三萜化合物GlycosideSt-E2可用于制备具有预防治疗肥胖作用的药品、保健品。本专利技术中所述三萜化合物GlycosideSt-E2可用于制备具有预防肥胖作用的食品。在本专利技术中，如无特殊说明，当化合物名称与结构式存在矛盾时，以结构式为准。本行业的技术人员也应该了解，本专利技术式1所述的结构式有多种命名方式，本专利技术仅使用其中的一个名称，使用其他名称命名的式1所述结构式的制备方法或用途，在不脱离本专利技术范围的前提下，都应落入要求保护的范围内。附图说明图1三萜化合物GlycosideSt-E2对细胞活性的影响图2三萜化合物GlycosideSt-E2对脂肪积累的影响图3三萜化合物GlycosideSt-E2对脂肪形成基因PPARγ和C/EBPα的表达影响图4三萜化合物GlycosideSt-E2对PPARγ和C/EBPα的蛋白水平表达影响图5三萜化合物GlycosideSt-E2对AMPK通路的影响具体实施方式：结合具体实施方式对本专利技术作进一步说明，但本专利技术的内容并不仅仅限于所列举的实施方式。实施例1(1)提取：将干燥糙叶五加(含根、茎、叶)10kg粉碎，用100L乙醇为溶剂，在80℃下加热回流提取3次，合并后减压回收溶剂后得浸膏；(2)脱脂：步骤(1)浸膏用石油醚进行脱脂处理；(3)提取：步骤(2)脱脂后浸膏上D101大孔树脂柱，用30％-95％的乙醇梯度洗脱，收集80％-95％乙醇部分，合并后回收乙醇，干燥至干膏；将干膏用硅胶拌匀，通过硅胶柱层析，用按体积比氯仿∶甲醇∶水为42∶1∶0、24∶1∶0、14∶1∶0、9∶1∶0.1梯度洗脱，其中，9∶1∶0.1部分再用按体积比氯仿∶甲醇∶水为8∶1∶0.1、6∶1∶0.15梯度洗脱，收集8∶1∶0.1部分，除去溶媒，经葡聚糖凝胶柱SephadexLH-20，以85％甲醇洗脱得到式1化合物。实施例2(1)提取：将干燥细柱五加30kg粉碎，用200L甲醇为溶剂，在75℃加热回流提取3次，合并后减压回收溶剂后得浸膏；(2)脱脂：步骤(1)浸膏用石油醚进行脱脂处理；(3)提取：步骤(2)脱脂后浸膏上AB-8大孔树脂柱，用30％-100本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术涉及一种式1三萜化合物齐墩果酸3‑O‑[β‑D‑吡喃葡萄糖‑(1→3)]‑β‑D‑吡喃半乳糖‑(1→2)‑α‑L‑吡喃阿拉伯糖苷(Glycoside St‑E2)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：将干燥五加植物用甲醇和/或乙醇为溶剂，在30～80℃提取1～3次，合并后减压回收溶剂后得浸膏；(2)脱脂：步骤(1)浸膏用石油醚进行脱脂处理；(3)提取：步骤(2)脱脂后浸膏上大孔树脂柱，用30％‑100％的乙醇梯度洗脱，收集60％‑95％乙醇部分，合并后回收乙醇，干燥至干膏；将干膏用硅胶拌匀，通过硅胶柱层析，用按体积比氯仿∶甲醇∶水为25‑50∶1∶0、15‑25∶1∶0、10‑15∶1∶0、5‑10∶1∶0.1梯度洗脱，其中，5‑10∶1∶0.1部分再用按体积比氯仿∶甲醇∶水为5‑10∶1∶0.1、4‑6∶1∶0.15梯度洗脱，收集5‑10∶1∶0.1部分，除去溶媒，经葡聚糖凝胶柱Sephadex LH‑20，以75％‑100％甲醇洗脱得到式1化合物。

【技术特征摘要】
1.本发明涉及一种式1三萜化合物齐墩果酸3-O-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)]-β-D-吡喃半乳糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(GlycosideSt-E2)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：将干燥五加植物用甲醇和/或乙醇为溶剂，在30～80℃提取1～3次，合并后减压回收溶剂后得浸膏；(2)脱脂：步骤(1)浸膏用石油醚进行脱脂处理；(3)提取：步骤(2)脱脂后浸膏上大孔树脂柱，用30％-100％的乙醇梯度洗脱，收集60％-95％乙醇部分，合并后回收乙醇，干燥至干膏；将干膏用硅胶拌匀，通过硅胶柱层析，用按体积比氯仿∶甲醇∶水为25-50∶1∶0、15-25∶1∶0、10-15∶1∶0、5-10∶1∶0.1梯度洗脱，其中，5-10∶1∶0.1部分再用按体积比氯仿∶甲醇∶水为5-10∶1∶0.1、4-6∶1∶0.15梯度洗脱，收集5-10∶1∶0.1部分，除去溶媒，经葡聚糖凝胶柱SephadexLH-20，以75％-100％甲醇洗脱得到式1化合物。2.根据权利要求1所述的式1三萜化合物的制备方法，其特征在于，所述的五加为糙叶五加(Acanthopanaxhenryi(Oliv.)Harms)、细柱五加(AcanthopanaxgracilistylusW.W.Smith)、吴茱萸五加(AcanthopanaxevodiaefoliusFranch.)、藤五加(Acanthopanaxleucorrhizus(Oliv.)Harms)、红毛五加(AcanthopanaxgiraldiiHarms)、短梗五加(Acanthopana...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘向前，李芝，邹亲朋，戴玲，洪承宪，韩耀韩，
申请(专利权)人：长沙博海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43