HC‑067047在制备抗胶质瘤的药物或保健品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了瞬时感受器电位辣椒素4型(TRPV4)的阻滞剂HC‑067047在制备抗胶质瘤的药物或保健品中的应用，扩大了HC‑067047的应用范围，提高了其应用价值，给胶质瘤的治疗或保健带来了新的希望，并且，以HC‑067047作为先导化合物，通过结构修饰或改造提高活性或降低副作用，还有助于进一步开发新的抗胶质瘤的药物或保健品。

Application of HC 067047 in preparation of anti glioma drugs or health products.

The invention discloses a transient receptor potential vanilloid type 4 (TRPV4) application blocker HC 067047 in preparation of anti glioma drugs or health products, expand the scope of application of HC 067047, improves the application value, for the treatment or care of glioma brings new hope and in 067047 HC as a lead compound, by modification of the structure or increase activity or reduce the side effect, also contribute to the further development of health care products or anti glioma drugs new.

【技术实现步骤摘要】
HC-067047在制备抗胶质瘤的药物或保健品中的应用
本专利技术属于含有机有效成分的医药配制品
，涉及HC-067047在药物或保健品制备领域的新用途。
技术介绍
胶质瘤是颅内最多的肿瘤类型。据最新的统计显示：胶质瘤约占原发颅内肿瘤的26.9％，而占颅内原发恶性肿瘤的71％左右。近年来，胶质瘤的发病率呈逐年增加的趋势。由于胶质瘤的侵袭性生长方式，与周围的正常脑组织界限模糊，很难通过手术彻底清除。目前针对术后残留的胶质瘤细胞，主要采用放疗、化疗等措施来加以杀灭，然而这些术后残留病变对放疗、化疗等措施表现出显著的抵抗性，导致复发率明显高过其他肿瘤。过去的几十年来，尽管多种新兴的治疗手段不断取得进展，但胶质瘤的预后仍不尽如人意，胶质瘤患者的生存期依然未有明显改善。因此，针对胶质瘤的新且有效治疗策略和治疗药物是亟待解决的难题。瞬时感受器电位辣椒素4型(TRPV4:transientreceptorpotential,vanilloidtype4)属于TRP超家族的一员，为非选择型阳离子通道受体，主要调节钙离子的细胞内外转运。HC-067047是新发现的高效特异的TRPV4阻滞剂，目前作为一种科学研究试剂，主要用于TRPV4的阻断后效应的研究。迄今为止，尚无文献报道TRPV4及其阻滞剂HC-067047在胶质瘤中的作用。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于考察TRPV4及其阻滞剂HC-067047对胶质瘤的作用，以期开发出新的抗胶质瘤的药物或保健品，从而为胶质瘤的临床治疗或日常保健提供更多有效的备选药物或保健品。本专利技术研究发现，TRPV4在胶质瘤中高表达并促进细胞侵袭，而TRPV4的阻滞剂HC-067047具有抵抗胶质瘤的功能，主要通过阻断smallRho-GTPase家族信号通路，导致胶质瘤细胞的骨架重塑，减少细胞伪足，进而抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，在进一步的胶质瘤动物模型实验中也证实了上述结论。因此，本专利技术提供如下技术方案：HC-067047在制备抗胶质瘤的药物或保健品中的应用。进一步，所述抗胶质瘤是抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。进一步，所述抗胶质瘤是通过阻断smallRho-GTPase家族信号通路引起胶质瘤细胞骨架重塑进而抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。本专利技术的有益效果在于，本专利技术公开了TRPV4的阻滞剂HC-067047用于制备抗胶质瘤的药物或保健品的新用途，不仅扩大了HC-067047的应用范围，提高了其应用价值，给胶质瘤的治疗或保健带来了新的希望，并且，以HC-067047作为先导化合物，通过结构修饰或改造提高活性或降低副作用，还有助于进一步开发新的抗胶质瘤的药物或保健品。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：图1显示了HC-067047能够有效抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，而对胶质瘤细胞的增殖无影响，其中A为划痕实验结果(与DMSO组比较，p<0.01)，B为Transwell小室侵袭实验结果(与DMSO组比较，p<0.01)，C为流式细胞术检测细胞周期实验结果，D为CCK-8生长曲线测定结果。图2显示了HC-067047在胶质瘤细胞中能阻断smallRho-GTPase家族信号通路引起细胞骨架重塑进而抑制细胞的迁移和侵袭，其中A为100nM的HC-067047处理胶质瘤细胞后的免疫荧光染色实验结果，B为不同浓度(50nM、100nM)的HC-067047处理胶质瘤细胞后的免疫蛋白印记实验结果(*p<0.05；#p<0.01)。图3显示了HC-067047在皮下接种和原位接种的鼠模型上具有抑制胶质瘤迁移和侵袭的功能，其中A为小鼠皮下成瘤的在体图片及肿瘤体积示意图，B为小鼠颅内成瘤磁共振检测结果，C为颅内原位成瘤的小鼠的生活状态以及小鼠生存曲线，D为颅内原位成瘤的死亡小鼠大脑的HE染色结果。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。一、HC-067047能够有效抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，而对胶质瘤细胞的增殖无影响通过划痕实验与Transwell小室培养细胞穿透实验检测HC-067047对胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力的影响。通过流式细胞周期检测和CCK-8实验检测HC-067047对胶质瘤细胞增殖的影响。划痕实验：用0.25％的胰酶消化原代胶质瘤细胞(U87细胞)，计数适量的细胞数用完全培养基重悬后，加入6孔板中培养，至次日细胞完全贴壁后，PBS洗去漂浮细胞，分为两组(HC-067047组和DMSO组)，每组3个孔，每孔作3条划痕(用10μl移液器套枪头以直尺倚靠作划痕)，HC-067047组每孔加入100nM的HC-067047(以DMSO为溶剂)，DMSO组每孔加入等体积的溶剂DMSO，两组每孔再加入无血清F12/DMEM培养基继续培养，分别于划痕后0小时和24小时于显微镜下拍照，每孔随机选取5个视野，利用ImageJ分析细胞划痕的愈合面积。结果见图1A，原代胶质瘤细胞经100nM的HC-067047处理24小时后，划痕面积缩小了12％；而DMSO组划痕愈合情况良好，面积缩小了32％。Transwell小室培养细胞穿透实验：用0.25％的胰酶消化原代胶质瘤细胞(U87细胞)，计数适量的细胞数用无血清培养基重悬，使细胞密度达到1×106个/ml，分为两组(HC-067047组和DMSO组)，每组3个小室(8.0um)，每个预包被基质胶的小室的上室内加入上述细胞悬液200μl，HC-067047组的下室内加入10％血清培养基600μl和100nM的HC-067047(以DMSO为溶剂)，DMSO组的下室内加入10％血清培养基600μl和等体积的溶剂DMSO，24小时后取出小室，用棉签将小室内的基质胶和未穿过的细胞全部擦除，将小室放入4％多聚甲醛内固定15分钟，PBS洗涤2次，甲醇通透10分钟，PBS洗涤2次，结晶紫染色5分钟，PBS洗涤2次，将小室倒扣晾干后，小心取下小室下端的膜，用中性树脂封片，于显微镜下观察，随机采取5个视野的图像，Image-pro-plus6.0计数细胞。结果见图1B，原代胶质瘤细胞经100nM的HC-067047处理24小时后，穿过Transwell微孔的细胞数量较DMSO组减少了89％。流式细胞周期检测：将原代胶质瘤细胞(U87细胞)按1×106个细胞/孔培养在6孔板内，次日于细胞贴壁后，将六孔分为两组(HC-067047组和DMSO组)，HC-067047组每孔加入100nM的HC-067047(以DMSO为溶剂)，DMSO组每孔加入等体积的溶剂DMSO，24小时后弃去培养基，PBS洗涤2次，胰酶消化收集细胞，PBS洗涤2次，用4℃预冷的70％乙醇重悬并固定细胞，4℃冷藏过夜，次日取出细胞悬液，离心去固定液，细胞沉淀用PBS洗涤2次，用细胞周期测定试剂盒中的碘化丙啶染色液于室温下避光染色30分钟后，在流式细胞仪上检测细胞周期，分析细胞周期变化。结果见图1C，原代胶质瘤细胞经100nM的HC-067047处理24小时后，相对于DMSO组，细胞周期没有受到明显影响。CCK-8实验：将原代胶质瘤细胞(U本文档来自技高网...

【技术保护点】
HC‑067047在制备抗胶质瘤的药物或保健品中的应用。

【技术特征摘要】
1.HC-067047在制备抗胶质瘤的药物或保健品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗胶质瘤是抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨伟，欧阳庆，吴鹏飞，易良，许民辉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：重庆,50