含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用同源重组方法构建的含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒rVV‑CCL5‑SSTR2‑Luc+，该痘病毒的构建利用含人CCL5、SSTR2目的基因和Luciferase荧光素酶报告基因的穿梭质粒pSC65与痘病毒WR株具有相同的TK侧翼的特点，在痘病毒易感细胞BS‑C‑1中发生同源重组而将目的基因整合到痘病毒基因组中，实现重组痘病毒rVV‑CCL5‑SSTR2‑Luc+的构建任务；本发明专利技术制得的重组痘病毒rVV‑CCL5‑SSTR2‑Luc+能高效表达外源基因，同时CCL5与CIK细胞表面高表达的CCR5相匹配以及SSTR2定向诱导奥曲肽靶向肿瘤细胞具有独特优势，有利于在临床推广应用，用于各类肿瘤的治疗。

【技术实现步骤摘要】
含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒及其制备方法
本专利技术属于基因工程和肿瘤生物治疗领域，具体涉及一种含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒及其制备方法。
技术介绍
溶瘤痘病毒作为一种肿瘤治疗药物和基因治疗载体近年来发展迅速，痘病毒携带抗癌基因可提高其溶瘤效应，许多基因改造的靶向性溶瘤痘病毒相继进入临床试验，显示出广阔的应用前景。目前已进入临床试验的溶瘤痘病毒中，插入GM-CSF基因的Wyeth株重组痘病毒JX-594是最早进入临床试验的重组痘病毒，也是目前临床试验研究最多的重组痘病毒。在JX-594的已完成的Ⅰ、Ⅱ期临床试验中，并无明显客观疗效报道，为提高溶瘤痘病毒的疗效，Ⅲ期临床试验中JX-594瘤内注射联合化疗药物索拉菲尼协同抗肿瘤作用，该计划正在招募中，疗效还未可知。而进入临床试验的重组痘病毒给药方式为瘤内注射或静脉注射，由于各种免疫、生化或物理屏障的作用，导致病毒递送效率很低，病毒进入体内后很快被补体、抗病毒抗体及各种吞噬细胞等破坏，不能发挥有效的抗肿瘤作用，这也是之前的重组痘病毒未能发挥完全溶瘤作用的原因之一。CIK细胞具有向肿瘤组织聚集的特性，同时大量临床应用证明C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒，其特征在于：为含有人CCL5和人SSTR2基因的WR株重组痘病毒。

【技术特征摘要】
1.一种含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒，其特征在于：为含有人CCL5和人SSTR2基因的WR株重组痘病毒。2.权利要求1所述的含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：（1）分别以含人CCL5和人SSTR2cDNA序列的质粒为模板，采用如下引物进行PCR扩增，将PCR产物和pSC65质粒分别经内切酶酶切、电泳、切胶纯化回收，获得相应DNA片段，然后连接、转化，挑取阳性细菌克隆小提质粒，其中人CCL5基因插入p7.5启动子下游，人SSTR2基因插入pE/L启动子下游；阳性细菌克隆小提质粒经PCR、电泳和测序鉴定序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐慧，李丹洋，张锦锦，方敬敬，严新民，郭强，
申请(专利权)人：云南省第一人民医院，
类型：发明
国别省市：云南,53