用于犬科动物中呼吸系统疾病控制的物质和方法技术方案

本发明专利技术涉及分离的流感病毒，其能够感染犬科动物和在犬科动物中引起呼吸系统疾病。本发明专利技术还涉及用于诱导针对本发明专利技术的流感病毒的免疫应答的组合物和方法。本发明专利技术还涉及用于鉴定本发明专利技术的病毒和诊断本发明专利技术病毒对动物的感染的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
用于犬科动物中呼吸系统疾病控制的物质和方法本申请是申请日为2006年4月21日、专利技术名称为“用于犬科动物中呼吸系统疾病控制的物质和方法”的中国专利申请201310335954.3的分案申请。相关申请的参考本申请要求2005年4月21日申请的美国临时申请序号60/673,443的优先权，将该临时申请完整(包括任何附图、表、核酸序列、氨基酸序列和图)引入本文作为参考。专利技术背景“狗舍咳嗽”或者感染性气管支气管炎(ITB)是狗中的急性、传染性呼吸系统感染，其特征主要是咳嗽(Fordetal,1998)。犬ITB被认为是世界上狗的最普遍的感染性呼吸系统疾病，并且当狗在高密度群体环境如狗舍中居住时，爆发可以达到流行性比例。多数爆发是由于直接的狗－狗接触或者呼吸系统分泌物的气雾化(Fordetal,1998)。临床病征由细菌和病毒的一种或者组合感染引起，所述细菌和病毒可以在上呼吸道和下呼吸道的上皮组织中建群。犬科动物副流感病毒(CPiV)和支气管博德特氏菌(Bordetellabronchiseptica)细菌是从受侵袭的狗分离的最常见的生物，但是几种其他病毒，如犬科动物瘟热病毒(CDV)和犬科动物腺病毒－1和－2(CAV-1,CAV-2)，以及细菌如链球菌(Streptococcussp.)、Pasteurellamulticoda和大肠杆菌(Escherichiacoli)可以影响临床过程和结果(Fordetal,1998)。尽管在高密度群体中爆发最有效和快速发生，具有高的发病率，但是并发的呼吸系统感染和死亡是不常见的。尽管可以发生威胁生命的继发性细菌性肺炎，但是多数ITB病例是自身限制性的并且在没有任何治疗下消退(Fordetal,1998)。在1992年7月，推测为“狗舍咳嗽”的呼吸系统感染在新英格兰(NewEngland)、佛罗里达(Florida)、西弗吉尼亚(WestVirginia)、威斯康辛(Wisconsin)、堪萨斯(Kansas)、科罗拉多(Colorado)、俄克拉荷马(Oklahoma)和亚利桑那州(Arizona)的几个灵赛场(greyhoundtrack)变得流行。从兽医了解到，多数受侵袭的狗具有后来消退的轻微咳嗽，但是一打以上的灵患上了急性出血性肺炎，接着快速死亡(GreyhoundDailyNews,1999)。在1998年下半年到1999年上半年，在美国的竞赛灵狗舍中发生了几次“狗舍咳嗽”爆发，导致强制关闭赛场和隔离美国的所有竞赛灵数周(GreyhoundDailyNews,1999)。在佛罗里达的一个赛场(PalmBeachKennelClub)，在一天中几乎40％的狗群体中记录到咳嗽(来自WilliamDuggar博士的个人交流)。类似于1992年的爆发，该咳嗽在多数灵中消退，但是佛罗里达的10只狗死于“狗舍咳嗽”非特征性的出血性肺炎综合征(Putnam,1999)。在2003年3月－4月，在美国东部的灵赛场发生“狗舍咳嗽”的另一次爆发。认为该爆发在佛罗里达的四个赛场开始，并且因此几乎三周中止比赛和狗的隔离。在WestPalmBeach的赛场几乎25％的狗受到侵袭，而St.Petersburg的DerbyLane中1400条狗几乎50％发生咳嗽。再一次，多数狗恢复，但是一些狗死于呼吸系统感染。仅在DerbyLane的呼吸爆发的估计的经济影响为2百万美元。没有公开的报导记载在1992、1998-1999或2003年在竞赛灵狗舍中“狗舍咳嗽”流行的病因或者临床病理。假定该感染是由于CPiV和/或支气管博德特氏菌：狗舍咳嗽的两种最常见的病因。未证实的交流，如网站已经将在一些咳嗽的狗中报导的致命的出血性肺炎规因于β－溶血性马链球菌兽瘟亚种(Streptococcusequisubspecieszooepidemicus)，并且将该综合征称作“犬链球菌中毒性休克”。病毒从一个宿主物种传染到另一个是流感病毒的生态学和流行病学的关键特征(Webster,1998)。流感病毒的物种间传染的两个基本机制是可能的(Websteretal.,1992；Lipatovetal.,2004)。一种是基本上未变的病毒从一个物种直接转移到另一个物种。该机制的实例包括最近的家禽流感病毒的H5N1亚型对人的感染(Subbaraoetal.,1998；Peirisetal.,2004；Guanetal.,2004)和可能地1918年的大流行，称作西班牙流感(Reidetal.,2004)。第二种机制是流感病毒基因组的区段化性质的结果。用来自不同物种的病毒共感染宿主可以导致区段化病毒基因的重排列，和产生能够感染其他物种的重组体。例如，鸟类和人流感病毒之间基因重排列产生的新的病毒在1957和1968年导致人类流感大流行(Websteretal.,1992；Lipatovetal.,2004；Kawaokaetal.,1989)。未改变的流感病毒从自然宿主物种向不同物种的多数直接传播是最终事件，因为在新物种的个体之间的持续传播不能发生。多种病毒－宿主相互作用是复制和水平传播所必须的并且为流感病毒在新的宿主中的永续性提供了强大的屏障(Webbyetal.,2004)。因此，流感病毒的新的宿主特异性谱系的建立是不常见的并且仅仅在驯养的家禽、猪、马和人类中发生(Websteretal.,1992；Lipatovetal.,2004)。因为流感病毒感染的严重性质，所以仍然需要诊断、预防和治疗流感病毒感染的方法。专利技术概述本专利技术涉及分离的流感病毒，其能够感染犬科动物和在犬科动物中引起呼吸系统疾病。本专利技术还涉及用于诱导针对本专利技术的流感病毒的免疫应答的组合物和方法。本专利技术还涉及用于鉴定本专利技术的病毒和和诊断本专利技术的病毒对动物的感染的组合物和方法。附图简述本专利或者申请文件含有至少一副彩图。专利局将根据请求和在支付了必要的费用后提供具有彩图的本专利或专利申请公布的拷贝。图1A-1B显示了血凝素基因之间的系统发生关系。图1A显示了来自代表性犬、人、鸟类、猪和马分离群，包括作为外类群的A/Budgerigar/Hokkaido/1/77(H4)的HA基因树。图1B显示了使用A/Duck/Ukraine/63(H3)作为外类群，犬流感病毒HA基因与同一时期的和较老的马HA基因的树。通过近邻连接方法从核苷酸序列推论出系统树并且显示了≥90％的自展分析值。条形表示核苷酸改变数目/水平树枝的单位长度。图2A－2B显示了在肺中流感H3抗原的免疫组织化学检测。用针对HA血凝素的小鼠单克隆抗体检测肺组织切片并通过免疫过氧化物酶反应检测结合(褐色沉淀)。图2A显示了来自具有自发疾病的灵的支气管上皮。检测支气管上皮细胞细胞质和呼吸道腔和肺泡腔中巨噬细胞中的病毒H3抗原。图2B显示了用A/canine/Florida/43/04(H3N8)接种后5天，来自狗的支气管上皮。在支气管上皮细胞细胞质中检测到病毒H3抗原。比例尺，66μm。图3显示了在死于与流感病毒感染有关的出血性肺炎的灵支气管中特征性组织学改变。对组织用H&E染色。上图：具有纤毛上皮细胞、粘液细胞和基细胞的正常支气管。下图：来自患有自发性流感的灵的支气管。支气管纤毛上皮细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的犬流感病毒，其能够感染犬科动物，其中所述流感病毒是甲型流感病毒，其中所述流感病毒包含编码具有SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列的多肽或其功能和/或免疫原性片段的多核苷酸，或者所述多核苷酸编码与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列有99％或者更大的序列同一性的多肽或其功能和/或免疫原性片段。

【技术特征摘要】
2005.04.21 US 60/673,4431.分离的犬流感病毒，其能够感染犬科动物，其中所述流感病毒是甲型流感病毒，其中所述流感病毒包含编码具有SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列的多肽或其功能和/或免疫原性片段的多核苷酸，或者所述多核苷酸编码与SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列有99％或者更大的序列同一性的多肽或其功能和/或免疫原性片段。2.根据权利要求1的流感病毒，其中所述流感病毒包含具有SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75或77的任一个中所示的核苷酸序列的多核苷酸，或者所述多核苷酸与SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75或77的任一个中所示的核苷酸序列有98％或者更大的序列同一性。3.根据权利要求1的流感病毒，其中所述流感病毒是称作A/canine/Florida/43/04的病毒分离群、称作A/canine/Florida/242/2003的病毒分离群、称作canine/Jax/05的病毒分离群或称作canine/Miami/05的病毒分离群。4.分离的多核苷酸，其包含权利要求1－3任一项的流感病毒的基因组区段或者基因的全部或者部分。5.根据权利要求4的多核苷酸，其中所述流感病毒包含编码具有SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列的多肽的多核苷酸，或者所述多核苷酸编码与SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列有99％或者更大的序列同一性的多肽。6.根据权利要求4的多核苷酸，其中所述流感病毒包含具有SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75或77的任一个中所示的核苷酸序列的多核苷酸，或者所述多核苷酸与SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75或77的任一个中所示的核苷酸序列有98％或者更大的序列同一性。7.多核苷酸表达构建体，其包含权利要求4-6任一项的多核苷酸。8.权利要求4到6任一项的多核苷酸编码的经分离的多肽。9.包含权利要求1到3任一项的流感病毒的免疫原的组合物，其中所述免疫原能够诱导针对流感病毒的免疫应答，所述流感病毒能够感染犬科动物。10.根据权利要求9的组合物，其中所述病毒蛋白质、多肽或者肽包含SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列，或者所述多核苷酸编码与SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列有99％或者更大的序列同一性的多肽。11.根据权利要求9的组合物，其中所述病毒多核苷酸编码包含SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78任一个中所示的氨基酸序列的多肽。12.根据权利要求9-11任一项的组合物在制备用于在动物中诱导针对犬流感病毒的免疫应答的药物中的用途。13.根据权利要求12的用途，其中所述组合物包含病毒蛋白质、多肽或者肽，所述病毒蛋白质、多肽或者肽包含SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78任一个中所示的氨基酸序列。14.根据权利要求12的用途，其中所述免疫应答是保护性免疫应答，其预防或者阻止流感病毒对所述动物的感染。15.根据权利要求12的用途，其中所述组合物还包含佐剂。16.根据权利要求12的用途，其中所述动物是犬科动物。17.根据权利要求16的用途，其中所述犬科动物是驯养的狗。18.根据权利要求12的用途，其中经鼻或者经口施用所述组合物。19.重排列病毒，其包含权利要求1-3任一项的流感病毒的至少一种基因、基因组区段或者多核苷酸。20.疫苗，其包含权利要求1－3任一项的犬流感病毒。21.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒包含与SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列有99％或者更大的序列同一性的多肽，或其功能和/或免疫原性片段。22.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒包含编码具有SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列的多肽或其功能和/或免疫原性片段的多核苷酸或者所述多核苷酸编码与SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76或78的任一个中所示的氨基酸序列有99％或者更大的序列同一性的多肽。23.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒包含具有SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75或77的任一个中所示的核苷酸序列的多核苷酸，或者所述多核苷酸与SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75或77的任一个中所示的核苷酸序列有98％或者更大的序列同一性。24.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒是失活的或减毒的。25.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒在可药用载体或稀释剂中提供。26.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒包含编码包含SEQIDNO:33或SEQIDNO:34的氨基酸序列或其功能和/或免疫原性片段，或与SEQIDNO:33或SEQIDNO:34具有大于95％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列的血凝素(HA)的多核苷酸，其中所述HA蛋白包含在氨基酸序列的82位的丝氨酸、221位的亮氨酸、327位的苏氨酸和482位的苏氨酸。27.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒包含含有SEQIDNO:33或SEQIDNO:34的氨基酸序列或其功能和/或免疫原性片段，或与SEQIDNO:33或SEQIDNO:34具有大于95％的氨基酸序列的血凝素(HA)，其中所述HA蛋白包含在氨基酸序列的82位的丝氨酸、221位的亮氨酸、327位的苏氨酸和482位的苏氨酸。28.权利要求20的疫苗，其中所述流感病毒包含编码包含SEQIDNO:16或SEQIDNO:32的氨基酸序列或其成熟形式，或与SEQIDNO:16或SEQIDNO:32或其成熟形式具有大于95％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列的血凝素(HA)的多核苷酸。29.权利要求20的疫苗，其中所述多核苷酸包含SEQIDNO:15或SEQIDNO:31的核苷酸序列或与SEQIDNO:15或SEQIDNO:31有98％或更高序列同一性的核苷酸序列。30.重组病毒载体或多核苷酸载体，其包含编码具有SEQIDNOs:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、33、34、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、或78任...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·C·克劳福德，P·J·吉布斯，E·J·杜博维，R·O·多尼斯，J·卡茨，A·I·克利莫夫，N·J·考克斯，W·L·卡斯尔曼，
申请(专利权)人：佛罗里达大学研究基金公司，疾病控制和预防中心，健康公共事业部部长所代表的美国政府，康乃尔研究基金会有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US