循环肿瘤细胞染色的质控品及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种循环肿瘤细胞染色的质控品，包括免疫磁珠、循环肿瘤细胞系和白细胞，所述循环肿瘤细胞系富集并结合至免疫磁珠上。本发明专利技术还涉及一种循环肿瘤细胞染色的质控品的制备方法。本发明专利技术的循环肿瘤细胞染色的质控品可监测染色试剂盒是否出现异常，具有便捷、操作简单等优点，质控结果可直接反应CTC染色试剂盒的质量。

Quality control product for dyeing of circulating tumor cells and preparation method thereof

The invention relates to a quality control product for dyeing a circulating tumor cell, comprising an immunomagnetic bead, a circulating tumor cell line and a white cell, wherein the circulating tumor cell line is enriched and bound to an immunomagnetic bead. The invention also relates to a method for preparing a quality control product for dyeing of circulating tumor cells. The quality control product of the circulating tumor cell of the invention can monitor whether the reagent kit is abnormal or not, and has the advantages of convenience and simple operation, and the quality control result can directly reflect the quality of the CTC staining kit.

【技术实现步骤摘要】
循环肿瘤细胞染色的质控品及其制备方法
本专利技术涉及细胞染色，特别涉及循环肿瘤细胞染色的质控品及其制备方法。
技术介绍
循环肿瘤细胞(CTC，CirculatingTumorCell)是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。CTC检测通过捕捉检测外周血中恒量存在的CTC，监测CTC类型和数量变化的趋势，以便实时监测肿瘤动态、评估治疗效果以及实现实时个体治疗等。目前国内在循环肿瘤细胞染色试剂盒方面已存在多个相关专利文件，但是尚无对循环肿瘤细胞染色试剂进行质控的专利文件。在实验室中，当我们对循环肿瘤细胞进行染色时，因肿瘤病人的病情轻重血液中分离出的循环肿瘤细胞个数存在差异、染色过程中由于染色步骤多而导致的细胞损失、以及损失量的多少、染色试剂保存不当或者因其他原因造成的试剂出现问题，出现假阳性/假阴性及非特异性等结果，无法做出准确的判断。细胞的损失、假阳性/假阴性的出现造成的数据差异，都会给后续的分析、诊断带来极大的影响。公开号为CN103472227的中国专利技术专利公开了一种循环肿瘤细胞的染色试剂盒，该试剂盒中免疫磁性微球的抗体富集及捕获CTC细胞时，同时血液白细胞也有富集及捕获，因此无法排除血液白细胞的干扰，分析出的假阳性率较高。美国Fluxion公司生产的微流体CTC细胞筛选分析系统(IsoFluxTMSystem950-0100)，及其配套试剂CTC富集试剂盒(CTCEnrichmentKit，P/N:910-0091)富集的CTC使用其配套染色试剂盒染色，该试剂盒由于染色操作步骤多，细胞损失量大，无法对CTC染色试剂盒使用过程中因保存、操作不当等因素进行质控。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种可对循环肿瘤细胞染色进行质控的循环肿瘤细胞染色的质控品，并提供上述试剂的制备方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种循环肿瘤细胞染色的质控品，包括免疫磁珠、循环肿瘤细胞系和白细胞，所述循环肿瘤细胞系富集并结合至免疫磁珠上。一种循环肿瘤细胞染色的质控品，包括结合缓冲液和置于所述结合缓冲液中的上述的循环肿瘤细胞染色的质控品。一种循环肿瘤细胞染色的质控品的制备方法，将免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得所述免疫磁珠的工作液；将所述免疫磁珠的工作液、白细胞和循环肿瘤细胞系进行混合，混合后分离以去除液体，然后于去除液体后剩余的免疫磁珠中加入固定液进行固定，获得所述质控品。本专利技术的有益效果在于：(1)针对现有技术中染色试剂盒不存在质控产品，设计免疫磁珠，利用免疫磁珠结合肿瘤细胞，以循环肿瘤细胞系和白细胞模拟捕获循环肿瘤细胞制备质控品，之后对使用不同的CTC染色试剂盒进行质控，从而对CTC染色试剂盒进行质控；并通过对比实验对在使用CTC染色试剂盒时是否出现评价或验证测量精密度、测量准确度、试剂变化进行判断；(2)本专利技术可以对CTC染色试剂盒使用过程中因保存、操作不当等因素进行质控，可进行染色质控，判断假阳性率；本专利技术可监测染色试剂盒是否出现异常，具有便捷、操作简单等优点，质控结果可直接反应CTC染色试剂盒的质量。附图说明图1为本专利技术实施例二的循环肿瘤细胞染色的质控品中的SK-OV-3细胞系的质控结果的截图；图2为本专利技术实施例二的循环肿瘤细胞染色的质控品中的白细胞的质控结果的截图；图3为本专利技术实施例三的循环肿瘤细胞染色的质控品中的SK-OV-3细胞系的质控结果的截图；图4为本专利技术实施例三的循环肿瘤细胞染色的质控品中的白细胞的质控结果的截图；图5为本专利技术实施例四的循环肿瘤细胞染色的质控品中的SK-OV-3细胞系的质控结果的截图；图6为本专利技术实施例四的循环肿瘤细胞染色的质控品中的白细胞的质控结果的截图。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。所述EpCAM免疫磁珠、EGFR免疫磁珠、HER2免疫磁珠和MUC1免疫磁珠分别为EpCAM抗体、EGFR抗体、HER2抗体和MUC1抗体分别与磁性微球偶联得到的免疫磁珠。所述该富集是指免疫磁珠与循环肿瘤细胞系和白细胞在外加磁场作用下进行富集。缩略词的含义如下：CTC：循环肿瘤细胞；EpCAM：上皮细胞粘附分子；EGFR：上皮生长因子受体。HER2：表皮生长因子受体2MUC1：即MUC1粘蛋白(以下简称MUC1)，是一种Ⅰ型跨膜蛋白，由于MUC1在肿瘤组织中的异常表达，使其成为一种潜在的肿瘤生物学标志物。本专利技术最关键的构思在于：设计将循环肿瘤细胞系富集并结合至多重抗体免疫磁珠，以实现染色质控。请参照图1以及图2，一种循环肿瘤细胞染色的质控品，包括免疫磁珠、循环肿瘤细胞系和白细胞，所述循环肿瘤细胞系富集并结合至免疫磁珠上。本专利技术的质控品的工作原理为：利用循环肿瘤细胞系作为阳性对照，白细胞作为阴性对照，对实验样本使用的试剂进行质控。通过对照组试剂是否异常来反应实验组试剂是否正常。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：(1)针对现有技术中染色试剂盒不存在质控产品，设计免疫磁珠，利用免疫磁珠结合肿瘤细胞，以循环肿瘤细胞系和白细胞模拟捕获循环肿瘤细胞制备质控品，之后对使用不同的CTC染色试剂盒进行质控，从而对CTC染色试剂盒进行质控；并通过对比实验对在使用CTC染色试剂盒时是否出现评价或验证测量精密度、测量准确度、试剂变化进行判断；(2)本专利技术可以对CTC染色试剂盒使用过程中因保存、操作不当等因素进行质控，可进行染色质控，判断假阳性率；本专利技术可监测染色试剂盒是否出现异常，具有便捷、操作简单等优点，质控结果可直接反应CTC染色试剂盒的质量。进一步的，免疫磁珠为多重抗体免疫磁珠，所述多重抗体免疫磁珠包括至少两种免疫磁珠。进一步的，所述多重抗体免疫磁珠包括EpCAM免疫磁珠、EGFR免疫磁珠、HER2免疫磁珠、CD45免疫磁珠和MUC1免疫磁珠中的至少两种。进一步的，所述多重抗体免疫磁珠由EpCAM免疫磁珠和EGFR免疫磁珠组成。进一步的，所述循环肿瘤细胞系为SK-OV-3细胞系、NCI-H1975细胞系、MCF7细胞系、A549细胞系或SiHa细胞系。根据上述描述可知，在阴性富集中，CD45免疫磁珠可与白细胞结合。HER2免疫磁珠和MUC1免疫磁珠在液态活检中作用于循环肿瘤细胞。本专利技术可选择EpCAM免疫磁珠和EGFR免疫磁珠共同作用，具有增强特异性的技术效果。具体的说，EpCAM是上皮细胞粘附分子，可与循环肿瘤细胞特异性结合。EGFR抗体与磁珠结合，可与循环肿瘤细胞的表皮生长因子受体结合。使用两种磁珠起到增加富集效率作用，增强特异性。本专利技术使用的免疫磁珠种类的多少取决于细胞的结合的特异性，特异性结合越强，使用的免疫磁珠种类越少越好，可避免磁珠过量导致目标细胞被磁珠包裹与遮挡。免疫磁珠的选择可根据目标细胞的种类、特异性结合因子进行。例如，在使用的SK-OV-3为上皮来源的卵巢癌细胞系，EpCAM和EGFR两种免疫磁珠可与SK-OV-3细胞特异性结合，达到富集的目的。因此，上皮来源的细胞均可与这两种免疫磁珠结合。免疫磁珠可以选择Fluxion公司产品，其加入的样本量优选为每个样本加入30μLEpCAM和20μLEGFR。循环肿瘤细胞除了SK-OV-3细胞系，还可以为NCI-H1975[H-1975,H1975](CRL-59本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种循环肿瘤细胞染色的质控品，其特征在于，包括免疫磁珠、循环肿瘤细胞系和白细胞，所述循环肿瘤细胞系富集并结合至免疫磁珠上。

【技术特征摘要】
1.一种循环肿瘤细胞染色的质控品，其特征在于，包括免疫磁珠、循环肿瘤细胞系和白细胞，所述循环肿瘤细胞系富集并结合至免疫磁珠上。2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞染色的质控品，其特征在于，所述免疫磁珠为多重抗体免疫磁珠，所述多重抗体免疫磁珠包括至少两种免疫磁珠。3.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞染色的质控品，其特征在于，所述多重抗体免疫磁珠由EpCAM免疫磁珠和EGFR免疫磁珠组成。4.根据权利要求1或3所述的循环肿瘤细胞染色的质控品，其特征在于，所述循环肿瘤细胞系为SK-OV-3细胞系、NCI-H1975细胞系、MCF7细胞系、A549细胞系或SiHa细胞系。5.一种循环肿瘤细胞染色的质控品，其特征在于，包括结合缓冲液和置于所述结合缓冲液中的权利要求1-4任意一项所述的循环肿瘤细胞染色的质控品。6.一种循环肿瘤细胞染色的质控品的制备方法，其特征在于，将免疫磁珠与结合缓冲液混合，获得所述免疫磁珠的工作液；将所述免疫磁珠的工作液、白细胞和循环肿瘤细胞系进行混合，混合后分离以去除液体，然后于去除液体后剩余的免疫磁珠中加入固定液进行固定，获得所述质控品。7.根据权利要求6所述的循环肿瘤细胞染色的质控品的制备方法，其特征在于，加入固定液进行固定之后，进行分离以去...

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊，张茜，代文俊，
申请(专利权)人：亚能生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44