本发明专利技术公开了一种高定植的微生物制剂，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR‑29(Enterococcus durans CR‑29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR‑19(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides SR‑19)。还公开了高定植的微生物制剂在制备调整肠道微生物菌群制剂、在制备预防和/或治疗肠道致病菌中的应用。
【技术实现步骤摘要】
一种高定植的微生物制剂及其应用
本专利技术属于益生菌领域，具体涉及一种高定植的微生物制剂及其应用。
技术介绍
肠道内细菌从来源上分，有原籍菌和过路菌两种。前者并非由口摄入，在肠道内保持稳定的群体；而后者则由口摄入并经胃肠道，原籍菌是使过路菌不能定殖的因素。胃肠道的原籍菌群能抑制其它外来微生物在肠道中定殖或增殖，这就是定殖抗力，也称竞争排斥。这种定殖抗力的产生是因为体内微生物与致病菌竞争肠道上皮的吸附位点而产生的。如果这些吸附位点被较多有益微生物所占据，病原微生物就会被排斥。阻止病原菌的定殖和侵入，如阻止沙门氏菌对宿主的感染。这种豁附定植可能是因为益生菌菌表面有能与肠粘膜细胞牢固结合的特异性物质，推测可能是脂磷壁酸或肽聚糖，或细胞表面层蛋白，或者其中二者，或三者全部。这些特异性物质被称为粘附素，乳酸菌通过粘附素与肠粘膜紧密结合，在肠粘膜表面定殖占位，是形成生理屏障的主要组成部分。该屏障可以抵御外来细菌的入侵，维持肠道内微生态平衡。研究益生菌的定殖抗力与生态占位，对益生菌在人体能否发挥出应有作用至关重要。近年来，益生菌的理论与应用得到迅猛发展。而利用生物之间天然互惠共生现象发展多种微生物的混合培养具有广阔的应用前景，也是当下研究相对不足领域之一。天然或人工混合共生体系是靠原始协同、互惠共生和偏利共生来维持稳定状态，微生物菌群中存在的拮抗与互助是群落的重要自稳机制。人体的肠道菌群即是一个巨大的微生物共生平衡体系，其中包括人体与肠道菌群的互惠共生，原核生物与真核生物的共生，细菌与细菌之间的共生等，而天然的益生菌共生体制剂在人体微生态环境中具有有更大的缓冲能力与环境适应能力，其中在医药与食品领域人工的复合微生态制剂以使用超过百年。目前，尚对具有协同关系菌株的筛选和组合缺乏有效的方法与理论指导，同时，益生菌剂组方及其比例关系以便提高其功能而缺乏理论依据。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人经过不断实验，令人惊喜的发现了一种高定植的益生菌共生体，其在肠道定植方面产生了预料不到的效应，本专利技术即是基于以上发现而完成。本专利技术的专利技术人在传统的民族乳制品中筛选出一对益生菌共生体肠膜明串株菌SR-19与耐久肠球菌CR-29，并对其互惠共生作用以及该益生菌共生体对其他人体肠道益生菌的促进生长能力进行研究。本专利技术的第一个方面在于公开一种高定植的微生物制剂，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR-29(EnterococcusduransCR-29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19(Leuconostocmesenteroidessubsp.mesenteroidesSR-19)。优选的，所述一种高定植的微生物制剂中，耐久肠球菌CR-29与肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19的cfu/g比例为1:10-10:1。本专利技术的第二个方面在于公开一种制备第一方面高定植的微生物制剂的培养方法，采用液体培养基，肠膜明串珠菌肠膜亚种均SR-19与耐久肠球菌CR-29的接种量分别为5％与7％，初始pH6.8；初始培养温度为44℃(1.0-1.5小时)；中段培养温度为42℃(2.0-2.5小时)，发酵中段为pH5.9；末段培养温度为38℃(1.5-2.0小时)；振荡频率140r/min的条件下培养，培养4h后添加补充营养物质继续培养，至活菌数不小于1010cfu/mL收获；培养出的活菌体可通过低温离心分离获得；所述液体培养基，即工业培养基，的配方为：脱脂奶粉100g/L,酵母粉10g/L，蔗糖50g/L，柠檬酸钠2g/L,醋酸钠0.5g/L，pH6.8-7.2；所述补充营养物质的配方为：牛肉膏与胡萝卜原汁2:1体积混合溶液。本专利技术的第三个方面在于公开一种制备高定植的微生物制剂的菌粉，其特征在于，通过以下方法制成：活菌数不小于1010cfu/mL益生菌共生体发酵液经过滤或离心，利用冻干保护剂进行真空冷冻干燥，冻干曲线为：起始温度-42℃，预冻4小时，-42℃至-5℃每小时升温5℃；-5℃至11℃每小时升温2℃，从10℃至40℃每小时升温5℃；从40℃至50℃每小时升温2℃，在30小时内完成冻干制备，制得共生体益生菌菌粉；以上操作均在无菌条件下进行。本专利技术的第四个方面在于公开一种高定植的微生物制剂，含有所述微生物制剂和药学上可以接受的辅料。本专利技术的第五个方面在于公开高定植的微生物制剂在制备调整肠道微生物菌群制剂中的应用。本专利技术的第六个方面在于公开高定植的微生物制剂在制备耐胃酸、耐肠液、耐胆汁的调整肠道微生物菌群制剂中的应用。本专利技术的第七个方面在于公开高定植的微生物制剂在制备预防和/或治疗肠道致病菌中的应用。本专利技术的第八个方面在于公开高定植的微生物制剂在制备耐胃酸、耐肠液、耐胆汁的预防和/或治疗肠道致病菌中的应用。在一些实施例中，该共生体益生菌的生产过程是通过：接种、复壮、发酵培养、分离、冻干等步骤。具体的，共生体益生菌肠膜明串珠菌肠膜亚种SR-19与耐久肠球菌CR-29的接种量5％与7％，培养基为：牛奶(羊奶或马奶)、脱脂奶粉、乳清蛋白、维生素K、矿物元素为原料，初始培养温度为44℃(1.0-1.5小时)；中段培养温度为42℃(2.0-2.5小时)；末段培养温度为38℃(1.5-2.0小时)。初始pH6.8，发酵中段为pH5.9，振荡频率140r/min的条件下培养，培养4h后以补料速度6.3m/h补充营养物质(牛肉膏与胡萝卜汁2:1混合溶液)继续培养至收获可使益生菌菌活菌数不小于1010cfu/mL以上。培养出的活菌体可通过低温离心分离(6000r/min)获得，利用海藻酸钠、木糖醇、初乳蛋白(2:1:1)作为冻干保护剂进行真空冷冻干燥，冻干曲线为：起始温度-42℃，预冻4小时，-42℃至-5℃每小时升温5℃；-5℃至11℃每小时升温2℃，从10℃至40℃每小时升温5℃；从40℃至50℃每小时升温2℃，在30小时内完成冻干制备，制的共生体益生菌菌粉。所述培养基与冻干保护剂配方：益生菌共生体的培养基详细配方，包括各组分和含量；实验室培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸氢二铵2g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，琼脂15g，加蒸馏水至1000mL，pH6.4。工业化培养基组成为:脱脂奶粉100g/L,酵母粉10g/L，蔗糖50g/L，柠檬酸钠2g/L,醋酸钠0.5g/L，pH6.8-7.2。补充营养物质：牛肉膏BeefExtract与胡萝卜原汁2:1混合溶液按发酵总量的0.8％补充；培养基121℃湿热灭菌，备用。冻干保护剂：海藻酸钠50％、木糖醇25％、初乳蛋白25％(2:1:1)作为冻干保护剂按1:10比例与发酵液干物质混合。本专利技术涉及的主要仪器及设备：4℃冰箱SC-276，海尔集团；-86℃冰箱DW-FW3_51，中科美菱低温科技有限公司；电子天平JA2003，上海精密科学仪器有限公司；数显酸度计PHS-2_5，上海仪电科学仪器股份有限公司；无菌超净工作台SW-CJ一1F，苏净AIRTECH；高压灭菌锅LDZX-30KB，上海三申医疗器械有限公司；恒温培养箱JB202，上海锦屏仪器仪表有限公司；无菌过滤装置250mL，美国Nalgene公司；数显恒温水浴锅HH本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高定植的微生物制剂，其特征在于，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR‑29(Enterococcus durans CR‑29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR‑19(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides SR‑19)。
【技术特征摘要】
1.一种高定植的微生物制剂，其特征在于，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR-29(EnterococcusduransCR-29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19(Leuconostocmesenteroidessubsp.mesenteroidesSR-19)。2.如权利要求1所述的一种高定植的微生物制剂，其特征在于，所述一种高定植的微生物制剂中，耐久肠球菌CR-29与肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19的cfu/g比例为1:10-10:1。3.一种制备如权利要求1-3任一所述一种高定植的微生物制剂的培养方法，其特征在于，采用液体培养基，肠膜明串珠菌肠膜亚种均SR-19与耐久肠球菌CR-29的接种量分别为5％与7％，初始pH6.8；初始培养温度为44℃(1.0-1.5小时)；中段培养温度为42℃(2.0-2.5小时)，发酵中段为pH5.9；末段培养温度为38℃(1.5-2.0小时)；振荡频率140r/min的条件下培养，培养4h后添加补充营养物质继续培养，至活菌数不小于1010cfu/mL收获；培养出的活菌体可通过低温离心分离获得；所述液体培养基，即工业培养基，的配方为：脱脂奶粉100g/L,酵母粉10g/L，蔗...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭聃洋，王金达，李永平，张宇，孙嘉祺，
申请(专利权)人：长春中俄科技园股份有限公司，郭聃洋，
类型：发明
国别省市：吉林,22
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