一种益生菌共生体、培养方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种益生菌共生体，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR‑29(Enterococcus durans CR‑29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR‑19(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides SR‑19)。可以作为耐久肠球菌和/或肠膜明串珠菌肠膜亚种菌益生菌替代剂，用于在食品、食品添加剂、保健食品、人类药品、兽药、动物饲料，还可以作为一种益生菌促生长剂，用于在食品、食品添加剂、保健食品、人类药品、兽药、动物饲料。

Probiotic symbiont, culture method and Application

The invention discloses a probiotic symbionts, including CGMCC No. 11870 Enterococcus CR 29 (Enterococcus durans CR 29) intestinal membrane and CGMCC number 11869 Leuconostoc intestinal bacteria SR 19 membrane subspecies (Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides SR 19). Can be used as Enterococcus and / or Leuconostoc mesenteroides subsp. Bacteria probiotic alternative agent used in food, food additives, health food, human medicine and veterinary medicine, animal feed, can also be used as a probiotic growth promoting agent, used in food, food additives, health food, medicine, veterinary medicine, human animal feed.

【技术实现步骤摘要】
一种益生菌共生体、培养方法及应用
本专利技术属于益生菌领域，具体涉及一种益生菌共生体、培养方法及应用。
技术介绍
益生菌(Probiotics)是一类通过改善宿主肠道微生物菌群的平衡而发挥作用的活性微生物，是人体肠道重要的生理细菌，对机体有多种其它正常生理菌群无法比拟的生理作用。其生理作用包括：调整肠道菌群；提高蛋白质和维生素的代谢；防止便秘；产生抗菌素：缓解乳糖不耐症；治疗肝损伤；降低结肠癌的发病率；抗肿瘤；增强免疫系统；降低胆固醇；治疗泌尿系统感染等。肠道菌群的组成对人体营养、免疫、癌症、衰老等有着密切的关系，促进肠道中有益菌的增殖，抑制有害细菌的生长，对于高血压、高血脂、心脏病、糖尿病和癌症等生活习惯病防治方面具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人经过不断实验，从一种传统的乳制品中分离一对天然互惠共生乳酸菌，共生体益生菌SR-19与CR-29，都为革兰氏阳性，兼性厌氧菌，其在相互促进生长方面产生了预料不到的效应，还通过验证过的生产工艺对该共生体益生菌进行高密度发酵，本专利技术即是基于以上发现而完成。本专利技术的第一个方面在于公开一种益生菌共生体，其特征在于，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR-29(EnterococcusduransCR-29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19(Leuconostocmesenteroidessubsp.mesenteroidesSR-19)。优选的，所述益生菌共生体中，耐久肠球菌CR-29与肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19的cfu/g比例为1:10-10:1。进一步优选的，所述益生菌共生体中，耐久肠球菌CR-29与肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19的cfu/g比例为5：7。本专利技术的第二个方面在于公开一种制备益生菌共生体的培养方法，采用液体培养基，肠膜明串珠菌肠膜亚种均SR-19与耐久肠球菌CR-29的接种量分别为5％与7％，初始pH6.8；初始培养温度为44℃(1.0-1.5小时)；中段培养温度为42℃(2.0-2.5小时)，发酵中段为pH5.9；末段培养温度为38℃(1.5-2.0小时)；振荡频率140r/min的条件下培养，培养4h后添加补充营养物质继续培养，至活菌数不小于1010cfu/mL收获；培养出的活菌体可通过低温离心分离获得；所述液体培养基，即工业培养基，的配方为：脱脂奶粉100g/L,酵母粉10g/L，蔗糖50g/L，柠檬酸钠2g/L,醋酸钠0.5g/L，pH6.8-7.2；所述补充营养物质的配方为：牛肉膏与胡萝卜原汁2:1体积混合溶液。本专利技术的第三个方面在于公开一种益生菌共生体的菌粉，通过以下方法制成：活菌数不小于1010cfu/mL益生菌共生体发酵液经过滤或离心，利用冻干保护剂进行真空冷冻干燥，冻干曲线为：起始温度-42℃，预冻4小时，-42℃至-5℃每小时升温5℃；-5℃至11℃每小时升温2℃，从10℃至40℃每小时升温5℃；从40℃至50℃每小时升温2℃，在30小时内完成冻干制备，制得共生体益生菌菌粉；以上操作均在无菌条件下进行。本专利技术的第四个方面在于公开一种耐久肠球菌和/或肠膜明串珠菌肠膜亚种菌益生菌替代剂，用于在食品、食品添加剂、保健食品、人类药品、兽药、动物饲料。本专利技术的第五个方面在于公开一种益生菌促生长剂，用于在食品、食品添加剂、保健食品、人类药品、兽药、动物饲料；所述益生菌选自保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌、粪肠球菌的一种或多种。在一些实施例中，该共生体益生菌的生产过程是通过：接种、复壮、发酵培养、分离、冻干等步骤。具体的，共生体益生菌肠膜明串珠菌肠膜亚种SR-19与耐久肠球菌CR-29的接种量5％与7％，培养基为：牛奶(羊奶或马奶)、脱脂奶粉、乳清蛋白、维生素K、矿物元素为原料，初始培养温度为44℃(1.0-1.5小时)；中段培养温度为42℃(2.0-2.5小时)；末段培养温度为38℃(1.5-2.0小时)。初始pH6.8，发酵中段为pH5.9，振荡频率140r/min的条件下培养，培养4h后以补料速度6.3m/h补充营养物质(牛肉膏与胡萝卜汁2:1混合溶液)继续培养至收获可使益生菌菌活菌数不小于1010cfu/mL以上。培养出的活菌体可通过低温离心分离(6000r/min)获得，利用海藻酸钠、木糖醇、初乳蛋白(2:1:1)作为冻干保护剂进行真空冷冻干燥，冻干曲线为：起始温度-42℃，预冻4小时，-42℃至-5℃每小时升温5℃；-5℃至11℃每小时升温2℃，从10℃至40℃每小时升温5℃；从40℃至50℃每小时升温2℃，在30小时内完成冻干制备，制的共生体益生菌菌粉。所述培养基与冻干保护剂配方：益生菌共生体的培养基详细配方，包括各组分和含量；实验室培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸氢二铵2g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，琼脂15g，加蒸馏水至1000mL，pH6.4。工业化培养基组成为:脱脂奶粉100g/L,酵母粉10g/L，蔗糖50g/L，柠檬酸钠2g/L,醋酸钠0.5g/L，pH6.8-7.2。补充营养物质：牛肉膏BeefExtract与胡萝卜原汁2:1混合溶液按发酵总量的0.8％补充；培养基121℃湿热灭菌，备用。冻干保护剂：海藻酸钠50％、木糖醇25％、初乳蛋白25％(2:1:1)作为冻干保护剂按1:10比例与发酵液干物质混合。本专利技术涉及的主要仪器及设备：4℃冰箱SC-276，海尔集团；-86℃冰箱DW-FW3_51，中科美菱低温科技有限公司；电子天平JA2003，上海精密科学仪器有限公司；数显酸度计PHS-2_5，上海仪电科学仪器股份有限公司；无菌超净工作台SW-CJ一1F，苏净AIRTECH；高压灭菌锅LDZX-30KB，上海三申医疗器械有限公司；恒温培养箱JB202，上海锦屏仪器仪表有限公司；无菌过滤装置250mL，美国Nalgene公司；数显恒温水浴锅HH-2，金坛市富华仪器有限公司；HITACHIU-2000型紫外可见分光光度计；EppendorfTGL-168高速台式离心机；OLYMPUSBX50型光学显微镜；OLYMPUSBX50型摄像系统；722型分光光度计；厌氧罐(BBLGaspark)；OLYMPUSPM-20型摄像系统；250m1聚丙烯离心管、(Gilson)、涂菌平皿为国产；巴斯德吸管、吸管、微量加样器8道排枪，Eppendorf公司。主要实验材料：耐久肠球菌CR-29，肠膜明串株菌SR-19，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，编号分别为CGMCC编号11870、和CGMCC编号11869。保加利亚乳杆菌，嗜酸乳杆菌来自长春中俄科技园中俄生物工程与技术联合研发中心；青春双歧杆菌来自俄罗斯莫斯科大学；粪肠球菌F-3由俄罗斯圣彼得堡国立大学基础医学与医疗技术系提供。肠道沙门氏菌(Salmonellaenterica)、福氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)、单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytonenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、艰难梭菌(Clostridiumdifficile)、大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种益生菌共生体，其特征在于，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR‑29(Enterococcus durans CR‑29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR‑19(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides SR‑19)。

【技术特征摘要】
1.一种益生菌共生体，其特征在于，其包括CGMCC编号11870的耐久肠球菌CR-29(EnterococcusduransCR-29)和CGMCC编号11869的肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19(Leuconostocmesenteroidessubsp.mesenteroidesSR-19)。2.如权利要求1所述益生菌共生体，其特征在于，所述益生菌共生体中，耐久肠球菌CR-29与肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19的cfu/g比例为1:10-10:1。3.如权利要求2所述益生菌共生体，其特征在于，所述益生菌共生体中，耐久肠球菌CR-29与肠膜明串珠菌肠膜亚种菌SR-19的cfu/g比例为5：7。4.一种制备如权利要求1-3任一所述益生菌共生体的培养方法，其特征在于，采用液体培养基，肠膜明串珠菌肠膜亚种均SR-19与耐久肠球菌CR-29的接种量分别为5％与7％，初始pH6.8；初始培养温度为44℃(1.0-1.5小时)；中段培养温度为42℃(2.0-2.5小时)，发酵中段为pH5.9；末段培养温度为38℃(1.5-2.0小时)；振荡频率140r/min的条件下培养，培养4h后添加补充营养物质继续培养，至活菌数不小于1010cfu/mL收获；培养出的活菌体可通过低温离心分离获...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭聃洋，王金达，
申请(专利权)人：长春中俄科技园股份有限公司，郭聃洋，
类型：发明
国别省市：吉林,22