生产壳聚糖分解酶的微生物和利用其的植物栽培用组合物及栽培方法技术

本发明专利技术涉及生产壳聚糖分解酶的微生物和利用其的植物栽培用组合物及栽培方法，尤其，作为基于胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)和爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)的生菜栽培方法，提供如下方法：与以往的壳聚糖分解微生物相比，能够以更快的速度进行分解，在由利用这种微生物的壳聚糖发酵物适用于生菜栽培的情况下，不仅促进生菜的生育，而且增加功能性(多酚、类黄酮及供电子能力)含量。

【技术实现步骤摘要】
生产壳聚糖分解酶的微生物和利用其的植物栽培用组合物及栽培方法
本专利技术涉及与以往的微生物相比对壳聚糖的分解具有优秀的功效的胶质类芽孢杆菌(PaenibacillusmucilaginosusC23)(保藏编号：KACC91963P)、爱媛类芽孢杆菌(BacillusehimensisC25)(保藏编号：KACC91964P)的微生物及利用其的植物栽培用组合物和栽培方法，是与现有的传统栽培相比增大多酚、类黄酮含量及供电子能力的生菜栽培方法。
技术介绍
由于产业发达引起的环境变化，难以将自然状态本来的农作物进行管理，为了速效使用很多农药，从而因无差别杀菌力与有害菌一同还消灭有益菌。并且，在农药的杀菌力消失的时间点上，微生物重新开始进行繁殖，而与有益的微生物相比，病原性微生物大部分先进行繁殖，由于上述病原性微生物也具有对农药的耐性，在重新使用农药的情况下，导致需要以高浓度处理更多的量的恶性循环。由此，众所周知，在土壤中分解有机质，且对病原菌起到拮抗作用的有益菌的势力逐渐减弱，从而发生盐分累积、农药残留、农民的农药中毒等。最近，由于生活水平的提高，现代人以健康、乐活等对环保产品重视，进而，更关注指向健康的功能性农产品，这些产品受到瞩目。由此，为了生产环保产品，低农药、无农药及环保耕作法成为必备要素，但是，实际上，在不使用农药、肥料等的农产品的生产中维持具有商品性的水平来进行栽培是几乎不可能的。因此，作为环保农产品生产的环节，对利用微生物的环保耕作法的研究活跃地进行，从而与很多文献一同，上市了多种微生物及与微生物相关的产品，但大部分为由多种微生物混合而制备的有效微生物(EM菌，EffectiveMicroorganisms)形态，未得到正规的验证，从而实际上，难以找到可期待显著功效的产品。并且，在功能性农产品的情况下，当人为地涂敷有效成分或栽培时，以土壤处理灌注等的方法进行生产，但生产未得到对有效性的明确验证的、作为功能性的作用不显著的多个产品，导致消费者不信任的情况多。现有技术文献专利文献专利文献1：韩国公开特许10-2011-0091346
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供微生物及利用其的功能性植物栽培用组合物及栽培方法，上述微生物与以往的壳聚糖分解微生物相比，壳聚糖分解能力优秀，促进植物生长，增大植物，尤其生菜的多酚、类黄酮含量，并增加供电子能力(EDA)。为了达成上述目的，本专利技术的特征在于，提供生产壳聚糖分解酶的胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)及爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)。并且，本专利技术的另一特征在于，利用上述胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)或爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)分解壳聚糖，并将由微生物分解的壳聚糖发酵物施肥于生菜，来栽培生菜的生菜栽培方法。在上述内容中，壳聚糖分解酶可使用胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)、爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)中的一种，还能够以10-90：90-10的重量比混合这种菌株来使用。以如上方式构成的本专利技术中，利用胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)、爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)微生物将生菜生育促进及增收效果提高了116.4％，且毫无肥害。并且，当利用上述微生物时，在无处理组及对照组中，从收获之后第0天开始，减少了多酚含量，但本专利技术中的生菜呈现从7天之后开始减少多酚含量的倾向，从而具有长时间包含多酚成分的优点。并且，当利用上述微生物时，在无处理组的情况下，类黄酮的总含量从第0天开始逐渐减少，但在对照组和微生物处理组中，类黄酮的总含量呈现在第7天增加而从第14天开始减少的倾向，其含量具有在微生物处理组中呈现高的优点。并且，当利用上述微生物时，在无处理组的情况下，供电子能力的程度从第0天开始急剧减少，但在对照组和微生物处理组中，供电子能力的程度呈现在第7天增加而从第14天开始减少的倾向，其含量具有在微生物处理组中呈现高的优点。并且，在使用本专利技术的多种微生物栽培生菜的情况下，对生育促进、多酚及类黄酮含量增大及供电子能力增加有效。本专利技术公开利用上述微生物胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)、爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)促进植物生育，增大多酚、类黄酮含量，并增加供电子能力的生菜栽培，但不局限于一种植物，可适用于多种植物群。附图说明图1为已分离的生产壳聚糖分解酶(Chitosanase)的微生物的照片。图2为基于爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)微生物的16S核糖体脱氧核糖核酸(16SrDNA)的同源性的结果图。图3为基于胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)微生物的16S核糖体脱氧核糖核酸的同源性的结果图。图4为胶质类芽孢杆菌C23(保藏编号：KACC91963P)和爱媛类芽孢杆菌C25(保藏编号：KACC91964P)的混合微生物的菌株生长及壳聚糖分解酶活性变化的图表。图5为利用乙醇提取的按栽培时间的生菜提取液的照片。图6为利用乙醇提取的按肥料的生菜提取液的照片。图7为生菜提取液的多酚总含量的图表照片。图8为表示生菜提取液的类黄酮的总含量的图。图9为表示生菜提取液的供电子能力的图。具体实施方式以下，参照附图对本专利技术的优选实施例进行说明。实施例1.微生物的选定准备胶体壳聚糖(colloidalchitosan)以如下方式准备了胶体壳聚糖：在10g的壳聚糖中添加400mL的蒸馏水，并搅拌之后，在其中重新添加100mL的1M的乙酸(aceticacid)，并搅拌一宿之后，利用过滤纸进行过滤，并利用1N的氢氧化钠(NaOH)使过滤液中和之后，在6000rpm条件下，离心分离20分钟，来仅收集沉淀物，利用蒸馏水水洗3次，并在乙酸钠缓冲液(sodiumactetatebuffer)(pH5.5)中以成为1％的方式进行悬浮。菌株的分离图1为本专利技术的已分离的生产壳聚糖分解酶的菌株C23、C25的的照片。为了分离壳聚糖分解酶生产率微生物，在韩国庆北地区采集的1g的土壤中，添加9mL的灭菌蒸馏水，并充分混合来准备了土壤悬浮液。在营养琼脂(Nutrientagar)固体培养基中涂抹0.1mL的稀释液，并在37℃温度下培养一宿之后，分离了通过肉眼观察到的形态不同的菌株，上述稀释液以如下方式制备而成：在0.9mL的灭菌蒸馏水中放入0.1mL的土壤悬浮液，并进行连续稀释。为了确认壳聚糖分解酶生产率，针对已分离的多个菌株，在包含0.1％的胶体壳聚糖的壳聚糖分解酶营养需求(CMA，Chitosanaseminimalagar)培养基中，划线接种之后，在37℃温度下，培养3天，并确认了在菌株生育周边生成的透明环。其结果，在韩国庆北地区耕作地土壤中可分离出26个菌株，将这些作为对象，在CDA培养基中确认壳聚糖分解酶生产率，最终，可确认在菌株C23和菌株C25中在培养基周边生成透明的环。已分离的菌株的鉴定图2和图3为基于C23微生物和C25微生物的16S核糖体脱氧核糖核酸的同源性的结果相关图。为了鉴定壳聚糖分解酶生产率微生物，进行革兰氏染色之本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胶质类芽孢杆菌C23，其保藏编号为KACC91963P，其特征在于，生成壳聚糖分解酶。

【技术特征摘要】
1.一种胶质类芽孢杆菌C23，其保藏编号为KACC91963P，其特征在于，生成壳聚糖分解酶。2.一种爱媛类芽孢杆菌C25，其保藏编号为KACC91964P，其特征在于，生成壳聚糖分解酶。3.一种植物栽培用组合物，其特征在于，包含权利要求1的胶质类芽孢杆菌C23或其培养物或权利要求2的爱媛类芽孢杆菌C25或其培养物。4.一种植物栽培用组合物，其特征在于，包含权利要求1的胶质类芽孢杆菌C23的壳聚糖分解物或权利要求2的爱媛类芽孢杆菌C25的壳聚糖分解物。5.一种植物栽培方法，其特征在于，在植物中施肥利用保藏编号为KACC91963P的胶质类芽孢杆菌C23或保藏编号为KACC91964P的爱媛类芽孢杆菌C2...

【专利技术属性】
技术研发人员：李炫锡，崔真荣，崔元日，郑熙暻，郑留锡，
申请(专利权)人：株式会社可伶格林，
类型：发明
国别省市：韩国,KR