一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂，包括罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)TR02和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)TR08；所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)TR02，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC No.M 2016546；所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)TR08，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO.M 2016548。本发明专利技术提供的复合微生物制剂培养条件简单、发酵时间短、容易保存，适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂。
技术介绍
溃疡性结肠炎(UC)、隐窝炎和罗恩氏病是炎性肠病(IBD)的主要类型，所述炎性肠病的特征在于肠中的慢性炎症。临床症状是腹泻、腹痛、偶然性直肠出血、体重减轻、疲倦和有时发热。尽管会发生在任何年龄，IBD最常见于青少年和年轻的成年人中，所以这些人可能遭受延迟的发育和矮化的生长。资料显示，每年美国UC患病率为200/10万人，治疗UC的花费在1至1.5亿美元左右，截止到2012年，UC患者总数是2000年的2.5倍，且复发率达72％；近年来我国UC的患病人数呈明显上升趋势。在医学上，通过减少炎症并从而控制胃肠道征状来治疗IBD。但是，目前尚不能在医学上治愈IBD。IBD的临床进程有很大差异，具有轻度至中度征状的患者无需住院治疗，但是，10-15％的患者会发生该疾病的严重进程，其在许多情况下继之以外科手术，结肠切除术可以消除UC，但是会降低生活质量和增加并发症的风险。用于治疗IBS的药物已经获得普及，尽管它们在临床试验中的效力是不大的，并且它们的临床实用性受到不利副作用的限制，可利用的药物包括：使用5-对氨水杨酸(5-ASA)、皮质类固醇和免疫调节药物。通常使用5-ASA进行轻度至中度IBD征状的长期治疗，而皮质类固醇和免疫调节药物被用于治疗严重的征状；腹泻或腹痛作为5-ASA的副作用而出现，而皮质类固醇的长期使用经常显示出严重的副作用，包括骨质减轻、感染、糖尿病、肌肉消瘦和精神病学障碍；免疫调节药物会抑制免疫系统，这会控制IBD征状。但是，产生的免疫受损的状态会使患者易感许多疾病。血清素能性药剂已经表现出对IBS的总体征状的效力，但是，最近关于安全性的忧虑已经严重地限制了它们的应用。益生菌被定义为“活的微生物，其在以特定数目摄入以后，会发挥超出固有的基础营养以外的健康益处”(ArayaM.等人,2002；GuarnerF.等人,1998)。来自双歧杆菌属的几种乳酸细菌和种是益生菌，这暗示，已经证实它们会促进特定健康效应。益生细菌必须满足与没有毒性、生存力、附着和有益效果有关的几个要求。然而，现有益生菌对治疗肠炎效果不佳。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的第一目的在于提供一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂。本专利技术的第二目的在于提供上述复合微生物制剂在制备抗菌药物中的应用。本专利技术的第三目的在于提供上述复合微生物制剂在制备治疗胃肠道疾病药物中的应用。本专利技术的第四目的在于提供上述复合微生物制剂在制备治疗肠炎药物中的应用。技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂，包括罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08；所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02，保藏在中国典型培养物保藏中心，，保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学，邮政编码为430072，保藏编号为：CCTCCNo.M2016546，保藏日期为2016年10月10日；所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08，保藏在中国典型培养物保藏中心，，保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学，邮政编码为430072，保藏编号为：CCTCCNO.M2016548，保藏日期为2016年10月10日。优选地，所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的质量比为(1-1.5)：1，优选1.2:1。罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的生理活性特征如下：所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02在MRS培养基平板上菌落较小，乳白色，直径1-2mm，表面平滑，边缘较规则。所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02菌体为杆状，革兰氏染色阳性，不形成芽孢，产生乳酸，兼性厌氧。罗伊氏乳杆菌的16SrDNA序列如SEQIDNo.1所示。将所测16SrDNA序列通过BLAST比对，鉴定其为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)。鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的生理活性特征如下：所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08在MRS培养基平板上菌落较小，乳白色，直径1-2mm，表面平滑，边缘较规则。所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08菌体为杆状，革兰氏染色阳性，不形成芽孢，产生乳酸，兼性厌氧。鼠李糖乳杆菌的16SrDNA序列如SEQIDNo.2所示。将所测16SrDNA序列通过BLAST比对，鉴定其为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)。所述的复合微生物制剂是在制备抗菌药物中的应用。所述的复合微生物制剂是在制备治疗胃肠道疾病药物中的应用。所述的复合微生物制剂是在制备治疗肠炎药物中的应用。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点是：(1)本专利技术提供的复合微生物制剂对多种病原菌具有抑制作用；对病原菌的作用方式多样化；繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用；抗逆能力强等优点。(2)本专利技术提供的复合微生物制剂培养条件简单、发酵时间短、容易保存，适于工业化生产，具有良好的开发应用前景。附图说明图1为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的菌落图。图2为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的菌落放大图。图3为菌种第一批次功能性评价生长曲线。图4为菌种第二批次功能性评价生长曲线。图5为菌株耐酸实验结果图。图6为乳酸菌数量与肠炎小鼠的体重关系曲线。图7为乳酸菌数量与肠炎小鼠的结肠长度关系曲线。图8为治疗前后肠炎小鼠切片图。图9为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的菌落图。图10为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的菌落放大图。图11为菌种第一批次功能性评价生长曲线。图12为菌种第二批次功能性评价生长曲线。图13为菌株耐酸实验结果图。图14为鼠李糖乳杆菌数量与肠炎小鼠的体重关系曲线。图15为鼠李糖乳杆菌数量与肠炎小鼠的结肠长度关系曲线。图16为治疗前后肠炎小鼠切片图。图17为鼠李糖乳杆菌TR08与罗伊氏乳杆菌TR02混合培养液抑菌效果图。具体实施方式下面结合实验例详细阐述本专利技术的应用。实施例1罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的分离1、菌种和培养基和培养条件(1)菌源来自中国某军区健康士兵粪便。(2)培养基平板培养基：1000mL蒸馏水，蛋白胨10g，葡萄糖20g，酵母粉9g，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸三铵2g，半胱氨酸0.5g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，吐温1ml，琼脂粉15-20g，pH5.5-6.5。2、菌株的分离和鉴定(1)菌株的分离预先经灭菌处理后的手套箱中取适量新鲜粪便置于盛装有无菌培养基的无菌试管中，充分震荡涡旋混匀；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂，其特征在于：包括罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)TR02和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)TR08；所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)TR02，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC No.M 2016546，保藏日期为2016年10月10日；所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)TR08，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO.M 2016548，保藏日期为2016年10月10日。

【技术特征摘要】
1.一种低pH条件下抑菌复合微生物制剂，其特征在于：包括罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08；所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNo.M2016546，保藏日期为2016年10月10日；所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李珮铷，贾长生，边高瑞，
申请(专利权)人：天益健康科学研究院镇江有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32