采用NS3捕获肽的受试者抗HCV抗体检测测定制造技术

本发明专利技术提供了使用NS3捕获肽用于检测样品中的受试者抗HCV抗体的方法、试剂盒和组合物。在某些实施方案中，一起采用了至少两种NS3解旋酶（NS3h）捕获肽和至少两种缀合肽（例如NS3h缀合肽），其允许在一步式测定中的受试者抗体检测的宽动态范围。在其他实施方案中，提供了在不使用还原剂的情况下检测NS3特异性受试者抗体的方法。在一些实施方案中，NS3特异性受试者抗体用NS3缀合肽‘双击’进行检测（例如，在洗涤之前和之后均添加缀合肽至样品中）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】采用NS3捕获肽的受试者抗HCV抗体检测测定专利
本专利技术提供了使用NS3捕获肽用于检测样品中的受试者抗HCV抗体的方法、试剂盒和组合物。在某些实施方案中，至少两种NS3解旋酶（NS3h）捕获肽和至少两种缀合肽（例如NS3h缀合肽）一起采用，其允许在一步式测定中的受试者抗体检测的宽动态范围。在其他实施方案中，提供了在不使用还原剂的情况下检测NS3特异性受试者抗体的方法。在一些实施方案中，NS3特异性受试者抗体用NS3缀合肽‘双击（doubleshot）’进行检测（例如，在洗涤之前和之后均添加缀合肽至样品中）。专利技术背景根据WHO统计，全世界多达1.7亿人感染丙型肝炎病毒（HCV），这是肝脏病毒感染。75%至85%的感染HCV的人进展至慢性感染，这些病例中的约20%发展了慢性丙型肝炎并发症，包括在感染20年后的肝硬化或肝细胞癌。目前对HCV感染的推荐治疗是干扰素和利巴韦林药物的组合，然而，治疗并非在所有情况下都是有效的，并且在丙型肝炎相关终末期肝病中指明了肝移植。目前，不存在可用于预防HCV感染的疫苗，因此必须采取避免感染的所有预防措施。因此，灵敏的HCV检测测定对于公共安全是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测受试者中的丙型肝炎病毒（HCV）感染的方法，其包括：a）使初始生物样品与第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽以及第一可检测标记的缀合肽和第二可检测标记的缀合肽接触，以生成包含所述初始生物样品、所述第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽以及所述第一缀合肽和第二缀合肽的混合生物制品，其中所述第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽：i）各自包含编码至少一种HCV NS3解旋酶表位的氨基酸序列；和ii）具有不同的氨基酸序列，其中所述初始生物样品被怀疑含有受试者抗体，并且其中所述受试者抗体在所述生物样品中不是纯化形式，b）在这样的条件下温育所述混合的生物样品，所述条件使得：所述第一NS3h捕获...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.29 US 62/0722661.一种检测受试者中的丙型肝炎病毒（HCV）感染的方法，其包括：a）使初始生物样品与第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽以及第一可检测标记的缀合肽和第二可检测标记的缀合肽接触，以生成包含所述初始生物样品、所述第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽以及所述第一缀合肽和第二缀合肽的混合生物制品，其中所述第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽：i）各自包含编码至少一种HCVNS3解旋酶表位的氨基酸序列；和ii）具有不同的氨基酸序列，其中所述初始生物样品被怀疑含有受试者抗体，并且其中所述受试者抗体在所述生物样品中不是纯化形式，b）在这样的条件下温育所述混合的生物样品，所述条件使得：所述第一NS3h捕获肽特异性结合所述受试者抗体中的至少一种，以形成第一捕获复合物，并且所述第一缀合肽结合所述第一捕获复合物中的所述受试者抗体，以形成第一可检测复合物，和所述第二NS3h捕获肽特异性结合所述受试者抗体中的至少一种，以形成第二捕获复合物，并且所述第二缀合肽结合所述第二捕获复合物中的所述受试者抗体，以形成第二可检测复合物；c）洗涤所述混合的生物样品，以生成经洗涤的样品；和d）检测所述第一可检测复合物和/或第二可检测复合物的存在，从而检测所述受试者中的过去或现有HCV感染的存在，其中与仅使用所述第一NS3h捕获肽或第二NS3h捕获肽相比，在所述混合的生物样品中所述第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽两者的存在扩展了用于定性检测所述受试者抗体的动态范围。2.权利要求1的方法，其中所述第二NS3h捕获肽的所述氨基酸序列比所述第一NS3h捕获肽长至少两倍。3.权利要求1的方法，其中所述第一缀合表位和第二缀合表位对于NS3h表位是特异性的。4.权利要求1的方法，其中所述第一NS3h捕获肽与HCVNS3解旋酶结构域1具有至少90%的序列同一性，并且长度不超过250个氨基酸。5.权利要求1的方法，其中所述第一NS3h捕获肽与HCVNS3解旋酶结构域2具有至少90%的序列同一性，并且长度不超过250个氨基酸。6.权利要求1的方法，其中所述第二NS3h捕获肽与具有结构域1、2和3的全长NS3解旋酶具有至少95%的序列同一性。7.权利要求1的方法，其中所述第二NS3h捕获肽包含具有结构域1、2和3的全长NS3解旋酶序列。8.权利要求1的方法，其中所述第二NS3h捕获肽的所述氨基酸序列与所述全长HCV解旋酶具有至少99%的序列同一性。9.权利要求1的方法，其中所述第二NS3h捕获肽的所述氨基酸序列包含具有结构域1、2和3的全长NS3解旋酶序列。10.一种试剂盒或系统，其包含：a）第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽，其中所述第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽：i）各自包含编码至少一种HCVNS3解旋酶表位的氨基酸序列；ii）具有不同的氨基酸序列，iii）能够结合生物样品中的至少一种受试者抗体用于形成捕获复合物，和b）第一缀合肽和第二缀合肽，其中所述第一缀合肽和第二缀合肽能够结合所述捕获复合物中的所述受试者抗体。11.权利要求10的试剂盒或系统，其进一步包括：c）含有所述受试者抗体的所述生物样品，并且其中所述受试者抗体在所述生物样品中不是纯化形式。12.一种组合物，其包含：a）第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽，其中所述第一NS3h捕获肽和第二NS3h捕获肽：i）各自包含编码至少一种HCVNS3解旋酶表位的氨基酸序列；ii）具有不同的氨基酸序列，iii）能够结合生物样品中的至少一种受试者抗体用于形成捕获复合物，和b）第一缀合肽和第二缀合肽，其中所述第一缀合肽和第二缀合肽能够结合所述捕获复合物中的所述受试者抗体。13.权利要求12的组合物，其进一步包括：c）含有所述受试者抗体的所述生物样品，并且其中所述受试者抗体在所述生物样品中不是纯化形式。14.一种检测受试者中的丙型肝炎病毒（HCV）感染的方法，其包括：a）使怀疑含有受试者抗体的样品与下述接触：i）第一NS3h捕获肽，其包含与HCVNS3解旋酶的结构域1和/或结构域2具有至少90%序列同一性的氨基酸序列，其中所述第一NS3h捕获肽长度不超过350个氨基酸；ii）第二NS3h捕获肽，其包含与全长HCVNS3解旋酶具有至少95%序列同一性的氨基酸序列，所述全长HCVNS3解旋酶包含HCVNS3解旋酶的结构域1、2和3，和b）在这样的条件下温育所述样品，所述条件使得所述第一NS3h捕获肽特异性结合所述受试者抗体中的至少一种，以形成第一复合物，并且所述第二NS3h捕获肽特异性结合所述受试者抗体中的至少一种，以形成第二复合物；和c）检测所述第一复合物和/或第二复合物的存在，从而检测所述受试者中的过去或现在HCV感染的存在。15.权利要求14的方法，其中与仅使用所述第二NS3h肽相比，所述样品中所述第一NS3h捕获肽连同第二NS3h捕获肽的存在扩展了用于定性检测所述受试者抗体的上限动态范围。16.权利要求14的方法，其中所述第一NS3h捕获肽与所述结构域1具有至少90%的序列同一性，并且长度不超过250个氨基酸。17.权利要求14的方法，其中所述第一NS3h捕获肽与所述结构域2具有至少90%的序列同一性，并且长度不超过250个氨基酸。18.权利要求14的方法，其中所述第二NS3h捕获肽与具有结构域1、2和3的全长NS3解旋酶具有至少95%的序列同一性。19.权利要求14的方法，其中所述第二NS3h捕获肽包含具有结构域1、2和3的全长NS3解旋酶序列。20.权利要求14的方法，其中所述第二NS3h捕获肽的所述氨基酸序列与所述全长HCV解旋酶具有至少99%的序列同一性。21.权利要求14的方法，所述第二NS3h捕获肽具有NS3解旋酶天然结构。22.权利要求14的方法，其中所述样品进一步怀疑含有HCV颗粒或其片段，并且其中所述方法进一步包括使所述样品与第一抗HCV抗体接触，使得形成第三复合物，其中所述第三复合物包含与HCV颗粒或其片段结合的所述第一抗HCV抗体。23.权利要求22的方法，其中所述第一抗HCV抗体是抗核心HCV抗体。24.权利要求22-23的方法，其中所述第一抗HCV抗体包含固体-支持物结合部分。25.权利要求22-24的方法，其进一步包括使所述样品与第二抗HCV抗体接触，所述抗HCV抗体结合所述第三复合物中的所述HCV颗粒或其片段，其中所述第二抗HCV抗体是可检测标记的。26.权利要求25的方法，其中所述第二抗HCV抗体是抗核心HCV抗体。27.权利要求25的方法，其进一步包括检测所述第三复合物。28.权利要求14-27的方法，其进一步包括使所述样品与第一HCV核心肽接触，其中所述第一核心肽特异性结合所述受试者抗体中的至少一种，以形成第四复合物。29.权利要求28的方法，其中所述第一HCV核心肽包含SEQIDNO:12所示的氨基酸序列或由SEQIDNO:12所示的氨基酸序列组成。30.权利要求28-29的方法，其中所述第一HCV核心肽包含固体-支持物结合部分。31.权利要求28-30的方法，其进一步包括使所述样品与第二HCV核心肽接触，其中所述第二HCV核心肽是可检测标记的，并且其中所述第二HCV核心肽结合作为所述第四复合物的部分的所述受试者抗体。32.权利要求31的方法，其进一步包括检测所述第四复合物的存在。33.权利要求14-32的方法，其进一步包括使所述样品与固体支持物接触。34.权利要求33的方法，其中所述固体支持物包含微珠。35.权利要求33的方法，其中所述固体支持物用抗生物素蛋白包被。36.权利要求14-35的方法，其进一步包括使所述样品与第一可检测标记的缀合肽接触，所述第一可检测标记的缀合肽与作为所述第一复合物的部分的所述受试者抗体结合，并且其中所述检测所述第一复合物的存在包括检测所述第一可检测标记的缀合肽。37.权利要求36的方法，其中所述第一可检测标记的缀合肽：i）包含与HCVNS3解旋酶的结构域1具有至少90%序列同一性的氨基酸序列，ii）长度不超过200个氨基酸；和iii）包含可检测标记。38.权利要求14-37的方法，其进一步包括使所述样品与第二可检测标记的缀合肽接触，所述第二可检测标记的缀合肽结合作为所述第二复合物的部分的所述受试者抗体，并且其中所述检测所述第二复合物的存在包括检测所述第二可检测标记的缀合肽。39.权利要求38的方法，其中所述第二可检测标记的缀合肽包含与所述全长HCVNS3解旋酶具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。40.权利要求14的方法，其中所述第一NS3h捕获肽长度不超过180个氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：J普罗斯特科，AS米尔霍夫，C马罗尼奇，
申请(专利权)人：雅培制药有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US