键形成酶的活性测定制造技术

本文报道了用于检测样品中分选酶的方法，其包括以下步骤：a)将样品与包含固定标签的第一底物和包含可检测标记的第二底物孵育，由此在样品中分选酶的存在下，形成包含固定标签和可检测标记的缀合物，b)通过/使用固定标签将步骤a)的缀合物固定至固相，c)通过/使用可检测标记检测固定的缀合物，并且从而检测样品中的分选酶。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】键形成酶的活性测定本专利技术一般地涉及键形成酶的存在和/或活性的检测。特别地本专利技术涉及分选酶的存在和/或活性的检测。
技术介绍
键形成酶，如分选酶和谷氨酰胺转移酶，在工业和生物转化过程中变得越来越重要。为了使用该酶作为生产工具，有必要确定其性质。酶测定法是确定某些酶活性的方法。这是研究酶特异性或动力学所必需的。处理显色或荧光底物或如NAD的辅助因子的酶易于监测。在相当长一段时间这些测定法是已知的，并且针对多种酶已经开发了标准的活性测定法。这些测定法中的大多数是快速和容易执行的。然而，许多酶不利用显色或荧光底物或辅助因子。例如，在本文中用作通常的键形成酶的代表的键形成酶分选酶，是这种情况。公开了多种方法来监测键形成酶的反应。通常使用的是质谱法或HPLC，用于测定离析物和产物之间的重量或疏水性变化。然而，这些方法是复杂、耗时并且难于并行执行的。此外，SDS-PAGE可用于研究键形成酶反应的离析物和产物的大小差异。在分析酶反应的早期研究(Ton-That等人，PNAS96(1999)12424-12429)中，在没有任何动力学数据的仅仅是定性的研究中使用了SDS-Gel和HPLC分析组合。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测样品中键形成酶的方法，其包括以下步骤：a)将样品与包含固定标签的第一底物和包含可检测标记的第二底物孵育，由此在样品中键形成酶的存在下，形成包含固定标签和可检测标记的缀合物，b)离心样品，c)通过(/使用)固定标签将步骤a)的缀合物固定至固相，d)通过(/使用)可检测标记检测固定的缀合物，从而检测样品中的键形成酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.17 EP 14198535.81.用于检测样品中键形成酶的方法，其包括以下步骤：a)将样品与包含固定标签的第一底物和包含可检测标记的第二底物孵育，由此在样品中键形成酶的存在下，形成包含固定标签和可检测标记的缀合物，b)离心样品，c)通过(/使用)固定标签将步骤a)的缀合物固定至固相，d)通过(/使用)可检测标记检测固定的缀合物，从而检测样品中的键形成酶。2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤a)的孵育之后，另外地将样品稀释10倍至30倍。3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中包含固定标签的第一底物包含第一键形成酶识别基序，并且包含可检测标记的第二底物包含第二键形成酶识别基序。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中第一键形成酶识别基序是第一分选酶识别基序，第二键形成酶识别基序是第二分选酶识别基序。5.根据权利要求4所述的方法，其中1)第一分选酶识别基序包含LPXTG基序(SEQIDNO：01)，其中X表示任何氨基酸，第二分选酶识别基序包含寡聚甘氨酸或寡聚丙氨酸基序或2)第二分选酶识别基序包含LPXTG基序(SEQIDNO：01)，其中X表示任何氨基酸，第一分选酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·伯尼茨杜拉特，E·科佩茨基，P·克拉奇，M·沙特，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH