一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI-OAm-NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI-OAm-NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法
本专利技术涉及纳米材料的定量检测领域，具体涉及一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI-OAm-NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法。
技术介绍
纳米材料是近年来新兴的一类材料，纳米技术的发展使纳米材料在众多领域大展拳脚；在纺织业中添加纳米级的二氧化硅可制成杀菌、防霉、除臭和抗紫外线辐射的服装；在家用电器方面，纳米材料制成的纳米多功能塑料，具有抗菌、除味、防腐、抗老化、抗紫外线等作用；在环境科学领域，纳米膜能够探测到由化学和生物制剂造成的污染，并对这些制剂进行过滤，消除污染。由此可见，纳米材料涉及的领域甚广，其在生物医药领域也同样受到广泛关注。传统的药物，如植物来源的中药虽具有高的亲水性但由于其无法穿透脂质膜且具有较大的分子量从而导致药物的吸收率低。另外，一些化学材料合成的西药由于其亲水性差，也同样带来吸收率低的困扰。而纳米载药系统之所以能够引起诸多关注，主要在于其在输送药物中所表现出的独特性能，尺寸小，比表面积大，更有利于药物的输送。聚合物胶束是两亲性聚合物分子在水溶液中最容易形成的组装形态...
【技术保护点】
一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI‑OAm‑NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、水解PSI‑OAm‑NAPI，得到水解后的MFAP溶液；b、制备MFAP的免疫抗原和包被抗原；c、MFAP纳米药物载体高特异性抗体的制备；d、FITC标记的MFAP荧光抗体的制备；e、将MFAP包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的MFAP标准品，以FITC标记的MFAP抗体作为一抗，建立直接竞争荧光免疫分析定量检测MFAP；f、以MFAP标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线，从而定量检测出MFAP的浓度，。
【技术特征摘要】
1.一种基于痕量荧光免疫定量检测PSI-OAm-NAPI两亲聚合纳米药物载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、水解PSI-OAm-NAPI，得到水解后的MFAP溶液；b、制备MFAP的免疫抗原和包被抗原；c、MFAP纳米药物载体高特异性抗体的制备；d、FITC标记的MFAP荧光抗体的制备；e、将MFAP包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的MFAP标准品，以FITC标记的MFAP抗体作为一抗，建立直接竞争荧光免疫分析定量检测MFAP；f、以MFAP标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线，从而定量检测出MFAP的浓度，。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线的线性方程为A＝7558.72-1365.50lgC，A为荧光强度，C为MFAP的浓度；相关系数R＝-0.997，线性范围为0.48～1.19×104ng/mL，检出限为0.090ng/mL。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤a具体包括以下步骤：将PSI-OAm-NAPI纳米粒子与聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)溶解于三氯甲烷溶液中，加入新配置的氢氧化钠溶液超声，蒸发除去三氯甲烷；最后经过离心取沉淀分散于PBS中得到水解后的MFAP溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤a具体包括以下步骤：将20～60mg的PSI-OAm-NAPI纳米粒子和0.2～0.6mg的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)溶解到0.5～5mL三氯甲烷溶液中，溶解后将上述溶液加入到8～16mL浓度为0.003～0.008mg/mL的氢氧化钠溶液中，超声5～15min，功率200～600W，之后磁力搅拌5～10min，将溶液于45～65℃下蒸发除去三氯甲烷，于12000～20000r/min离心10～15min，取沉淀分散在0.5～2mLpH＝7.4的PBS缓冲液中，得到水解后的MFAP溶液。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述水解后的MFAP溶液的浓度为2～10mg/mL。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤b具体包括以下步骤：b-1、在1mL水解后的MFAP溶液中加入1mLPBS缓冲溶液，该缓冲液中包含0.1～1mg的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和0.1～1mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，反应10～20min后加入1～10mg牛血清白蛋白，于25℃下温育2～...
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