一种提高他克莫司产量的发酵方法技术

本发明专利技术公开了一种提高他克莫司产量的发酵方法，在常规的他克莫司发酵过程中加入吸附树脂以及流加补充糊精，所述吸附树脂在发酵时间为48h～60h时加入，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.001～0.1:1；所述流加补充糊精在发酵时间为1h～60h时开始补加，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入0.5～3g糊精。通过这种发酵生产工艺他克莫司的发酵产量明显提高。本发明专利技术能提高他克莫司发酵产量，而且所使用的吸附树脂可进行回收，实现循环利用，进一步降低生产成本。

Fermentation method for improving tacrolimus yield

The invention discloses a method of improving fermentation yield of tacrolimus, with adsorption resin in the fermentation process of tacrolimus in conventional flow and add dextrin, the adsorption resin in the fermentation time is 48h ~ 60H, the adsorption resin adding volume and fermentation liquid volume ratio is 0.001 ~ 0.1:1; the flow in the fermentation time is 1H ~ 60H to add supplementary dextrin, flow acceleration the flow with supplementary dextrin per hour per 100ml fermentation adding 0.5 ~ 3G dextrin. Through this fermentation process, the fermentation yield of tacrolimus was improved obviously. The invention can raise the fermentation yield of tacrolimus, and the adsorption resin used for the invention can be recycled to realize cyclic utilization and further reduce the production cost.

【技术实现步骤摘要】
一种提高他克莫司产量的发酵方法
本专利技术涉及他克莫司生产
，具体地，涉及一种提高他克莫司产量的发酵方法。
技术介绍
他克莫司(FK506)是一种由链霉菌产生的新型23元大环内酯聚酮类物质，具有很强的免疫抑制作用，其效力比应用较广的环孢霉素A(CyclosporinA，CsA)高近100倍，而毒副作用比环孢素A更少，还具有低死亡率、高移植存活率、依赖性小等优点。他克莫司广泛应用于特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、红斑狼疮、扁平苔癣、白癜风、Nethenton综合症和抑制宿主病等自身免疫疾病的治疗。目前临床应用于预防肝脏或肾脏移植术后的移植物排斥反应，治疗肝脏、胰腺、肾脏、心脏、肺等实体器官移植术后应用其他免疫抑制药物无法控制的移植物排斥反应。然而受制于他克莫司发酵水平较低、生产成本高等因素，很多器官移植患者在经济上无法接受，导致其推广应用受到了一定的限制。目前针对他克莫司产量低下的问题，国内外展开了一系列的研究，从实验效果来看，菌种选育无疑是一种能够有效提高他克莫司产量的方法。例如：王秀琴等采用通过复合诱变的方法对出发菌株筑波链霉菌进行处理，得到一株高产菌株，其发酵产量较出发菌株提高73.6%。郑军荣等应用化学和物理诱变剂对他克莫司产生菌进行菌种诱变，并利用莽草酸和哌可酸及其相应的结构类似物作为选择压力筛选出高产突变株，相对发酵效价提高了约2倍。Jung等通过逐渐提高培养基中他克莫司的浓度来增加菌株对产物的耐受性，最终获得的菌株产量达到972mg/L。袁晖等通过紫外诱变加抗性筛选的方法处理产他克莫司的链霉菌，得到1株高产菌，其50L罐产量达到918mg/L。但是菌种选育工作的不确定性高、工作强度大，并且选育的高产菌种始终面临着生产能力退化的问题，为他克莫司的生产埋下了不稳定的隐患。因此有必要研究开发新的方法，提高他克莫司的产量，以满足实际应用的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的上述缺陷，提供一种提高他克莫司产量的发酵方法，使得他克莫司的发酵产量明显提高。本专利技术的上述目的是通过如下技术方案实现的：一种提高他克莫司产量的发酵方法，在常规的他克莫司发酵过程中加入吸附树脂以及流加补充糊精，所述吸附树脂在发酵时间为48h～60h时加入，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.001～0.1:1；所述流加补充糊精在发酵时间为1h～60h时开始补加，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入0.5～3g糊精。本专利技术采用新型发酵工艺，在恰当的发酵过程中加入有效量的可吸附他克莫司的树脂，有效降低由于他克莫司的积累而引起对自身菌体的有害作用；同时在发酵过程中流加补充糊精，保证发酵体系拥有充足的能量，延长生产菌的生产周期，从而提高他克莫司产量。所述吸附树脂为中等极性大孔树脂和/或非极性大孔树脂。优选地，所述吸附树脂包括但不限于XAD16、HP20、HZ801、HZD-3、SP850和HZ830中的任一种或多种。最优选地，所述吸附树脂为XAD16树脂。优选地，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.03～0.1:1。最有选地，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.1:1。优选地，所述流加补充糊精在发酵时间为48h～60h时开始补加。优选地，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入1～2g糊精。更优选地，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入2g糊精。以上所述他克莫司的发酵生产工艺得到的他克莫司。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的他克莫司的发酵生产工艺，包括以下改进：1)添加特异性吸附他克莫司的吸附树脂；2)发酵过程中流加补充糊精。在他克莫司发酵生产时添加特异性吸附树脂，这样在发酵时吸附树脂在达到吸附平衡之前将持续的吸附发酵时产生的他克莫司，降低产物在发酵液中的浓度，解决了他克莫司发酵时的反馈抑制作用，实现连续液体发酵生产他克莫司，提高他克莫司产量；另一方面，吸附树脂经过再生处理后可重复使用，从而进一步降低生产成本。糊精的流加补充保证了发酵体系拥有充足的能量，延长生产菌的生产周期，从而提高他克莫司产量。相比现有的发酵方法，本专利技术的发酵方法可以大大提高发酵产物他克莫司的产量，降低生产成本，具有非常好的工业化应用前景。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步解释说明，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本专利技术范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技术方案，均应包括在本专利技术权利要求的保护范围之内。以下实施例和对比例中，所用原料均为市售商品。实施例1配置发酵培养基，调节pH为7.8，分装三角瓶，121℃实消20min，备用。按10%培养基体积的接种量接入发酵种子液。培养条件为：培养温度28℃，搅拌速度200rpm，通气量1.0V/V·min。培养48小时后加入XAD16树脂，树脂体积与发酵液体积比为0.1:1，同时开始流加补充糊精，流加速度按每小时每100ml发酵液加入0.5g糊精。继续培养至170h，结束发酵。使用滤布过滤所得发酵液，收集含有他克莫司的吸附树脂和菌丝体，用2倍体积的丙酮溶液充分解析，使用HPLC检测解析液中他克莫司的含量，结果为1022mg/L。实施例2配置发酵培养基，调节pH为7.8，分装三角瓶，121℃实消20min，备用。按10%培养基体积的接种量接入发酵种子液。培养条件为：培养温度28℃，搅拌速度200rpm，通气量1.0V/V·min。培养48小时后加入XAD16树脂，树脂体积与发酵液体积比为0.1:1，同时开始流加补充糊精，流加速度按每小时每100ml发酵液加入2g糊精。继续培养至170h，结束发酵。使用滤布过滤所得发酵液，收集含有他克莫司的吸附树脂和菌丝体，用2倍体积的丙酮溶液充分解析，使用HPLC检测解析液中他克莫司的含量，结果为1248mg/L。实施例3配置发酵培养基，调节pH为7.8，分装三角瓶，121℃实消20min，备用。按10%培养基体积的接种量接入发酵种子液。培养条件为：培养温度28℃，搅拌速度200rpm，通气量1.0V/V·min。培养60小时后加入HP20树脂，树脂体积与发酵液体积比为0.001:1，同时开始流加补充糊精，流加速度按每小时每100ml发酵液加入1g糊精。继续培养至170h，结束发酵。使用滤布过滤所得发酵液，收集含有他克莫司的吸附树脂和菌丝体，用2倍体积的丙酮溶液充分解析，使用HPLC检测解析液中他克莫司的含量，结果为663mg/L。实施例4配置发酵培养基，调节pH为7.8，分装三角瓶，121℃实消20min，备用。按10%培养基体积的接种量接入发酵种子液。培养条件为：培养温度28℃，搅拌速度200rpm，通气量1.0V/V·min。培养48小时后加入HZ801树脂，树脂体积与发酵液体积比为0.03:1，同时开始流加补充糊精，流加速度按每小时每100ml发酵液加入3g糊精。继续培养至170h，结束发酵。使用滤布过滤所得发酵液，收集含有他克莫司的吸附树脂和菌丝体，用2倍体积的丙酮溶液充分解析，使用HPLC检测解析液中他克莫司的含量，结果为779mg/L。实施例5配置发酵培养基，调节pH为7.8，分装三角瓶，121℃实消20min，备用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，在常规的他克莫司发酵过程中加入吸附树脂以及流加补充糊精，所述吸附树脂在发酵时间为48h～60h时加入，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.001～0.1:1；所述流加补充糊精在发酵时间为1 h～60h时开始补加，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml 发酵液加入0.5～3g 糊精。

【技术特征摘要】
1.一种提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，在常规的他克莫司发酵过程中加入吸附树脂以及流加补充糊精，所述吸附树脂在发酵时间为48h～60h时加入，所述吸附树脂的加入体积与发酵液体积比为0.001～0.1:1；所述流加补充糊精在发酵时间为1h～60h时开始补加，所述流加补充糊精的流加速度按每小时每100ml发酵液加入0.5～3g糊精。2.根据权利要求1所述提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，所述吸附树脂为中等极性大孔树脂和/或非极性大孔树脂。3.根据权利要求2所述提高他克莫司产量的发酵方法，其特征在于，所述吸附树脂包括但...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦鹏，梁淑娃，谢鹏，黄魁英，刘广宇，梁宏基，劳逸俊，
申请(专利权)人：广州市微生物研究所，广州迈达康医药科技有限公司，华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44