一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法。该方法包括以下步骤：S1.制备新鲜的噬菌体原液，测定效价测定后进行稀释；S2.保持试验舱和空白舱的测试条件一致，将净化产品置于试验舱；S3.以气溶胶形式释放噬菌体病毒稀释液，并搅拌2～5 min，静置2～5 min；S4.分别采集试验舱和空白舱内的初始样本，开启试验舱净化产品作用一段时间后，分别采集试验舱和空白舱内的残留样本；S5.培养并计算自然衰减率和净化效果。本发明专利技术提供的方法可以对多种噬菌体宿主菌进行检测，适用范围广泛；而且引入自然衰减率，保证了检测结果的客观性和真实性，可以作为准确鉴定和评价空气净化产品病毒净化效果的依据。

A method for detecting bacteriophage ability in air purification products

The invention discloses a method for detecting the bacteriophage ability of air purifying products to purify the air. The method consists of the following steps: S1. Preparing fresh phage solution and diluting it after titer determination; S2. Keeping the test conditions in the test chamber and blank chamber consistent, placing the purified product in the test chamber; S3. Releasing the phage virus dilution in the form of aerosol, stirring it for 2-5 minutes, and standing for 2-5 minutes; S4. Initial samples in test cabin and blank cabin were collected respectively after the purification products were opened for a period of time. S5. Natural decay rate and purification effect were cultured and calculated. The method provided by the invention can detect various phage host bacteria with a wide range of application, and the natural attenuation rate is introduced to ensure the objectivity and authenticity of the test results, which can be used as the basis for accurately identifying and evaluating the viral purification effect of air purification products.

【技术实现步骤摘要】
一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法
本专利技术属于微生物分析检测
更具体地，涉及一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法。
技术介绍
目前全球环境恶化，根据世界卫生组织的统计表明，每年有近1700万人因感染各种疾病而死亡，其中最严重的是呼吸道感染。长期生活在浑浊的空气中会对人体的神经系统、呼吸系统、免疫系统造成危害，导致免疫力下降和相关疾病的产生。与此同时，随着生活质量的不断提高，人们对自己所在的生活环境健康性的关注力大大提高。于是相继问世了许多的保健养生产品，其中就包括了空气净化产品。空气净化产品是一种能够有效去除室内空气中污染物，净化室内空气环境的设备，因具有净化室内空气污染，包括除尘、除臭、除菌等功能而得到了急速膨胀的发展，并呈现出功能多样化、区域特色化等趋势。现阶段的综合调查研究表明，空气主要污染物分三类：（1）可吸入颗粒：包括粉尘、烟雾和花粉等；（2）微生物：包括细菌、真菌和病毒等；（3）有害挥发气体：包括氨气、一氧化碳、甲醛和苯等。人类呼吸道传染病绝大部分是室内微生物气溶胶传播感染的，如2003年香港淘大花园中的SARS感染，2008年“非典”的流行，以及近年来的禽流感等都是室内微生物气溶胶感染所致，并且由于微生物测试的高度专业性，使得部分测试及评判方法不够完善。而微生物去除效果作为评价空气净化产品的一个重要功能指标，对消费者购买和厂家生产有着非一般的指导意义，故研究探索一种可准确评价空气净化产品对降低室内空气中噬菌体含量的效果的检测方法尤为重要。此方法将在预防和干预呼吸道疾病的发作以及减轻其发病程度、从源头上阻断呼吸道疾病的发生具有重要的意义。但与产品技术发展相对应的产品净化性能检测技术与方法的发展存在一定滞后性。空气净化产品对微生物的净化性能检测标准，目前国内仅《GB21551.3-2010家用和类似用途电器的抗菌、除菌、净化功能空气净化器的特殊要求》和《消毒技术规范》（2002年版）2.1.3节中有提及，并且两个标准所设立的检测方法都是参照消毒产品演变而来。但空气净化产品与消毒产品相比，除菌原理、作用方式等都有差异；且此方法检测指标菌种单一，仅用白色葡萄球菌及自然菌作为空气净化产品去除效果的评价，而实际上，室内微生物气溶胶成分复杂，种类繁多，包括细菌、真菌和病毒气溶胶。因此，现有的标准检测方法并不十分适用于空气净化产品对微生物净化性能的检测。病毒性传染病的流行，促使噬菌体作为病毒示踪微生物的研究掀起热潮。近年来在气溶胶方面的报道不断增多和深入，噬菌体在生物安全循证研究中发挥着越来越重要的作用。但目前国内对于空气净化器去除病毒净化性能的检测方法还是处于空白阶段，有关空气净化产品去除病毒效果的标准检测方法国内外都未见报道，经查阅均也没有发现对除病毒净化性能检测的方法研究报道及专利申请。因此，建立空气净化产品去除病毒净化性能检测方法的研究显得尤为重要。本方法的实施将填补这一技术的空白，为检测评价空气净化器的除病毒性能提供可靠、规范、科学的技术方法，并且形成相关标准，推动新型除病毒空气净化产品的健康、快速发展。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法。本专利技术可以解决现有空气净化产品对病毒净化效果评价的问题，提供了病毒原液的提纯制作及效价测定，病毒原液的纯度高、稳定性好，有利于试验的正常开展，保证了病毒的活性以及回收浓度；而且，试验舱和空白舱的使用保证了试验的生物安全性和环境的密闭性；另外，本方法在计算净化效率时引入空白的自然衰减率，充分保证了检测结论的客观性和真实性。本专利技术的目的是提供一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法，包括以下步骤：S1.制备新鲜的噬菌体原液，测定效价后进行稀释，得到噬菌体病毒稀释液；S2.将两个性能参数一致的空气净化检测专用实验舱分别作为试验舱和空白舱，调节两个实验舱的温湿度至实验要求并保持测试条件一致，然后将待测的空气净化产品置于试验舱内，空白舱不放空气净化产品，并密闭试验舱和空白舱；S3.将S1制备得到的噬菌体病毒稀释液通过气溶胶发生器以气溶胶的形态释放至空气净化检测专用实验舱中，控制风扇搅拌2～5min，静置2～5min；S4.同时采集试验舱和空白舱中噬菌体的初始样本，然后启动试验舱内的空气净化产品，空白组则不开启空气净化产品或喷洒消毒液；运行至预设的时间后，同时采集试验舱和空白舱中噬菌体的残留样本；S5.将S4采集到的噬菌体初始样本和残留样本分别以相同条件进行培养，得到试验舱和空白舱中噬菌体的初始浓度和残留浓度，计算空白舱的自然衰减率及待测的空气净化产品的病毒净化效果。本专利技术经过前期大量实验的反复验证，建立了快速明了的高纯病毒原液的制备方法，并从各种病毒的毒性、抗逆性、可操作性等角度筛选出合适的代表菌株，同时通过合适的采样方法快速、简单、有效地回收空间中悬浮的病毒。该方法病毒原液的纯度高、稳定性好，有利于试验的正常开展，保证了病毒的活性以及回收浓度，检测方法更为科学合理。本专利技术中，将所保藏的噬菌体原液通过活化、吸附、侵入、复制、合成与释放、效价测定6步处理可得到高纯度的新鲜的噬菌体原液。优选地，制备新鲜的噬菌体原液的方法为：将细菌菌悬液和冷藏后的噬菌体原液混合，在36±1℃条件下静止放置15～20min后，取10mL混合液与90mLNB营养液混合，置于36±1℃培养18～20h，以2000～4000r/min、5～15min离心1～2次后，先用0.45μm滤纸粗过滤一次，接着再用0.22μm滤纸细过滤一次，完毕后回收滤液，即为新鲜的噬菌体原液。本专利技术提供了一种快速明了的高纯病毒原液的制备方法。在本专利技术噬菌体原液的制备过程中，专利技术人发现，离心后先用0.45μm滤纸粗过滤一次，接着再用0.22μm滤纸细过滤一次的操作能有效去除杂质，形成均一、悬浮性好、分散度高、不容易凝结的噬菌体原液，制备得到的噬菌体原液经活性后可使用，并且纯度高，保藏方便，保存期长。优选地，所述噬菌体为Phi-X174（ATCC13706-B1，NBRC103405）或phageMS2（NBRC102619）等对人体为非致病性或弱致病性的微生物，对应宿主为ATCC13706、NBRC13898或NBRC3012。本专利技术可以对多种噬菌体宿主菌进行检测，从而使本专利技术的噬菌体的检测方法的适用范围更加广泛，应用价值更大。优选地，本专利技术的宿主培养基为NB培养基、营养琼脂培养基、YMA培养基或LB培养基。保证噬菌体宿主菌可以在培养基上保持良好生长，进而能够实现对噬菌体的有效检测。优选地，步骤S1所述噬菌体原液的浓度为1×109～1×1010PFU/mL，以充分满足实验要求。优选地，步骤S1将新鲜的噬菌体原液活化后用灭菌去离子水进行稀释，并调节噬菌体原液的表面张力为65×10-3～69×10-3N/m，得到所述噬菌体病毒稀释液。噬菌体在实验舱内的平衡时间、浓度及自然衰减曲线与实验舱内空气流量、温度、湿度、气压等有着密切的关系，要想获得更为准确的实验结果，必须严格控制这些条件。优选地，试验过程中，所述试验舱和空白舱的换本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 制备新鲜的噬菌体原液，测定效价后进行稀释，得到噬菌体病毒稀释液；S2. 将两个性能参数一致的空气净化检测专用实验舱分别作为试验舱和空白舱，调节两个实验舱的温湿度至实验要求并保持测试条件一致，然后将待测的空气净化产品置于试验舱内，并密闭试验舱和空白舱；S3. 将S1制备得到的噬菌体病毒稀释液通过气溶胶发生器以气溶胶的形态释放至空气净化检测专用实验舱中，控制风扇搅拌2～5 min，静置2～5 min；S4. 同时采集试验舱和空白舱中噬菌体的初始样本，然后开启试验舱内的空气净化产品的净化功能或喷洒消毒液，运行至预设时间后，同时采集试验舱和空白舱中噬菌体的残留样本；S5. 将S4采集到的噬菌体初始样本和残留样本分别以相同条件进行培养，得到试验舱和空白舱中噬菌体的初始浓度和残留浓度，计算空白舱的自然衰减率及待测的空气净化产品的病毒净化效果。

【技术特征摘要】
1.一种检测空气净化产品净化空气中噬菌体能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.制备新鲜的噬菌体原液，测定效价后进行稀释，得到噬菌体病毒稀释液；S2.将两个性能参数一致的空气净化检测专用实验舱分别作为试验舱和空白舱，调节两个实验舱的温湿度至实验要求并保持测试条件一致，然后将待测的空气净化产品置于试验舱内，并密闭试验舱和空白舱；S3.将S1制备得到的噬菌体病毒稀释液通过气溶胶发生器以气溶胶的形态释放至空气净化检测专用实验舱中，控制风扇搅拌2～5min，静置2～5min；S4.同时采集试验舱和空白舱中噬菌体的初始样本，然后开启试验舱内的空气净化产品的净化功能或喷洒消毒液，运行至预设时间后，同时采集试验舱和空白舱中噬菌体的残留样本；S5.将S4采集到的噬菌体初始样本和残留样本分别以相同条件进行培养，得到试验舱和空白舱中噬菌体的初始浓度和残留浓度，计算空白舱的自然衰减率及待测的空气净化产品的病毒净化效果。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1所述噬菌体原液的浓度为1×109～1×1010PFU/mL；所述噬菌体为噬菌体Phi-X174或噬菌体phage...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄东浪，赵培静，丁年平，杜少平，明飞平，夏枫耿，万分龙，陈勉华，
申请(专利权)人：广州市微生物研究所，广东广微检测股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44