本发明专利技术公开了Aphanalide L在制备治疗黑色素瘤药物中的应用，属于药物领域。研究发现Aphanalide L可显著抑制黑色素瘤细胞A375生长，且细胞数与Aphanalide L浓度呈依赖性下降，可以进一步研究开发成制备治疗黑色素瘤的药物。
The use of Aphanalide and L in the preparation of drugs for melanoma
The invention discloses a Aphanalide L in preparation for the application of melanoma drugs, belonging to the field of medicine. The study found that Aphanalide L could significantly inhibit the growth of A375 melanoma cells, and the cell number and Aphanalide L concentration dependent decrease, can be further developed into the preparation of a medicament for treating melanoma.
【技术实现步骤摘要】
AphanalideL在制备治疗黑色素瘤药物中的应用
本专利技术涉及化合物AphanalideL的新用途，具体涉及AphanalideL在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。
技术介绍
YaoZhang等人首次分离纯化出化合物AphanalideL，并将成果发表在著名天然产物杂志JournalofNaturalProduct上(BioactiveTerpenoidsfromtheFruitsofAphanamixisgrandifolia，J.Nat.Prod.，2013，76，1191-1195)。目前尚未有该化合物关于治疗黑色素瘤的活性报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种AphanalideL的医药用途。上述目的是通过如下技术方案实现的：AphanalideL在制备治疗黑色素瘤药物中的应用，所述AphanalideL化学结构式如下，进一步地，所述黑色素瘤为黑色素瘤A375。附图说明图1：BrdU免疫荧光检测细胞增殖结果。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容。实施例1：AphanalideL的分离制备及结构确证AphanalideL的制备方法同文献报道的制备方法(BioactiveTerpenoidsfromtheFruitsofAphanamixisgrandifolia，J.Nat.Prod.，2013，76，1191-1195)。结构确证：白色无定形粉末，分子式为C30H40O10，不饱和度为11。核磁共振氢谱数据δH(ppm，DMSO-d6，500MHz)：H-1(4.95，d，J＝7.5)，H-2(2.86，dd，J＝16.0，7.5)，H-2(3.47，d，J＝16.0)，H-5(2.15，d，J＝13.0)，H-6(1.70，m)，H-6(1.89，Signaloverlapped)，H-7(4.33，t，J＝2.0)，H-9(2.65，d，J＝4.0)，H-11(3.47，d，J＝4.0)，H-12(3.64，dd，J＝6.0，4.0)，H-15(3.22，Signaloverlapped)，H-16(1.69，Signaloverlapped)，H-16(1.95，Signaloverlapped)，H-17(2.53，dd，J＝11.0，6.0)，H-18(0.80，s)，H-19(1.47，s)，H-21(7.31，s)H-22(6.44，d，J＝1.0)，H-23(7.38，t，J＝1.5)，H-28(1.16，s)，H-29(1.37，s)，H-30(1.09，s)，11-OH(4.89，d，J＝4.0)，12-OH(4.88，d，J＝6.0)，1-OAc(1.85，s)，7-OAc(2.07，s)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，DMSO-d6，125Hz)：71.6(CH，1-C)，34.2(CH2，2-C)，169.1(C，3-C)，84.8(C，4-C)，44.3(CH，5-C)，26.0(CH2，6-C)，73.6(CH，7-C)，44.4(C，8-C)，40.1(CH，9-C)，34.9(C，10-C)，75.6(CH，11-C)，81.3(CH，12-C)，45.1(C，13-C)，72.1(C，14-C)，55.8(CH，15-C)，32.4(CH2，16-C)，39.3(CH，17-C)，13.2(CH3，18-C)，16.1(CH3，19-C)，124.0(C，20-C)，140.5(CH，21-C)，113.1(CH，22-C)，141.2(CH，23-C)，33.9(CH3，28-C)，22.6(CH3，29-C)，20.7(CH3，30-C)，169.0(C，1-OAc)，20.3(CH3，1-OAc)，169.1(C，7-OAc)，20.8(CH3，7-OAc)。结构确证数据与文献报道一致，因此可以确定本专利技术制备的化合物即为文献报道的AphanalideL。实施例2：AphanalideL的药理作用试验一、材料和仪器人A375黑色素瘤细胞株由第三军医大学赠。AphanalideL自制，制备方法见实施例1，HPLC归一化纯度大于98％。DMEM培养基、0.25％胰酶购自美国Gibco公司。MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐；四甲基偶氮唑蓝)、DMSO(二甲基亚砜)、BrdU购自美国Sigma公司。鼠抗BrdU多克隆抗体购自美国ABcam公司。山羊抗鼠二抗购自美国Cellsignaling公司。AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自美国Promega公司。恒温CO2培养箱，普通冰箱，-80度冰箱均为美国Forma公司产品。超净工作台(中国苏州净化工程公司)。倒置显微镜，倒置荧光显微镜(olympus公司)。电热恒温培养箱(中国上海跃进医疗器械厂)。自动酶标仪(日本Wako公司)。紫外分光光度仪(美国Beckman公司)。J6-HC高速离心机(美国Beckman公司)。低温微量离心机(德国Eppendorf公司)。振荡摇床(美国Forma公司)。二、试验方法1、细胞培养1.1细胞复苏将冻存在液氮罐中的A375黑色素瘤细胞取出，迅速放入37℃的温水中，轻轻摇动使其尽快融化(大约lmin)。然后吸出细胞悬液，加入到已加有2mL培养基的离心管中，轻轻吹打混匀，800r/min，离心5min，弃去上层培养基。用含有10％FBS和1％的青霉G/链霉素的DMEM培养基8mL制成细胞悬液后，接种至10cm培养盘中。然后置于5％CO2、37℃恒温培养箱中进行培养。1.2细胞传代显微镜下观察细胞融合度达80％-90％时即可进行传代。先用2mLPBS洗涤细胞2次，然后加入0.25％的胰酶lmL。轻轻水平摇动培养盘，使消化液能覆盖细胞的表面，然后置于37℃温箱中消化约lmin。置于显微镜下见细胞变圆回缩，然后迅速加入1mL含有FBS的培养基终止消化。轻轻吹打至细胞分散均匀，然后根据细胞密度按照1:2或1:3传代，重新接种于新的培养盘中，置于5％CO2、37℃恒温培养箱中培养。1.3细胞冻存取1盘处于对数生长期的细胞，胰酶消化并收集到离心管中，1000r/min离心5min，弃上清。然后加入lmL冻存液，轻轻吹散细胞制成细胞悬液，将细胞悬液加入到1.5mL的冻存管中。在冻存管上标明细胞的名称，保存时间，保存者的姓名。先将冻存管放入4℃冰箱，放置约30min。接着置于-20℃冰箱，放置约2h。然后放于-80℃超低温冰箱中放置过夜。第二天将冻存的细胞置于液氮罐中长期保存。2、细胞计数法绘制细胞生长曲线(1)取对数生长期A375黑色素瘤细胞，计数，调整细胞密度为2×104/mL。(2)将细胞悬液接种于12孔板中，1.5mL/孔。(3)12h后，待细胞贴壁，换1mL无血清DMEM培养基，并分别用5μmol/LAphanalideL和DMSO(对于DMSO稀释的AphanalideL，控制DMSO浓度在1/1000以下，确保对细胞无害)处理，每组细胞设3个平行孔，置于5％C02、37℃恒温培养箱中进行培养。(4)分别于0h、24h、48h、72h、96h终止培养，收集各组细胞，加入0.25％胰蛋白酶消化，离心，重悬本文档来自技高网...
【技术保护点】
Aphanalide L在制备治疗黑色素瘤药物中的应用，所述Aphanalide L化学结构式如下，
【技术特征摘要】
1.AphanalideL在制备治疗黑色素瘤药物中的应用，所述AphanalideL化学结构式如下，2.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：温州高新技术产业开发区聚智汇科技信息咨询服务中心，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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