用于改善干细胞稳定性的组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种能够改善干细胞的储存稳定性的组合物。更具体地，本发明专利技术涉及用于改善干细胞的冷冻储存稳定性的包含血清和血浆的组合物。根据本发明专利技术的用于改善干细胞的储存稳定性的组合物可保持超过90％的存活率至少9天而不改变干细胞的性质、数目或大小，且因此可用于供细胞疗法使用的干细胞的长期运输和具有良好效果的细胞治疗注射产品的制备。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于改善干细胞稳定性的组合物
本专利技术涉及用于改善干细胞储存稳定性的组合物，且更具体地，涉及用于改善干细胞的冷冻储存稳定性的组合物，所述组合物包含血清或血浆。
技术介绍
干细胞是指能够分化成为至少两种细胞同时具有自我复制能力的细胞，且可分为全能(totipotent)干细胞、多潜能(pluripotent)干细胞和多能(multipotent)干细胞。全能干细胞是具有全能性质的能够发育成为一个完美个体的细胞，且通过卵细胞和精子受精后这些性质由具有至多8-细胞阶段的细胞所拥有。当分离这些细胞并移植入子宫时，这些细胞可发育成一个完整个体。全能干细胞(能够发育成为源自外胚层、中胚层和内胚层的多种细胞和组织)源自内细胞团，所述内细胞团位于受精后4-5天生成的囊胚内。这些细胞称为"胚胎干细胞"且可分化成为多种其他组织细胞，但不形成新的有生命的生物体。多能干细胞是能够分化成仅对包含这些细胞的组织和器官具有特异性细胞的干细胞。多能干细胞首先从成人骨髓分离(Y.Jiang等人，Nature,418:41,2002)，且此后，其在数种其他成人组织中得以确认(C.M.Verfaillie等人，TrendsCellBiol.12:502,2002)。然而，成人组织诸如骨髓中的干细胞存在很少，且在无分化诱导下难以培养这些细胞，且因此，在无特异性筛选的培养基下难以培养这些细胞。换言之，其缺点在于难以在体外分离干细胞并保存该细胞。近来，发现了脂肪组织是多能干细胞的新的来源(B.Cousin等人，BBRC,301:1016,2003；A.Miranville等人，Circulation,110:349,2004；S.Gronthos等人，J.CellPhysiol.189:54,2001；M.J.Seo等人，BBRC,328:258,2005)，且已报导未分化的细胞群体包含在通过脂肪提取(吸脂)获得的人脂肪组织中，且在体外具有分化成脂肪细胞、骨形成细胞、成肌细胞和软骨细胞的潜力(P.A.Zuk等人，TissueEng.7:211,2001；A.M.Rodriguez等人，BBRC,315:255,2004)。此外，通过动物模型实验已知，源自脂肪组织的细胞具有肌肉再生能力和促进神经血管分化的能力。脂肪组织具有能够大量提取的优势，且因此，其已作为补充现有不足的干细胞的新来源受到关注。能够大量获得的干细胞已作为用于将干细胞本身进行注射的细胞治疗剂更多地使用，以实现医药领域的主要目的，包括治疗不能治愈的疾病、美容、化妆品等。培养干细胞后，当将医疗步骤直接用于患者时，用于细胞治疗剂目的的干细胞没有问题。然而，取决于患者病况，当需要控制用于干细胞医疗步骤的时间时，培养干细胞后需要长期储存。此外，当需要长期运输至用于实践经培养的干细胞的地点时，提供稳定的干细胞至关重要。为此，需要持续约5-10天的长时间段维持干细胞的高存活率。然而，目前，当长时间段保存干细胞而无冷冻时，存在的问题是细胞存活率十分低。同时，细胞冷冻方法在融化时引起细胞存活率显着恶化，且从生物学的角度在干细胞功能性等方面存在问题。此外，在冷冻(freezing)状态运输相比在冷藏(refrigeration)状态中运输更加困难。尽管目前常规用于保存干细胞的技术在冷藏状态中，存在将人脂肪组织衍生的间充质干细胞在冷藏条件下悬浮并保存在盐水中的技术，但在该情况中，当将细胞保存48小时或更久时，难以具有70％或更高的存活率。确认了当添加蔗糖或白蛋白以克服困难时，直至48小时至72小时，存活率为70％或更高，并改善了储存稳定性(韩国特许第10-2008-0103637号)。然而，72小时后，由于存活率快速降低，需要开发用于在冷藏条件下(4℃)改善储存稳定性的组合物，进而包括在细胞治疗剂中的干细胞可长时间稳定维持高存活率。因此，本专利技术的专利技术人在长时间冷冻储存中维持干细胞的高存活率方面做出了努力，且结果是，发现了当包含血清或血浆时，维持冷藏状态的干细胞的高存活率至少9天，并完成了本专利技术。已存在其中人血清用作细胞培养的培养基组合物的情况(韩国特许第10-0394430号)，然而，并未公开包含人血清或人血浆的用于改善干细胞储存稳定性的组合物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供用于改善干细胞冷冻储存稳定性的组合物，其包含具有5-80％(v/v)含量的血清或血浆。本专利技术的另一目的是提供包含如上文所述的组合物的细胞治疗注射产品。为实现上述目的，本专利技术提供用于改善干细胞冷冻储存稳定性的组合物，其包含具有5-80％(v/v)含量的血清或血浆。本专利技术还提供包含上述组合物的细胞治疗注射产品。附图简述图1说明了用不同浓度(10、20和30％)的自体血清和包含0.3％白蛋白的防腐剂冷冻储存干细胞后，基于0-144小时的保留时间，0.5x107个干细胞的存活率的比较。对照组使用包含0.3％白蛋白的防腐剂。图2说明了用不同浓度(10、20和30％)的自体血清和包含0.3％白蛋白的防腐剂冷冻储存干细胞后，基于0-144小时的保留时间，1x107个干细胞的存活率的比较。对照组使用包含0.3％白蛋白的防腐剂。图3说明了用不同浓度(10、20和30％)的同种异体血清和包含0.3％白蛋白的防腐剂冷冻储存干细胞后，基于0-144小时的保留时间，0.5x107个干细胞的存活率的比较。对照组使用包含0.3％白蛋白的防腐剂。图4说明了用不同浓度(10、20和30％)的同种异体血清和包含0.3％白蛋白的防腐剂冷冻储存干细胞后，基于0-144小时的保留时间，1x107个干细胞的存活率的比较。对照组使用包含0.3％白蛋白的防腐剂。图5说明了干细胞#1的对照组(盐水/0.3％白蛋白)和对应于各自具有不同情况的实验组(1-6)的用于改善储存稳定性的组合物中，细胞数、存活率和细胞大小的变化的比较结果。图6说明了干细胞#2的对照组(盐水/0.3％白蛋白)和对应于各自具有不同情况的实验组(1-6)的用于改善储存稳定性的组合物中，细胞数、存活率和细胞大小的变化的比较结果。图7说明了防腐剂的pH对细胞存活率的影响。图8说明了血清和血浆对细胞活力效果的比较结果。图9说明了白蛋白对细胞活力的影响。图10说明了血清浓度对细胞活力效果的比较结果。最佳模式除非另外定义，本文使用的全部技术和科学术语具有与本专利技术所属领域的技术人员所理解的相同的含义。一般而言，本文使用的命名法为本领域公知和通用。本专利技术中，发现了在冷藏状态中干细胞95％或更高的存活率通过包含血清或血浆的干细胞防腐剂维持，由此干细胞的储存稳定性得以改善。根据本专利技术的包含血清或血浆的干细胞防腐剂能够维持干细胞在冷藏状态的高存活率至少9天，其可用于稳定提供用于细胞疗法的干细胞。本文使用的术语“细胞治疗注射产品"或“细胞治疗剂”意为能够包含干细胞以治疗组织缺陷或在缺陷位点或其附近部分注射用于肠胃外施用(即作为注射形式)由此纠正缺陷的药物组合物。本文使用的术语“赋形剂”指除了具有药理特性的有效组分的药物组合物之外，以预先确定的体积和重量添加用于促进处理或添加以维持液体形式的材料，等。用于维持液体形式的赋形剂的实例一般包括盐水、Hartman-D溶液、PBS(磷酸盐缓冲盐水)等，但可包含其他含有多种组分的材料。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于改善干细胞的冷冻储存稳定性的组合物，其包含具有5‑80％(v/v)含量的血清或血浆。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.08 KR 10-2014-00850201.一种用于改善干细胞的冷冻储存稳定性的组合物，其包含具有5-80％(v/v)含量的血清或血浆。2.权利要求1的组合物，其中所述血浆的含量为10-50％(v/v)。3.权利要求1的组合物，其中所述血浆的含量为5-50％(v/v)。4.权利要求1的组合物，其中所述冷冻储存温度范围为0.1-10℃。5.权利要求1的组合物，其进一步包含白蛋白和赋形剂。6.权利要求5的组合物，其中所述白蛋白的含量为0.1-1％(v/v)。7.权利要求5的组合物，其中所述白蛋白的含量为0.2-0.5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗廷灿，禹相奎，
申请(专利权)人：罗廷灿，
类型：发明
国别省市：韩国,KR