制备抑制癌细胞增殖的间充质干细胞的方法技术

公开了一种培养用于治疗癌症的间充质干细胞的培养基组合物，该间充质干细胞可以在保持其分化能力和活性的同时抑制癌细胞的增殖，并公开了一种使用该组合物产生用于治疗癌症的间充质干细胞的方法。更具体地，公开了一种用于产生间充质干细胞的包含维生素C和阿司匹林的培养基组合物，该间充质干细胞具有改进的针对癌细胞增殖的抑制活性，并且公开了一种使用该组合物产生用于治疗癌症的间充质干细胞的方法。

Preparation of Mesenchymal Stem Cells Inhibiting Proliferation of Cancer Cells

A medium composition for culturing mesenchymal stem cells for cancer treatment is disclosed. The mesenchymal stem cells can maintain their differentiation ability and activity while inhibiting the proliferation of cancer cells. A method for producing mesenchymal stem cells for cancer treatment using the composition is disclosed. More specifically, a medium composition containing vitamin C and aspirin for the production of mesenchymal stem cells is disclosed. The mesenchymal stem cells have improved inhibitory activity against cancer cell proliferation, and a method for producing mesenchymal stem cells for cancer treatment using the composition is disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备抑制癌细胞增殖的间充质干细胞的方法
本专利技术涉及用于培养用于治疗癌症的间充质干细胞的培养基组合物，该间充质干细胞可以在保持其活性的同时抑制癌细胞的增殖。更具体地，本专利技术涉及用于产生间充质干细胞的包含维生素C和阿司匹林的培养基组合物，该间充质干细胞具有改进的针对癌细胞增殖的抑制活性。
技术介绍
干细胞是指能够自我复制并分化为两种或更多种细胞的细胞。干细胞分为全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。全能干细胞是指可以发育成一个完整个体的全能细胞，并且在卵用精子受精后胚胎细胞直至八细胞阶段具有这些特性。当这些细胞被分离并移植到子宫中时，它们可以发育成一个完整个体。多能干细胞是指能够发育成衍生自外胚层、中胚层和内胚层的各种细胞和组织的细胞，并且可以衍生自在受精后4-5天产生的胚泡内部的内细胞团。这种细胞称为“胚胎干细胞”，并且可以分化为各种其他组织细胞，但不能形成新的生物体。专能干细胞是指如下干细胞，该干细胞仅能够分化为组织和器官特异性细胞(该组织和器官含有这些细胞)。专能干细胞参与胎儿、新生儿和成人阶段的组织和器官的生长和发育，以及成体组织的体内平衡维持和诱导受损组织再生的功能。组织特异性专能细胞统称为“间充质干细胞”。间充质干细胞(RebeccaSYWong,等人JBiomedBiotechnol24:2011,2011)已经用于在各种疾病病症(例如心脏病、成骨不全症、和脊髓损伤)中的基于细胞的疗法中，并且结果受到关注。此外，最近对基于细胞的疗法和使用尿源干细胞的再生医学进行了研究(Bharadwaj等人,StemCells.31(9):1840-56,2013；ZhangD等人,GenesDis.1):8-17,2014；Guan等人,TissueEng,20(13-14):1794-806,2014)。然而，若干研究报道了MSC治疗的副作用。具体而言，若干研究表明，MSC通过肿瘤突变和恶性突变引起肿瘤快速生长和转移，并且对抗癌药具有抗性。此外，各种研究表明间充质干细胞的自发恶性转化。同时，“癌症”的特征是“不受控制的细胞生长”，并且这种异常的细胞生长导致形成大量称为“肿瘤”的细胞，这些细胞渗透入周围组织，并且在严重的情况下可转移到其他器官，这在学术上也称为“瘤形成”。治疗癌症的方法包括手术、放射疗法、化学疗法(包括给予抗癌药)等。抗癌药是作用于无限增殖的癌细胞以抑制癌细胞的增殖和生长的药物。目前广泛使用的烷基化抗癌药如顺铂和环磷酰胺与构成DNA的核苷酸中的氮共价结合，并因此展现出抗癌活性。5-氟尿嘧啶抑制参与核酸生物合成的酶，或直接插入DNA或RNA中因此变得有活性。另外，阿霉素等抗生素强烈地作用于DNA以抑制DNA的固有功能，因此展现抗癌作用。然而，这些抗癌药不仅作用于肿瘤细胞，而且作用于正常细胞，特别是作用于快速增殖和分化的活细胞如骨髓细胞或肠上皮细胞，因此伴随着各种副作用，例如肾毒性、呕吐和神经毒性。此外，与其他癌细胞不同，肿瘤中的癌症干细胞仍处于静息期，并且比转移性癌细胞的侵袭力更低。因此，此类细胞存活，被排除在抗癌药的攻击之外，使得仅通过诱导肿瘤中存在的常见癌细胞的死亡(细胞凋亡)不能完全除去肿瘤。因此，作为使用间充质干细胞开发癌症治疗剂以克服抗癌药等的副作用的大量努力的结果，诸位专利技术人发现通过在补充有阿司匹林、维生素C等的培养基中培养产生的间充质干细胞在保持细胞活性的同时具有抑制癌细胞增殖的作用，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
因此，本专利技术的一个目的是提供一种用于产生间充质干细胞的包含维生素C和阿司匹林的培养基组合物，该间充质干细胞具有改进的针对癌细胞增殖的抑制活性；以及一种通过在培养基中培养间充质干细胞产生具有改进的针对癌细胞增殖的抑制活性的间充质干细胞的方法。根据本专利技术，上述和其他目的可以通过提供用于产生间充质干细胞的包含阿司匹林的培养基组合物来实现，该间充质干细胞具有改进的针对癌细胞增殖的抑制活性。根据本专利技术的另一个方面，提供了产生具有改进的抑制癌细胞增殖能力的间充质干细胞的方法，其包括在包含阿司匹林的培养基中培养间充质干细胞。根据本专利技术的另一个方面，提供了使用用于产生间充质干细胞的包含阿司匹林的培养基组合物产生具有改进的抑制癌细胞增殖能力的间充质干细胞。附图说明从以下详细描述结合附图将更清楚地理解本专利技术的上述和其他目的、特征和其他优点，其中：图1示出根据阿司匹林浓度的Vit.C-MSC的细胞毒性分析结果；图2示出在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC的形态；图3示出在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC的增殖率、活力和细胞大小；图4是示出在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC的集落形成测定(CFA)结果的图像；图5示出在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC的集落形成测定(CFA)的测量结果；图6示出用以分析在不含阿司匹林的对照培养基中培养的Vit.C-MSC的CD标记物表达的FACS结果。图7示出用以分析在包含0.1mM阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC的CD标记物表达的FACS结果。图8示出用以分析在包含0.5mM阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC的CD标记物表达的FACS结果。图9示出用以分析在包含1mM阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC的CD标记物表达的FACS结果。图10示出用以鉴定在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC分化为脂肪细胞的能力的油红O染色结果；图11示出用以鉴定在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC向脂肪细胞的分化水平的520nm吸光度测量结果；图12示出用以鉴定在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC分化为骨细胞的能力的茜素红S染色结果；图13示出用以鉴定在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC向骨细胞的分化水平的560nm吸光度测量结果；图14示出将在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC与在癌细胞培养基中的MCF-7癌细胞直接共培养后癌细胞数与总细胞数的比率计算结果，随后通过FACS测定癌细胞的分布；图15示出将在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC与在癌细胞培养基中的PANC-1癌细胞直接共培养后癌细胞数与总细胞数的比率计算结果，随后通过FACS测定癌细胞的分布；图16示出将在包含0.5mM阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC与在癌细胞培养基中的乳腺癌细胞(MCF-7)或胰腺癌细胞(PANC-1)直接共培养后，对针对癌细胞增殖的抑制活性的鉴定结果；图17示出将在包含阿司匹林的培养基培养的Vit.C-MSC与在癌细胞培养基中的乳腺癌细胞(MCF-7)直接共培养后的癌细胞数量；图18示出将在包含阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC与在癌细胞培养基中的PANC-1癌细胞直接共培养后的癌细胞数量；图19示出将在包含0.5mM阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC与在癌细胞培养基中的乳腺癌细胞(MCF-7)或胰腺癌细胞(PANC-1)直接共培养后，对针对癌细胞增殖的抑制活性的鉴定结果；图20是将在包含0.5mM阿司匹林的培养基中培养的Vit.C-MSC与在癌细胞培养基中的PANC-1癌细胞(红色)直接培养后0小时和48小本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于产生间充质干细胞的培养基组合物，其包含阿司匹林，该间充质干细胞具有改进的抑制癌细胞增殖的能力。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.29 KR 10-2016-00971071.一种用于产生间充质干细胞的培养基组合物，其包含阿司匹林，该间充质干细胞具有改进的抑制癌细胞增殖的能力。2.根据权利要求1的培养基组合物，其还包含维生素C。3.根据权利要求1的培养基组合物，其中该培养基组合物是包含5％-10％FBS和NAC(N-乙酰半胱氨酸)的DMEM或K-SFM。4.根据权利要求3的培养基组合物，其还包含钙、rEGF、胰岛素和氢化可的松。5.根据权利要求1的培养基组合物，其中该间充质干细胞衍生自选自以下的组织：脂肪、子宫、骨髓、肌肉、胎盘、脐带血液、尿液和皮肤。6.根据权利要求1的培养基组合物，其中该阿司匹林的浓度为0.1mM至1mM。7.根据权利要求1的培养基组合物，其中该癌细胞是乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质肉瘤、间变性星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、肺癌、小细胞肺癌、宫颈癌、结肠癌、直肠癌、脊索瘤、咽喉癌、卡波西肉瘤、淋巴肉瘤、淋巴内皮肉瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病、前列腺癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、睾丸肿瘤、维尔姆斯肿瘤、尤因氏瘤、膀胱癌、血管肉瘤、内皮肉瘤、腺癌、汗腺瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状肉瘤、囊状肉瘤、支气管癌、髓样癌、肥大细胞瘤、间皮瘤、滑膜瘤、黑素瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、少突神经胶质瘤、听神经瘤、血管母细胞瘤、脑膜瘤、松果体瘤、室管膜瘤、颅咽管瘤、上皮癌、胚胎癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、纤维肉瘤、粘液瘤、粘膜肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨性肉瘤或癌症...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗廷灿，金恩英，
申请(专利权)人：罗廷灿，
类型：发明
国别省市：韩国,KR