一种基于酶切的TA克隆载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于酶切的TA克隆载体及其构建方法和应用，所述基于酶切的TA克隆载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，命名为pTA03载体。该载体经限制性内切酶AhdI酶切消化后，纯化的线性载体片段可用于TA克隆，该载体携带ccdB致死基因，无需进行蓝白斑筛选，阳性率接近100％。该方案可靠性高，成本较低，能够进行大批量制备。

【技术实现步骤摘要】
一种基于酶切的TA克隆载体及其构建方法和应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体地说，涉及一种基于酶切的TA克隆载体及其构建方法和应用。
技术介绍
TA克隆是目前克隆PCR产物最简便、快捷、经济的方法，在分子生物学领域应用极其广泛。根据反应过程中使用的酶的种类，TA克隆可主要分为两类，一类是基于T4DNA连接酶，一类是基于DNA拓扑异构酶I(TOPO)，其中前者载体制备容易，成本低，高效连接耗时长，后者载体制备繁琐，成本高，高效连接耗时极短。根据载体产生T末端的方式，有利用转移酶在PCR产物末端加T和酶切产生T末端两种，前者通量高，一致性差，后者通量略低，一致性好。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对上述的问题，提供了一种基于酶切的TA克隆载体及其构建方法和应用，该TA克隆载体可靠性高，一致性好，成本低廉，中小型实验室即可使用。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种基于酶切的TA克隆载体，所述基于酶切的TA克隆载体的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，命名为pTA03载体。本专利技术还提供一种基于酶切的TA克隆载体的构建方法，包括以下步骤：取3-5μgpTA03载体，37℃条件下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于酶切的TA克隆载体，其特征在于，所述基于酶切的TA克隆载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，命名为pTA03载体。

【技术特征摘要】
1.一种基于酶切的TA克隆载体，其特征在于，所述基于酶切的TA克隆载体的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，命名为pTA03载体。2.一种如权利要求1所述的基于酶切的TA克隆载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：取3-5μgpTA03载体，37℃条件下用限制性内切酶AhdI酶切消化3-18小时，酶切结束后补加少量EcoRV-HF内切酶消化30分钟，65℃保持20分钟，酶切产物采用酶切试剂盒直接过柱回收，或者用DNA凝胶回收试剂盒回收；回收产物-20℃保存，该产物即为制备好的TA克隆载体。3.一种如权利要求1所述的基于酶切的TA克隆载体的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、制备基于酶切的TA克隆载体：取3-5μgpTA03载体，37℃条件下用限制性内切酶AhdI酶切消化3-18小时，酶切结束后补加少量EcoRV-HF内切酶消化30分钟，65℃保持20分钟，酶切产物采用酶切试剂盒直接过柱回收，或者用DNA凝胶回收试剂盒回收；回收产物-20℃保存，该产物即为制备好的TA克隆载体；步骤2、将步骤1制备好的基于酶切的TA克隆载体与目的PCR片段混合配制连接反应体系，混匀后短暂离心3-5秒，将混合液于22度反应5分钟，反应结束后置冰上，进行后续的转化反应。4.根据权利要求3所述的基于酶切的TA克隆载体的使用方法，其特征在于，步骤1中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤浩茹，江雷雨，陈清，叶宇芸，肖婕，冯琛，刘勇强，王熙然，王小蓉，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51