精氨酸提高聚合酶储存稳定性制造技术

提供了包含聚合酶的液体储存溶液。在一些实施方式中，本文提供了用于储存多核苷酸操纵酶(例如，聚合酶或本文所述的其他酶)的液体储存溶液。在一些实施方式中，溶液包含，酶(例如，聚合酶或限制性内切酶)；游离精氨酸或其盐或精氨酸衍生物(例如，但不限于精氨酸乙酯，精氨酰胺二盐酸盐)或其盐；和5％或更多的冷冻保护剂。

Arginine improves polymerase storage stability

A liquid storage solution comprising a polymerase is provided. In some embodiments, a liquid storage solution for storing polynucleotide manipulation enzymes (e.g., polymerases or other enzymes described herein) is provided herein. The solution contained in some embodiments, the enzyme (e.g., PCR or restriction endonuclease); free arginine or its salt or arginine derivatives (e.g., but not limited to arginine ethyl ester, arginine amide hydrochloride two) or a salt thereof; and 5% or more of the cryoprotective agent.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】精氨酸提高聚合酶储存稳定性相关专利申请的交叉参考本申请要求2014年11月25日提交的美国临时专利申请号62/084,505的优先权，该文通过引用纳入本文。专利技术背景对于各种应用，天然或重组热稳定聚合酶已广泛用于热循环链式反应，例如PCR或qPCR，用于各种应用。对于长期储存稳定性，热稳定聚合酶通常储存在含有一种或多种非离子型洗涤剂，例如NP-40，吐温20，和曲通X的缓冲液中。参见例如美国专利6,127,155。根据美国专利申请2008/0064071A1和2010/0099150A1，还发现两性离子洗涤剂如CHAPS，CHAPSO和Surfynol增强聚合酶储存稳定性和活性，尽管以前的出版物表明两性离子洗涤剂，如CHAPS可潜在地造成蛋白质变性(Hielmeland，1980)。
技术实现思路
在一些实施方式中，本文提供了用于储存多核苷酸操纵酶(例如本文所述的聚合酶或其它酶)的液体储存溶液。在一些实施方式中，所述溶液包含酶(例如聚合酶或限制性内切酶)，游离精氨酸或其盐或精氨酸衍生物(例如但不限于精氨酸乙酯，精氨酰胺二盐酸盐)或其盐，和5％或更多的冷冻保护剂。在一些实施方式中，所述冷冻保护剂是二醇，三醇，多元醇，一元醇或亚砜。在一些实施方式中，所述游离精氨酸或其盐或精氨酸衍生物或其盐的浓度是0.01-5M(例如0.01-2.5M)。在一些实施方式中，所述储存溶液还包含一种或多种缓冲剂，KCl，乙二胺四乙酸(EDTA)，或二硫苏糖醇(DTT)。在一些实施方式中，所述液体溶液包含缓冲剂并且该缓冲剂是Goods缓冲剂。在一些实施方式中，所述Goods缓冲剂选自下组：MES，BIS-TRIS，ADA，ACES，PIPES，Bis-6Tris丙烷，MOPSO，BES，MOPS，TES，HEPES，DIPSO，MPOS，TAPSO，HEPPSO，POPSO，EPPS，N-三(羟甲基)甲基甘氨酸，TRIS，AMP，重碳酸盐，N-二(羟乙基)甘氨酸，硼酸盐，卡可酸盐，CAPS，CAPSO，CHES，柠檬酸盐，DIPSO，甘氨酸，甘氨酰甘氨酸，磷酸盐，TAPS，TAPSO和TEA。在一些实施方式中，所述精氨酸或其盐或精氨酸衍生物或其盐浓度是0.1-1.0M。在一些实施方式中，所述溶液缺乏足以维持模板多核苷酸的聚合的组分。在一些实施方式中，所述溶液缺乏以下至少一种：模板多核苷酸；或寡核苷酸引物。在一些实施方式中，所述溶液温度是-80到5℃。在一些实施方式中，所述溶液温度是-30到5℃。在一些实施方式中，所述溶液温度是-80到10℃。在一些实施方式中，所述溶液温度是-80到50℃。在一些实施方式中，所述溶液温度是-80到90℃。在一些实施方式中，所述溶液温度是-80到100℃。在一些实施方式中，所述溶液不含洗涤剂。在一些实施方式中，所述溶液包含一种或多种洗涤剂。在一些实施方式中，所述溶液不含三糖。在一些实施方式中，所述聚合酶是热稳定聚合酶。在一些实施方式中，所述聚合酶是反转录酶。在一些实施方式中，所述聚合酶是或包括B家族聚合酶。还提供了在储存期间保持聚合酶稳定性的方法。在一些实施方式中，所述方法包括提供如以上所述或他处所述的液体溶液；和，储存溶液至少3(例如至少7，14，21，28，50，100)天。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和5℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和10℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和50℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和90℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和100℃之间。在一些实施方式中，所述方法还包括在储存后，在酶促反应中使用该聚合酶。例如，在一些实施方式中，所述方法包括提供包含所述酶(例如聚合酶或限制性内切酶)和0.01-5.0M精氨酸或其盐或精氨酸衍生物或其盐的液体溶液；和，储存所述溶液至少3(例如至少7，14，21，28，50，100)天。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和5℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和10℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和50℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和90℃之间。在一些实施方式中，所述储存发生在-80和100℃之间。在一些实施方式中，所述方法还包括：在储存后，在酶促反应中使用该聚合酶。定义术语“聚合酶”指进行多核苷酸合成的酶。在一些实施方式中，该聚合酶是模板依赖性聚合酶。在一些实施方式中，所述聚合酶是非模板依赖性聚合酶(例如末端转移酶或多聚A聚合酶)。该术语同时包括全长多肽和具有聚合酶活性的结构域。DNA聚合酶是本领域技术人员熟知的，包括但不限于分离或衍生自激烈火球菌(Pyrococcusfuriosus)、滨海嗜热球菌(Thermococcuslitoralis)和海栖热袍菌(Thermotogamaritime)的DNA聚合酶或其修饰版本。它们包括DNA依赖性聚合酶和RNA依赖性聚合酶，如反转录酶。已知至少5个DNA依赖性DNA聚合酶家族，虽然大多数落入A、B和C家族。各家族之间几乎没有或没有序列相似性。大多数A家族聚合酶是可含有多重酶促功能(包括聚合酶、3′到5′核酸外切酶活性和5′到3′核酸外切酶活性)的单链蛋白质。B家族聚合酶通常有具有聚合酶和3′到5′核酸外切酶活性的单个催化结构域，以及辅助因子。C家族聚合酶通常是具有聚合和3′到5′核酸外切酶活性的多亚基蛋白质。在大肠杆菌中，已经发现了3种类型的DNA聚合酶，DNA聚合酶I(A家族)、DNA聚合酶II(B家族)和DNA聚合酶III(C家族)。在真核细胞中，核复制中涉及3种不同的B家族聚合酶，DNA聚合酶α、δ和ε，并且A家族聚合酶，聚合酶γ用于线粒体DNA复制。其它类型的DNA聚合酶包括噬菌体聚合酶。相似地，RNA聚合酶通常包括真核RNA聚合酶I、II和III，和细菌RNA聚合酶以及噬菌体和病毒聚合酶。RNA聚合酶可以是DNA依赖性和RNA依赖性的。本文所用的“热稳定聚合酶”或“热稳定性聚合酶”指使用DNA或RNA作为模板通过向核苷酸链中加入核苷酸单元以催化多核苷酸合成的任何酶且该酶在45℃和100℃之间的温度下达到最佳活性。术语“核酸扩增”或“扩增反应”指用于倍增核酸靶序列拷贝的任何体外方法。这种方法包括但不限于聚合酶链反应(PCR)，DNA连接酶链反应(参见美国专利号4,683,195和4,683,202，《PCR方案：方法和应用指南》(PCRProtocols：AGuidetoMethodsandApplications)(Innis等编，1990))，(LCR)，QBetaRNA复制酶和基于RNA转录(如TAS和3SR)的扩增反应以及本领域技术人员已知的其它反应。“扩增”指将溶液置于足以允许多核苷酸扩增的条件下的步骤(如果反应的所有组分是完整的)。扩增反应的组分包括，例如，引物、多核苷酸模板、聚合酶、核苷酸等。术语扩增一般是指靶核酸的“指数型”增长。然而，本文所用的扩增也可指核酸的选择靶序列数量的线性增长，如由循环测序所得。“寡核苷酸引物”或“引物”指与靶核酸上的序列杂交并且用作核酸合成的起始点的寡核苷酸序列。引物可以是各种长度并且通常长度小于50个核苷酸，例如长度为12-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于聚合酶的液体储存溶液，所述溶液包含，所述聚合酶；游离精氨酸，或其盐，或精氨酸衍生物或其盐，和5％或更多的冷冻保护剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.25 US 62/084,5051.一种用于聚合酶的液体储存溶液，所述溶液包含，所述聚合酶；游离精氨酸，或其盐，或精氨酸衍生物或其盐，和5％或更多的冷冻保护剂。2.如权利要求1所述的液体溶液，其中所述冷冻保护剂是二醇、三醇、多元醇、一元醇或亚砜。3.如权利要求1所述的液体溶液，其中所述游离精氨酸或其盐或精氨酸衍生物或其盐的浓度是0.01-2.5M。4.如权利要求1所述的液体溶液，其还包含缓冲剂、KCl、乙二胺四乙酸(EDTA)或二硫苏糖醇(DTT)中的一种或多种。5.如权利要求4所述的液体溶液，其中所述液体溶液包含缓冲剂并且所述缓冲剂是Goods缓冲剂。6.如权利要求5所述的方法，其中所述Goods缓冲剂选自下组：MES、BIS-TRIS、ADA、ACES、PIPES、Bis-6Tris丙烷、MOPSO、BES、MOPS、TES、HEPES、DIPSO、MPOS、TAPSO、HEPPSO、POPSO、EPPS、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸、TRIS、AMP、重碳酸盐、N-二(羟乙基)甘氨酸、硼酸盐、卡可酸盐、CAPS、CAPSO、CHES、柠檬酸盐、DIPSO、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、磷酸盐、TAPS、TAPSO和TEA。7.如权利要求1所述的液体溶液，其中所述精氨酸或其盐的浓度是0.1-1.0M。8.如权利要求1-7中任一种所述的液体溶液，其中所述溶液缺乏足以维持模板多核苷酸的聚合的组分。9.如权利要求8所述的液体溶液，其中所述溶液缺乏以下至少一种：模板多核苷酸；或寡核苷酸引物。10...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑旻，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US