一种检测5‑羟吲哚乙酸试剂及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种检测5‑羟吲哚乙酸的试剂及试剂的制备方法，目的是提供的试剂应具有操作简单、检测时间短、准确度高、重复性和稳定性好的特点，所提供的试剂制备方法应具有制备方便以及成本不高的特点。技术方案是：一种检测5‑羟吲哚乙酸的试剂，包括以下成分及含量：a、5‑羟吲哚乙酸试剂1；b、5‑羟吲哚乙酸试剂2；c、液体型5‑羟吲哚乙酸参考校准品。一种检测5‑羟吲哚乙酸试剂的制备方法，按照以下步骤进行：1)制备5‑羟吲哚乙酸试剂1；2)制备5‑羟吲哚乙酸试剂2；3)制备液体型5‑羟吲哚乙酸参考校准品。

A 5 hydroxyindole acetic acid detection reagent and preparation method thereof

Preparation method of reagent and reagent of the invention relates to a detection 5 hydroxyindole acetic acid. The purpose is to provide the reagent should has the advantages of simple operation, short detection time, high accuracy, good repeatability and stability characteristics, characteristics of reagent preparation method provided should have convenient preparation and low cost the. The technical scheme is: reagent for detecting 5 hydroxyindole acetic acid, which comprises the following components and content: A, 5 hydroxyindole acetic acid reagent 1; B, 5 hydroxyindole acetic acid reagent 2; C, 5 liquid hydroxyindole acetic acid reference calibrator. A 5 hydroxyindole acetic acid detection reagent preparation method, in accordance with the following steps: 1) preparing 5 hydroxyindole acetic acid reagent 1; 2) prepared 5 hydroxyindole acetic acid reagent 2; 3) preparation of 5 liquid hydroxyindole acetic acid reference calibrator.

【技术实现步骤摘要】
一种检测5-羟吲哚乙酸试剂及制备方法
本专利技术涉及一种检测5-羟吲哚乙酸的试剂及试剂的制备方法，特别是采用乳胶增强免疫比浊法检测体液(血清、血浆或尿液等)中的5-羟吲哚乙酸的试剂及相应的制备方法，可广泛应用在医学及生物化学

技术介绍
5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindoleaceticacid,5-HIAA)为吲哚乙酸的衍生物,5-羟吲哚乙酸是5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)在单胺氧化酶(Monoamineoxidase,MAO)作用下转化而来的,是人体内重要的活性物质。5-HIAA是哺乳动物尿中的正常组成成分,同时也存在于脑脊液、血小板等体液组织中,最终由尿中排出。临床上将5-HIAA的过度分泌作为类癌瘤的最为特异性的生化指征。类癌(carcinoid)又称类癌瘤(carcinoidtumor),是一组发生于胃肠道和其他器官嗜铬细胞的神经内分泌肿瘤,其临床、组织化学和生化特征可因其发生部位不同而异,此种肿瘤能分泌5-HT、激肽类、组织胺等生物学活性因子,引起血管运动障碍、胃肠症状、心脏和肺部病变等,称为类癌综合征(carcinoidsyndrome)。因为类癌细胞释放大量的5-HT,而5-HT进一步代谢生成5-HIAA,所以类癌患者尿中5-HIAA排泄量显著增高,一般在156.9～3138μmol/24h(正常参考值10.5～47.1μmol/24h尿),因此24h尿中5-HIAA含量检测是诊断类癌的有力证据,且尿中5-HIAA量与类癌综合征状出现的频率和严重程度有直接关系。Allen等还发现血浆中5-HIAA含量可以作为监视类癌患者的一个非常有用的生物标志物。早在1976年,sberg报道脑脊液中5-HIAA降低与自杀之间存在相关性。Stanley等1983年证明5-HIAA可以作为自杀患者的生物标志物，且5-HIAA水平的下降与自杀几率之间有相关性。另外5-HIAA含量增高可作为妊娠性高血压、肝硬化、急性阑尾炎筛查的一个有用生物标志物。综上所述,5-HIAA是人体内重要的神经递质代谢产物,增高或降低都会间接反映体内某些病理改变。同时随着对其检测方法研究的日益发展,5-HIAA与临床相关疾病的研究将会得到进一步的进展,5-HIAA将会为临床的诊断和治疗提供越来越可靠的依据目前检测5-HIAA常用的实验室方法有比色法、放射免疫学分析法(RIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)、酶联免疫法(ELISA)。其中比色法操作复杂,且在萃取过程中容易造成5-HIAA的损失,敏感性较低。放射免疫学分析法(RIA)检测耗时长(19～22h)，而且有放射性元素的污染，标记物稳定性差，废弃物难以处理而使其受到限制。化学发光免疫分析法(CLIA)是利用化学发光物质经催化剂催化和氧化剂氧化，形成一个激发态的中间体，这种激发态的中间体回到稳定基态时，发出光子，利用发光信号测量仪测量光子数，从而间接检测5-HIAA的浓度。目前市场上有管式和板式两种试剂盒，但此法存在吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺直接标记抗体的发光效率低，标记物不稳定的缺点；而且这种直接标记法属于瞬间发光型，很难保证测试结果的稳定性和重复性，还需要特殊的检测仪器，不便于常规实验室开展。而利用生物素-亲和素系统检测5-HIAA的电化学发光免疫分析法、高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)，均需要配备昂贵的全自动电化学发光检测仪、高效液相色谱和质谱仪，常规实验室和基层实验室无法开展，而且给患者带来不必要的费用，增加患者负担，不符国家医改相关政策。酶联免疫法(ELISA)自动化程度不高，且受人为因素影响较大，重复性差，整个反应检测时间也很长(至少需要40分钟)。中国专利(公开(公告)号CN104390975A)，利用试剂中的亚汞离子与5-羟吲哚乙酸反应产生红色、类红色沉淀，从而据此初步判断是否携带癌细胞，此方法只能定性，不能定量检测，更不能自动化操作，并且易受干扰，特异性也不一定好。再如中国专利(公开(公告)号CN105131106A)采用均相酶免疫法检测5-羟基吲哚乙酸，虽然可以实现在全自动生化分析仪上进行高通量、快速化的检测。但是该方法使用的酶标偶联物为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-半抗原酶标偶联物，此酶偶联物热稳定性差，试剂的有效期短。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述
技术介绍
的不足，提供一种5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)检测试剂；所提供的试剂应具有操作简单、检测时间短、准确度高、重复性和稳定性好的特点，并可适用于各种类型的全自动生化分析仪或特定蛋白仪的5-羟吲哚乙酸检测试剂；所提供的试剂制备方法应具有制备方便以及成本不高的特点。本专利技术提供的技术方案是：一种检测5-羟吲哚乙酸的试剂，包括以下成分及含量：a、5-羟吲哚乙酸试剂1：试剂1的pH为4.0-11.0；b、5-羟吲哚乙酸试剂2：所述带有抗人5-羟吲哚乙酸抗体的胶乳颗粒，其中的羧基胶乳微球粒径为20-500nm；c、液体型5-羟吲哚乙酸参考校准品：所述液体型5-羟吲哚乙酸参考校准品包括5份形成系列浓度的参考校准品；5份参考校准品中的5-羟吲哚乙酸含量由低到高排列的通式为2n-1xmg/L；n＝1，2，……5；x根据需要确定(取值范围为0.5-2.5)；或者，所述液体型5-羟吲哚乙酸参考校准品也可是单点高浓度的5-羟吲哚乙酸参考校准品。所述缓冲液是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液中的一种或两种以上任意比例的混合。所述试剂1中缓冲液的浓度为20-200mmol/L，缓冲液的pH值为7.0-8.0。所述反应加速剂是聚乙二醇或硫酸葡聚糖(DS-50)。所述反应加速剂浓度为0.01-50g/L。所述反应加速剂浓度优选0.05-30g/L。所述电解质是阴离子电解质或阳离子电解质，浓度为50-200mmol/L。所述电解质优选阳离子中的氯化钠。所述的5-HIAA-偶联物是5羟吲哚乙酸-牛血清蛋白(5-HIAA-BSA，以下同)或5-羟吲哚乙酸－血蓝蛋白(5-HIAA-KHA，以下同)，优选5-HIAA-牛血清蛋白，浓度优选0.01-10g/L。所述的偶联物在这里没有特别限制，只要能达到本专利技术的目的均可。所述表面活性剂是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂；所述表面活性剂浓度为0.5-1g/L。所述非离子表面活性剂，是Theist、Tween、聚氧乙烯月桂醚、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚中的一种或两种以上任意比例的混合。所述5-羟吲哚乙酸试剂2中带有抗人5-羟吲哚乙酸抗体的胶乳颗粒的含量为0.1-50g/L。一种检测5-羟吲哚乙酸试剂的制备方法，按照以下步骤进行：1)5-羟吲哚乙酸试剂1：按配方量将各成分混合，然后调节pH值即成；2)5-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测5‑羟吲哚乙酸的试剂，包括以下成分及含量：a、5‑羟吲哚乙酸试剂1：

【技术特征摘要】
1.一种检测5-羟吲哚乙酸的试剂，包括以下成分及含量：a、5-羟吲哚乙酸试剂1：试剂1的pH为4.0-11.0；b、5-羟吲哚乙酸试剂2：所述带有抗人5-羟吲哚乙酸抗体的胶乳颗粒，其中的羧基胶乳微球粒径为20-500nm；c、液体型5-羟吲哚乙酸参考校准品：所述液体型5-羟吲哚乙酸参考校准品包括5份形成系列浓度的参考校准品；5份参考校准品中的5-羟吲哚乙酸含量由低到高排列的通式为2n-1xmg/L；n＝1，2，……5；x根据需要确定；或者，所述液体型5-羟吲哚乙酸参考校准品是单点高浓度的5-羟吲哚乙酸参考校准品。2.根据权利要求1要求所述的检测5-羟吲哚乙酸的试剂，其特征在于：所述缓冲液是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液中的一种或两种以上任意比例的混合；所述试剂1中缓冲液的浓度为20-200mmol/L，缓冲液的pH值为7.0-8.0。3.根据权利要求1要求所述的检测5-羟吲哚乙酸的试剂，其特征在于：所述反应加速剂是聚乙二醇或硫酸葡聚糖(DS-50)；所述反应加速剂浓度为0.01-50g/L。4.根据权利要求1要求所述的检测5-羟吲哚乙酸的试剂，其特征在于：所述电解质是阴离子电解质或阳离子电解质，浓度为50-200mmol/L。5.根据权利要求1要求所述的检测5-羟吲哚乙酸的试剂，其特征在于：所述的5-HIAA-偶联物是5羟吲哚乙酸-牛血清蛋白或5-羟吲哚乙酸－血蓝蛋白，浓度优选0.01-10g/L。6.根据权利要求1要求所述的检测5-羟吲哚乙酸的试剂，其特征在于：所述表面活性剂是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂；所述表面活性剂浓度为0.5-1g/L。7.根据权利要求1要求所述的检测5-羟吲哚乙酸的试剂，其特征在于：所述5-羟吲哚乙酸试剂2中带有抗人5-HIAA抗体的胶乳颗粒的含量为0.1-50g/L。8.权利要求1要求所述的检测5-羟吲哚乙酸试剂的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒙凯，蔡其浩，李俊英，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：贵州普洛迈德生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52