本发明专利技术公开了D‑色氨酸在抑制铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶中的应用，属于生物医学技术领域。本发明专利技术的D‑色氨酸可有效降低弹性蛋白酶的产生，降低铜绿假单胞菌感染的毒性作用,这将为临床上治疗铜绿假单胞菌感染性疾病提供新的有效途径。本发明专利技术还公开了一种辅助抗铜绿假单胞菌的药物，所述药物中含有D‑色氨酸。D‑色氨酸可用于辅助抗铜绿假单胞菌的药物中，可以广泛应用于创伤、烧伤、供皮区以及其它的铜绿假单胞菌感染治疗，且起效剂量小，安全性高，应用人群广。
D tryptophan in inhibiting elastase production application in Pseudomonas aeruginosa
The invention discloses a D tryptophan in inhibiting elastase production application in Pseudomonas aeruginosa, which belongs to the field of biomedical technology. D tryptophan of the invention can effectively reduce elastase production, reduce toxicity of Pseudomonas aeruginosa infection, which will provide a new and effective way for the clinical treatment of infectious diseases of Pseudomonas aeruginosa. The invention also discloses a medicine adjuvant against Pseudomonas aeruginosa, the drug containing D tryptophan. D tryptophan can be used for adjuvant anti Pseudomonas aeruginosa, can be widely used in trauma, burns, donor sites and other Pseudomonas aeruginosa infection treatment, and the effect of small dosage, high safety, wide application of the crowd.
【技术实现步骤摘要】
D-色氨酸在抑制铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶中的应用
本专利技术涉及D-色氨酸在抑制铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶中的应用，属于生物医学
技术介绍
D-色氨酸(D-tryptophan，D-Trp)是一种浅褐色的晶体，分子式是C11H12N2O2，分子量204.23g/mol，熔点是282-285℃。D-色氨酸的分子结构图如图1所示。铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)是临床常见的多重耐药菌，除了顽强的耐药性，铜绿假单胞菌自身还能产生产生多种毒力因子，包括绿脓菌素、弹性蛋白酶、鼠李糖脂、凝集素等，对患者有明显的毒副作用。其中弹性蛋白酶主要由基因lasB编码合成，其毒性作用主要体现在降解免疫系统中的蛋白成分物质，包括补体C3、激肽原、抗菌肽、细胞因子、免疫球蛋白、表面活性蛋白、蛋白多糖、细菌鞭毛蛋白等，大大破坏机体的免疫机制；能损伤组织细胞，抑制纤维母细胞的生长，导致PA的感染患者慢性溃疡的产生；可通过降解调理素来抵抗表面活性蛋白-A介导的自噬作用。
技术实现思路
本专利技术的目的之一，是提供D-色氨酸在抑制铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶中的应用。D-色氨酸可有效降低铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的产生，降低铜绿假单胞菌感染的毒性作用，这将为临床上治疗铜绿假单胞菌感染性疾病提供新的有效途径。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：D-色氨酸在抑制铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶中的应用。专利技术的申请人经过试验发现，D-色氨酸对铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶抑制率：D-色氨酸浓度为5mM时的抑制率>20％，D-色氨酸浓度为10mM时的抑制率>23％。由此可见，D-色氨酸可有效降低铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的产生，降低铜绿假单胞菌感染的毒性作用，为临床上治疗铜绿假单胞菌感染性疾病提供新的有效途径。本专利技术的目的之二，是提供一种辅助抗铜绿假单胞菌的药物。D-色氨酸可用于辅助抗铜绿假单胞菌的药物中，可以广泛应用于创伤、烧伤、供皮区以及其它的铜绿假单胞菌感染治疗，且安全性高，应用人群广。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种辅助抗铜绿假单胞菌的药物，所述药物中含有D-色氨酸。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。进一步，所述药物的剂型为乳剂、膏剂或溶液剂。采用上述进一步的有益效果是：将D-色氨酸制成更多剂型，并应用在医用材料上，能更广泛的发挥D-色氨酸抑制铜绿假单胞菌感染后弹性蛋白酶的产生，减少铜绿假单胞菌的毒性作用，为铜绿假单胞菌感染更优选的治疗方法。本专利技术的有益效果是：1.D-色氨酸可有效降低铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的产生，降低铜绿假单胞菌感染的毒性作用。2.D-色氨酸对铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶抑制率：D-色氨酸浓度为5mM时的抑制率>20％，D-色氨酸浓度为10mM时的抑制率>23％。3.D-色氨酸可作为一种抗菌辅剂起效剂量小，安全性高。4.D-色氨酸可用于辅助抗铜绿假单胞菌的药物中，可以广泛应用于创伤、烧伤、供皮区以及其它的铜绿假单胞菌感染治疗，且起效剂量小，安全性高，应用人群广。附图说明图1是本专利技术D-色氨酸的分子结构图。图2是本专利技术D-色氨酸对铜绿假单胞菌PAO1产弹性蛋白酶的影响。图3是弹性蛋白酶的标准工作曲线。图4是本专利技术D-色氨酸对铜绿假单胞菌PAO1中lasB基因表达的影响。具体实施方式以下结合具体附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例1将-80℃保存的铜绿假单胞菌PAO1划板接种至LB固体培养基，37℃培养24h。挑取约1mm2的单克隆菌落至LB液体培养基中，200r/min，37℃培养6-8h。用新鲜PTSB液体培养基(胰蛋白胨50g、TSB培养基2.5g，加超纯水定容至1000ml，调节pH至7.2-7.4，121℃高温灭菌30min),将D-色氨酸溶至10mM，再用培养基依次稀释。将含不同浓度的D-色氨酸10、5、1、0.1、0mM的LB培养基分别取2ml于12孔细胞培养板中，每孔加入2μl0.5麦氏浊度的铜绿假单胞菌PAO1菌液，各浓度做3个复孔。37℃培养24h。吸取待测菌液，4℃、12000rpm离心5min，吸取200μl上清液于新的EP管，加入800μl弹性蛋白酶反应缓冲液(Tris-HCl0.1M，CaCl21mM)及2mg刚果红底物。30℃振荡培养24h后离心去除多余的刚果红底物，取200μl液体测OD495。按上述操作进行弹性蛋白酶标准品工作曲线的测定(图3)，经浓度换算后，D-色氨酸对铜绿假单胞菌PAO1产弹性蛋白酶的影响见图2，D-色氨酸浓度为5mM时的PAO1产弹性蛋白酶的抑制率>20％，D-色氨酸浓度为10mM时的抑制率>23％。实施例2将铜绿假单胞菌PAO1按实施例1中步骤培养，收集菌液后离心，所得沉淀按照RNeasyMiniKit提取试剂盒的标准操作流程提取各组的RNA，测定各组RNA浓度后，按体系配比(20μl体系：PrimescriptRtmastermix4μl、cDNA1μg、超纯水添至20μl)进行cDNA逆转录。经普通PCR验证cDNA能扩增弹性蛋白酶编码基因lasB(具体序列见表1)，下一步进行荧光定量PCR。配制20μl体系包括：PremixExTorqⅡ10μl，上下游引物各0.8μl，cDNA稀释10倍后取2μl，超纯水6.4μl。反应条件为：95℃5S，(95℃5S，61℃30S，72℃20S)×40个循环。扩增产物用管家基因rpsL的量归一化后再进行比较，实验重复三次。结果见图4，发现D-色氨酸能下调铜绿假单胞菌中弹性蛋白酶编码基因lasB及其上游控制基因lasI和lasR的表达。表1PCR相关引物汇总表由此可见，D-色氨酸可有效降低铜绿假单胞菌绿脓菌素及弹性蛋白酶的产生。实施例3一种辅助抗铜绿假单胞菌的药物，所述药物中含有D-色氨酸。所述药物的剂型为乳剂、膏剂或溶液剂。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...
【技术保护点】
D‑色氨酸在抑制铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶中的应用。
【技术特征摘要】
1.D-色氨酸在抑制铜绿假单胞菌产弹性蛋白酶中的应用。2.一种辅助抗铜绿假单胞菌的药物，其特征在于，所述药物中含有...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡挺，张顺，费秋萍，
申请(专利权)人：蔡挺，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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