外泌体的分离方法技术
Method of separating an exocrine body
The present invention provides a method for separating exosomes, the separation method at least comprises the following steps: (1) with a label into target cells in CD63 culture; (2) to obtain supernatant after centrifugation; (3) adding the magnetic body to the supernatant, can combine specific marker tags with enough the CD63 contains the magnetic body incubation; (4) the supernatant was placed in a magnetic field; (5) to remove the supernatant after adding buffer solution, adding separation column, eluting exosomes retention on the column using the sorting buffer, and collect. The collection method according to the invention has high collection efficiency.
【技术实现步骤摘要】
外泌体的分离方法
本专利技术涉及一种外泌体的分离方法，属于生物
技术介绍
外泌体(exosome)是由细胞内多泡体(multivesicularbody，MVB)与细胞膜融合后，释放到细胞外基质中的一种直径约30～120nm的膜性囊泡。最早由Johnstone等研究者在研究网织红细胞向成熟红细胞转变过程时发现。又经过多年研究，科学家发现除了网织红细胞以外，T细胞、B细胞、血小板、树突细胞、肥大细胞等血细胞及上皮细胞、肿瘤细胞等其他非血源性细胞都会分泌外泌体，被分泌出的外泌体会进入血液、唾液、尿液、及乳汁等体液中，通过循环系统到达其他细胞与组织，产生远程调控作用。外泌体中包含多种RNA分子，包括mRNA、miRNA等。但也有少数报道指出，某些特殊来源的外泌体也会包含DNA分子，例如，有研究者发现恶性胶质瘤及星形细胞瘤细胞所释放的外泌体中可能含有线粒体DNA。自2007年首次在外泌体中发现mRNA和miRNA，研究者已在人类及小鼠外泌体中发现了数千个不同mRNA，而且有些转录本只存在于外泌体中，在胞内却无法检测到。这表明，RNA进入外泌体的过程会受到某些特殊...
【技术保护点】
一种外泌体的分离方法，其特征在于，所述分离方法至少包括以下步骤：向目标细胞中导入带有标签的CD63，使用细胞培养基进行培养；离心后取上清液；向上清液中加入磁性体，所述磁性体上含有能够与CD63上的标签特异性结合的标记物，孵育；将上清液置于磁场中；去除上清液后加入缓冲液，加入分选柱，利用缓冲液洗脱分选柱上滞留的外泌体，并收集。
【技术特征摘要】
1.一种外泌体的分离方法，其特征在于，所述分离方法至少包括以下步骤：向目标细胞中导入带有标签的CD63，使用细胞培养基进行培养；离心后取上清液；向上清液中加入磁性体，所述磁性体上含有能够与CD63上的标签特异性结合的标记物，孵育；将上清液置于磁场中；去除上清液后加入缓冲液，加入分选柱，利用缓冲液洗脱分选柱上滞留的外泌体，并收集。2.根据权利要求1所述的外泌体的分离方法，其特征在于：所述标签选自Flag、His6、GST、MBP、His-MBP、HA中的任意一种或几种。3.根据权利要求1所述的外泌体的分离方法，其特征在于：所述步骤（1）还包括以下技术特征中的任意一种或几种：所述CD63通过载体携带导入目标细胞；向目标细胞中导入带有标签的CD63后培养12~36h，然后筛选出含有CD63的阳性克隆细胞，再继续培养阳性克隆细胞。4.根据权利要求1所述的外泌体的分离方法，其特征在于：所述步骤（2）还包括以下技术特征中的任意一种或几种：离心前清洗细胞；所述离心的条件为1000g离心5min，随后4℃12000g离心30min；向离心后的上清液中加入缓冲液。5.根据权利要求1所述的外泌体的分离方法，其特征在于：所述步骤（3）中孵育的温度为2~5...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈意雄，朱鹏飞，蔡晓龙，邹杰，
申请(专利权)人：上海科维创生物科技有限公司，汉恒生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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