本发明专利技术的实施方式大体上涉及鉴定受试者可能发展糖尿病相关的对肾单位损伤、或处在早期糖尿病型肾病的受试者的方法。尤其，数个实施方式涉及进行糖尿病型肾病相关的RNA的量化，以对受试者与具有正常肾单位功能的群体进行比较和/或随着时间的推移跟踪所述受试者的糖尿病型肾病的进展，所述RNA分离自患者尿液样品中的囊泡。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关案件 本申请要求2012年10月5日提交的美国临时申请系列号61/710, 627的好处，其 全部公开内容通过引用并入本文。 背景
本公开大体上涉及与糖尿病型肾病相关的各种生物标记的鉴定。数个实施方式 涉及糖尿病型肾病的诊断，并且，更具体地，本公开涉及从源自尿液的外泌小体分离的mRNA 的鉴定和使用，以及它们在糖尿病型肾病的鉴定和持续监测中的应用。 相关抟术的描沐 -般来说，肾的功能在于过滤血液中的各种代谢废物和过多的水。每天，成年人的 肾过滤约200夸脱的血液，导致产生并排泄约2夸脱的废物和额外的水。肾的功能单位是 肾单位，并且每个肾包括约1百万个肾单位。每个肾单位内是肾小球，其用作过滤装置，其 保留血流中的正常蛋白质和/或细胞，并且允许过多的水和废物穿过而被剩余的肾单位处 理（例如，浓缩或稀释）。尽管一些肾功能的丧失是可以忍受的-许多个体可用仅仅一个肾 过正常生活-但是在许多情况下肾功能的下降是由于进行性疾病或损伤。在极端情况下， 肾功能的进行性丧失导致需要肾替代疗法，比如透析或甚至肾移植。肾功能丧失的两个最 常见的原因是糖尿病和高血压。根据美国糖尿病协会的最新数据，超过8%的美国人口是患 糖尿病的。由于糖尿病造成的晚期肾病，超过200, 000人依靠长期透析或依靠肾移植生活。 这不仅仅给患者本人而且给他们的家庭和医疗保健系统造成巨大的成本。
技术实现思路
在数个实施方式中，提供了鉴定受试者可能发展成糖尿病型肾病或目前遭受糖尿 病型肾病的方法，该方法包括获得来自受试者的尿液样品，其中所述样品包括与RNA结合 的囊泡，从所述样品分离所述囊泡，使所述囊泡裂解以释放囊泡结合的RNA，其中所述囊泡 结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，其中与糖尿病诱导的对肾单 位的损伤相关的RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UM0D、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组，量化 与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，将来自所述受试者的与糖尿病诱导的对肾单 位的损伤相关的RNA的量与来自具有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行比较，当所述 受试者的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的数量和具有正常肾功能的个体中 RNA的数量之间有差异时，鉴定受试者可能发展或目前遭受糖尿病型肾病。在数个实施方式 中，通过下述方法进行量化，所述方法包括使来自所述样品的RNA接触逆转录酶，以产生互 补0嫩(。0嫩），和（^)使。0嫩接触对？卩六1?(：认、5嫩01、通00、顺卩2、5^：12六1和〇024之一 特异性的正义引物和反义引物以及DNA聚合酶，以产生扩增的DNA。其后，可量化所述mRNA 的表达水平（使用扩增的DNA作为替代品）。 在数个实施方式中，所述方法进一步包括基于出现的结果向受试者施用疗法。例 如，可单独或结合膳食、训练或生活方式的改变而施用药物疗法。另外，也可施用透析。在 一些实施方式中，进行肾移植。 也提供了鉴定受试者遭受糖尿病型肾病的方法，包括获得来自受试者的尿液样 品，其中所述样品包括与RNA结合的囊泡，从所述样品分离所述囊泡，使所述囊泡裂解以释 放所述囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相 关的RNA，其中所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、 UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组，量化所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的 RNA，并将来自所述受试者的所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的量与来自 具有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行比较，其中所述受试者和所述个体之间与糖尿 病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的数量之间的差异指示所述受试者遭受糖尿病型肾 病。 而且，另外提供了测定患者的糖尿病型肾病病情发展的方法，包括在第一时间获 得来自患者的第一尿液样品和在第一时间之后的第二时间获得来自患者的第二尿液样 品；其中所述样品包括与RNA结合的囊泡，从所述样品分离所述囊泡，使所述囊泡裂解以 释放囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关 的至少一种RNA和不因糖尿病诱导的对肾单位的损伤而改变的至少一种RNA，其中所述与 糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的至少一种RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、 SLC12A1、⑶24及其组合组成的组，量化所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的至少一 种RNA和所述不因糖尿病诱导的对肾单位的损伤而改变的至少一种RNA，测定所述与糖尿 病诱导的对肾单位的损伤相关的至少一种RNA的量和所述不因糖尿病诱导的对肾单位的 损伤而改变的至少一种RNA的量之间的比例，当与所述第一样品相比，所述第二样品中所 述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的至少一种RNA与所述不因糖尿病诱导的对肾单 位的损伤而改变的至少一种RNA的比例增加时，确认所述患者的糖尿病型肾病病情发展。 另外提供了基于核酸检测早期糖尿病型肾病的方法，包括获得来自受试者的尿液 样品，其中所述样品包括与RNA结合的囊泡，从所述样品分离所述囊泡，使所述囊泡裂解 以释放囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相 关的RNA，其中所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、 UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组，量化所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的 RNA，将来自所述受试者的所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的量与来自具 有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行对比，其中所述受试者和所述个体之间与糖尿病 诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的数量之间的差异指示早期糖尿病型肾病，从而检测早 期糖尿病型肾病。在数个实施方式中，该检测能在利用非核酸检测方法检测之前实现。 在数个实施方式中，提供建议受试者进行糖尿病型肾病的治疗方案的方法，包括 安排受试者的尿液的检测，该检测包括获得来自受试者的尿液样品，其中所述样品包括与 RNA结合的囊泡，从所述样品分离所述囊泡，使所述囊泡裂解以释放所述囊泡结合的RNA， 其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，其中所述与糖 尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和 CD24组成的组，量化所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，将来自所述受试者 的所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的量与来自具有正常肾功能个体的相 应RNA的数量进行对比，当所述受试者的所述与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA 的数量和所述具有正常肾功能的个体中RNA的数量之间有差异时，表征所述受试者可能发 展或目前遭受糖尿病型肾病，当表征为可能发展或目前遭受糖尿病型肾病时，建议所述受 试者进行糖尿病型肾病的疗法。在数个实施方式中，所述疗法包括膳食、训练、透析和/或 生活方式改变的一个或多个。 另外提供了治疗具有糖尿病型肾病的受试者的方法，包括获得来自受试者的尿液 样品，其中所述样品包括与RNA结合的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鉴定受试者可能发展成糖尿病型肾病或目前遭受糖尿病型肾病的方法，包括：获得来自受试者的尿液样品，其中所述样品包括与RNA结合的囊泡；从所述样品分离囊泡；裂解所述囊泡，以释放所述囊泡结合的RNA，其中所述囊泡结合的RNA包括与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA，其中与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA选自由PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24组成的组；通过下述方法量化与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA，所述方法包括：(i)使来自所述样品的RNA接触逆转录酶，以产生互补DNA(cDNA)，和(ii)使所述cDNA接触对PPARGC1A、SMAD1、UMOD、NRF2、SLC12A1和CD24之一特异性的正义引物和反义引物以及DNA聚合酶，以产生扩增的DNA；将量化后的来自所述样品的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的RNA的数量与来自具有正常肾功能个体的相应RNA的数量进行比较；和当所述受试者的与糖尿病诱导的对肾单位的损伤相关的所述RNA的数量和具有正常肾功能的个体中所述RNA的所述数量之间具有差异时，鉴定受试者可能发展成糖尿病型肾病或目前遭受糖尿病型肾病。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：三桥将人，库马尔·夏尔马，
申请(专利权)人：日立化成株式会社，日立化成美国有限公司，加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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