靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，包括RNAi‑Ready pSIREN‑RetroQ‑ZsGreen1载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和靶向整合素β1基因的寡核苷酸链；所述多克隆位点包括BamH I酶切位点和EcoR I酶切位点，所述寡核苷酸链由BamH I酶切位点+靶序列正义链+茎环结构+靶序列反义链+EcoR I酶切位点组成，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点中。本发明专利技术属于基因工程技术领域，本发明专利技术提供的小发夹RNA重组载体可靶向抑制整合素β1的表达，具有特异性好、高效稳定表达、转染效率高等优点。

Small hairpin RNA recombinant vector targeting inhibition of integrin beta 1 expression and construction method thereof

The invention discloses a recombinant vector targeting small hairpin RNA inhibits integrin beta 1 expression, including RNAi Ready pSIREN RetroQ ZsGreen1 vector basic sequence, sequence, resistance gene cloning site sequence, promoter sequence and targeting oligonucleotide chain integrin beta 1 gene; the polyclonal sites including BamH I and EcoR restriction sites I endonuclease, the oligonucleotide chain by BamH I restriction site + target sequence justice chain + stem loop structure + target sequence of antisense +EcoR I restriction sites, the positive oligonucleotide inserted into the multiple cloning sites. The invention belongs to the field of gene engineering technology, and the small hairpin RNA recombination vector provided by the invention can target the expression of integrin beta 1, and has the advantages of good specificity, high efficiency, stable expression and high transfection efficiency.

【技术实现步骤摘要】
靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体及其构建方法
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体及其构建方法。
技术介绍
哮喘是呼吸系统的常见病、多发病，其致残、致死率一直呈上升趋势，已成为严重的社会健康问题。哮喘的发病机制尚未完全明了，但气道炎症和气道重塑是目前哮喘公认的两个主要特征。气道重塑会导致气道不可逆性痉挛，这是部分哮喘患者难以用哮喘药物控制症状的主要原因。现有的大量研究证实，气道平滑肌细胞(airwaysmoothmusclecell，ASMC)才是导致气道狭窄的主要效应细胞，是哮喘发病机制中一类重要的免疫调节细胞，无论有无气道炎症存在，其异常增殖、凋亡、迁移均能引起气道壁增厚，并能通过释放多种活性介质加重气道炎症。因此，ASMC在哮喘气道重塑中处于中心地位，如能有效抑制ASMC异常增殖、凋亡及炎性分泌等，将对减轻哮喘气道重塑产生重要影响。整合素(Integrin)作为一种异源二聚体，由α、β两个不同亚单位经由非共价键连接而成。现已发现18种不同的α亚单位(150-210kD)和9种β亚单位(90-110kD)，它们按不同组合本文档来自技高网...

【技术保护点】
靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：包括RNAi‑Ready pSIREN‑RetroQ‑ZsGreen1载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和靶向整合素β1基因的寡核苷酸链；所述多克隆位点包括BamH I酶切位点和EcoR I酶切位点，所述寡核苷酸链由BamH I酶切位点+靶序列正义链+茎环结构+靶序列反义链+EcoR I酶切位点组成，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点中。

【技术特征摘要】
1.靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：包括RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen1载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和靶向整合素β1基因的寡核苷酸链；所述多克隆位点包括BamHI酶切位点和EcoRI酶切位点，所述寡核苷酸链由BamHI酶切位点+靶序列正义链+茎环结构+靶序列反义链+EcoRI酶切位点组成，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点中。2.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：所述寡核苷酸链的正义链为：GATCCGGCAGGGCCAAATTGTGGGTTTCAAGAGAACCCACAATTGGCCCTGCACGCGTG，即SEQIDNO：1；所述寡核苷酸链的反义链为：AATTCACGCGTGCAGGGCCAAATTGTGGGTTCTCTTGAAACCCACAATTTGGCCCTGCCG，即SEQIDNO：2。3.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：所述抗性基因序列包括氨苄青霉素抗性基因。4.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：所述RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen1载体购自美国Clontech公司。5.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱晨，李杰，王凌伟，何旗，
申请(专利权)人：深圳市人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44