一种hLeg1基因及其应用和药物制造技术

本发明专利技术提供了一种hLeg1基因及其应用和药物，涉及基因的功能与应用技术领域。本发明专利技术以mLeg1基因敲除小鼠为研究对象，利用遗传学，分子生物学，生物化学，细胞生物学的手段对mLeg1基因的功能进行了非常全面的研究，研究结果表明mLeg1蛋白可以通过EGFR调控体内Akt的信号，进而调控机体内的脂肪合成，该研究结果为后期通过人为干预hLeg1基因和hLeg1蛋白的表达水平来治疗人类肥胖症以及癌症病人化疗后的体质恢复提供了新的手段和思路。

HLeg1 gene and its application and medicine

The invention provides a hLeg1 gene, an application and a medicament thereof, relating to the function and the application technical field of the gene. The present invention in mLeg1 gene knockout mice as the research object, using genetics, molecular biology, biochemistry, cell biology function of mLeg1 gene were studied very comprehensive, the results showed that mLeg1 protein can signal through the EGFR control in Akt, thereby regulating fat synthesis in the body, the results of the study to treat human obesity and cancer patients undergoing chemotherapy after the Constitution provides new methods and ideas for later recovery through the expression level of human intervention hLeg1 gene and hLeg1 protein.

【技术实现步骤摘要】
一种hLeg1基因及其应用和药物
本专利技术涉及基因的功能与应用
，具体而言，涉及一种hLeg1基因及其应用和药物。
技术介绍
在过去的几年里，肥胖症病例在全世界范围内迅速增长，目前已是导致人类死亡的第五号威胁。在发达国家，肥胖症早在20世纪80年代就已初露端倪，病例在其后持续增加，只是在过去8年里增加速度有所减缓；而在发展中国家，肥胖患者每年都以极快的速度在增加。尽管肥胖一般不会直接导致死亡，但是，肥胖导致的并发症，尤其是心血管疾病却可以是致命的。在2010年，肥胖大约导致了340万人的死亡。此外，对美国本土的肥胖症患者的研究表明，肥胖症很可能会降低将来人类的平均寿命。据统计，为了治疗肥胖症，美国差不多每年要花费1170亿美元。同时，世界范围内对肥胖症的关注也越来越多。但是，目前，对于有效治疗肥胖症的药物的研究成果还比较少，且与肥胖症相关的药物靶点也比较少。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种hLeg1基因，其编码hLeg1蛋白，hLeg1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。进一步地，hLeg1基因的碱基序列如SEQIDNO.3所示。本专利技术的另一目的在于提供的hLeg1基因作为靶点基因在制备或筛选用于治疗肥胖症或减肥的药物中的应用，该药物是抑制hLeg1基因的表达水平的药物。该药物通过对hLeg1基因的表达水平的抑制，减少hLeg1蛋白的含量，进而实现治疗肥胖症或减肥的效果。本专利技术的另一目的在于提供的hLeg1基因作为靶点基因在制备或筛选用于治疗脂肪缺少疾病或增肥的药物中的应用，该药物是增强hLeg1基因的表达水平的药物。该药物通过对hLeg1基因的表达水平的增强，增加hLeg1蛋白的含量，进而实现治疗脂肪缺少疾病或增肥的效果。本专利技术的另一目的在于提供的hLeg1基因作为靶点基因在制备或筛选用于治疗糖尿病的药物中的应用，该药物是通过增强hLeg1基因的表达水平以激活Akt信号通路使GLUT2运输到细胞膜表面的药物。本专利技术的另一目的在于提供的hLeg1基因的RNAi干扰载体在制备用于治疗肥胖症或减肥的药物中的应用，该RNAi干扰载体沉默hLeg1基因的表达。RNAi干扰载体通过对hLeg1基因的表达的沉默，使其编码的hLeg1蛋白的含量降低，进而实现治疗肥胖症或减肥的效果。本专利技术的另一目的在于提供一种用于治疗肥胖症或减肥的药物，该药物是以上述的hLeg1基因为靶点，抑制hLeg1基因的表达水平。进一步地，该药物是用于沉默hLeg1基因表达的RNAi干扰载体。本专利技术的另一目的在于提供一种用于治疗脂肪缺少疾病或增肥的药物，其以hLeg1基因为靶点，增强hLeg1基因的表达水平。本专利技术的另一目的在于提供含有上述hLeg1基因的质粒载体、细菌或细胞。本专利技术提供的hLeg1基因及其应用和药物的有益效果是：本专利技术以现有技术没有研究过的功能未知的人类的hLeg1蛋白(如SEQIDNO.1所示)和hLeg1基因(如SEQIDNO.3所示)为研究对象，为研究其功能，以mLeg1基因敲除小鼠为模型动物，利用遗传学，分子生物学，生物化学，细胞生物学的手段对mLeg1蛋白(SEQIDNO.2)及其编码基因mLeg1基因(如SEQIDNO.4所示)的功能进行了非常全面的研究。研究结果显示：mLeg1蛋白可以通过EGFR受体蛋白调控体内Akt的信号，进而调控机体内的脂肪合成，表明mLeg1基因和mLeg1蛋白与机体内的脂肪合成密切相关(增强mLeg1基因的表达水平或者mLeg1蛋白的表达水平或mLeg1蛋白的含量，促使脂肪合成积累；抑制mLeg1基因的表达水平或者mLeg1蛋白的表达水平或mLeg1蛋白的含量，降低脂肪积累)，也进一步表明人类的hLeg1基因(如SEQIDNO.3所示)或hLeg1蛋白(如SEQIDNO.1所示)可以作为靶点基因或靶点蛋白用于制备与脂肪合成调控相关的药物中，例如治疗肥胖症或增肥相关的药物，本专利技术的研究结果为后期肥胖症的治疗或预防、癌症病患者化疗后的体质恢复、脂肪缺少疾病治疗、增肥、糖尿病治疗、唾液腺疾病检测等领域中的药物研发供了一个全新的药物靶点以及新的治疗手段和思路。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1本专利技术实施例1-5的检测结果图(图中：a为采用Northern印记分析检测mLeg1在野生型小鼠的不同组织的表达情况的结果图；b为采用Northern印记分析mLeg1在野生型小鼠的唾液腺的3个腺体中表达情况的检测结果图；c为采用WesternBlot检测mLeg1蛋白在野生型小鼠的不同的组织中分布情况的结果图；d为野生型小鼠和mLeg1基因敲除型小鼠唾液中mLeg1蛋白含量的检测结果图)；图2为本专利技术实施例4的mLeg1基因敲除策略示意图；图3为本专利技术本专利技术实施例4-5的凝胶电泳检测结果图(图中：a为采用普通PCR方法检测mLeg1Δ/Δ小鼠中第三个外显子被敲除的凝胶电泳结果图；b为采用RT-PCR检测mLeg1Δ/Δ小鼠中第三个外显子被敲除的凝胶电泳结果图；c为采用Westernblot方法检测mLeg1蛋白在mLeg1Δ/Δ小鼠唾液腺的表达情况的结果图)；图4为本专利技术实施例5的mLeg1Δ/Δ小鼠的mLeg1基因的测序结果对比图；图5为本专利技术实施例6的mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠的唾液腺的HE染色结果对比图；图6为本专利技术实施例6采用唾液淀粉酶和细胞连接蛋白pan-Cadherin进行蛋白免疫荧光标记观察mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠的唾液腺的结果对比图；图7为本专利技术实施例6的mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠的唾液腺分泌的粘液的阿新蓝染色检测结果对比图；图8为本专利技术实施例7-8的检测结果图(图中：a为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠的血指标的检测结果图；b为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠的葡糖糖耐受情况的检测结果图；c为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠血清中的三酰甘油和胆固醇含量的检测结果图；d为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠肝脏中的三酰甘油和胆固醇含量的检测结果图)；图9为本专利技术实施例9的mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠的不同部位的脂肪大小对比图(图中：a为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠背部脂肪直观对比图；b为1mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠背侧脂肪块大小直观对比图；c为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠腹部脂肪直观对比图；d为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠腹部侧脂肪块大小直观对比图)；图10为本专利技术实施例9的mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠的体重变化检测结果图(图中：a为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠在正常饲料和高脂饲料饲养条件下的体重变化曲线图；b为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠在高脂饲料饲养半年后的体型大小直观对比图)；图11为本专利技术实施例9的脂肪合成相关基因的表达水平检测结果图(图中：a为mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠肝脏中脂肪β氧化相关基因的表达水平的检测结果图；b为明mLeg1Δ/Δ小鼠和野生型小鼠肝脏中脂肪合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种hLeg1基因，其特征在于，其编码hLeg1蛋白，所述hLeg1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种hLeg1基因，其特征在于，其编码hLeg1蛋白，所述hLeg1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的hLeg1基因，其特征在于，所述hLeg1基因的碱基序列如SEQIDNO.3所示。3.权利要求1或2所述的hLeg1基因作为靶点基因在制备或筛选用于治疗肥胖症或减肥的药物中的应用，其特征在于，所述药物是抑制所述hLeg1基因的表达水平的药物。4.权利要求1或2所述的hLeg1基因作为靶点基因在制备或筛选用于治疗脂肪缺少疾病或增肥的药物中的应用，其特征在于，所述药物是增强所述hLeg1基因的表达水平的药物。5.权利要求1或2所述的hLeg1基因作为靶点基因在制备或筛选用于治疗糖尿病的药物中的应用，其特征在于，所述药物是通过增强所述hLeg1基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭金荣，胡敏杰，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33