一种基于中华蜜蜂气味结合蛋白的嗅觉活性剂筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种基于中华蜜蜂气味结合蛋白的植物花香气味嗅觉活性剂配方筛选方法包括以下工艺步骤：1)提取中华蜜蜂工蜂采集蜂触角总RNA；2)设计中华蜜蜂气味结合蛋白基因引物，通过RT‑PCR获得中华蜜蜂气味结合蛋白基因全长；3)构建中华蜜蜂气味结合蛋白基因的原核表达载体；4)通过IPTG诱导中华蜜蜂重组气味结合蛋白重组表达，并通过镍琼脂糖凝胶亲和层析柱对其进行纯化；5)通过竞争性荧光结合方法获得中华蜜蜂重组气味结合蛋白与植物花香气味的结合反应谱，解离常数K

【技术实现步骤摘要】
一种基于中华蜜蜂气味结合蛋白的嗅觉活性剂筛选方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种基于中华蜜蜂气味结合蛋白的植物花香气味嗅觉活性剂配方筛选方法。
技术介绍
中华蜜蜂(Apisceranacerana，简称中蜂)，是中国土生土长的优良蜂种，也是中国几千年以来养蜂业者的当家蜂种，由于长期的适应进化，中蜂对于中国本土特别是山区的植物生态系统如十字花科、蔷薇科、漆树科和山茶科等植物花香产生良好的嗅觉敏感和适应性。近年来，随着设施农业的开展，特别在冬季草莓设施农业生产过程中，利用中蜂授粉已经成为保障草莓高产高质不可或缺的生产工艺。然而目前在利用中蜂授粉过程中，授粉效率有时较低，这尤其不利于保证冬季设施农业下的蜜蜂授粉效率，从而对冬季草莓的产量和品质产生较大的影响。中蜂授粉效率较低的重要原因是由于中蜂对待授粉植株花朵的气味不敏感，因此迫切需要了解中蜂对哪些气味能产生较强的敏感作用，即快速筛选并鉴定中蜂敏感或有引诱作用的植物花香物质，即嗅觉活性剂。该难题的解决将有助于增加中蜂在设施环境中的嗅觉活力并提高其设施授粉效率。不过由于各种植物花香的挥发物成分种类繁多复杂，如何快速地筛选出合适的本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于中华蜜蜂气味结合蛋白的植物花香气味嗅觉活性剂配方筛选方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1)提取中华蜜蜂工蜂采集蜂触角总RNA；2)设计中华蜜蜂气味结合蛋白基因引物，通过RT‑PCR获得中华蜜蜂气味结合蛋白基因全长；3)构建中华蜜蜂气味结合蛋白基因的原核表达载体；4)通过IPTG诱导中华蜜蜂重组气味结合蛋白重组表达，并通过镍琼脂糖凝胶亲和层析柱对其进行纯化；5)通过竞争性荧光结合方法获得中华蜜蜂重组气味结合蛋白与植物花香气味的结合反应谱，解离常数K

【技术特征摘要】
1.基于中华蜜蜂气味结合蛋白的植物花香气味嗅觉活性剂配方筛选方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1)提取中华蜜蜂工蜂采集蜂触角总RNA；2)设计中华蜜蜂气味结合蛋白基因引物，通过RT-PCR获得中华蜜蜂气味结合蛋白基因全长；3)构建中华蜜蜂气味结合蛋白基因的原核表达载体；4)通过IPTG诱导中华蜜蜂重组气味结合蛋白重组表达，并通过镍琼脂糖凝胶亲和层析柱对其进行纯化；5)通过竞争性荧光结合方法获得中华蜜蜂重组气味结合蛋白与植物花香气味的结合反应谱，解离常数KD低于20μmol/L以下时，确定为适合中华蜜蜂的植物花香气味嗅觉活性剂。2.如权利要求1所述的一种基于中华蜜蜂气味结合蛋白的植物花香气味嗅觉活性剂配方筛选方法，其特征在于所述的步骤4)中IPTG诱导中华蜜蜂重组气味结合蛋白表达的诱导条件为：IPTG浓度为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：李红亮，张林雅，吴帆，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33