一种超级感受态细菌制备试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种超级感受态细菌制备试剂盒，包括试剂盒、盒盖、铰链、LB平板、超级感受态细菌培养液试管、超级感受态制备试剂A试管、超级感受态制备试剂B试管、乙醇试管、无菌仪器盒、塑料枪头、镊子、细菌培养试管、锁簧和锁孔，试剂盒的顶部设置有盒盖，试剂盒与盒盖之间通过铰链连接，LB平板的顶部设置有无菌仪器盒，无菌仪器盒的内部设置有塑料枪头，塑料枪头的一侧设置有镊子，无菌仪器盒的一侧设置有细菌培养试管，试剂盒的表面设置有锁孔，盒盖的表面设置有锁簧，本试剂盒提供了专门用于制备超级感受态的特殊细菌培养液，可以提高制备出来的感受态菌的转化效率，同时也方便了用户，不必自行配置相应的培养液。

Reagent kit for preparing super sensitive bacteria

The utility model discloses a super competent bacteria preparation kit, including reagent box, hinge, LB tablet, super competent bacteria culture fluid tube, super competent preparation reagent A tube, super competent preparation reagent B, ethanol, sterile test tube tube instrument box, plastic gun head, tweezers, culture media and lock and lock, the top kit is arranged between the reagent box, the box and the box cover are connected through hinges, the top LB plate is arranged inside the sterile sterile instrument box, instrument box provided with a plastic gun head, side plastic gun head is arranged on one side of the tweezers, sterile instrument box set bacterial culture in vitro, the surface of the kit provided with the lock, the lock cover is arranged on the surface, the kit provides for medium special bacteria preparation super competent, can The invention can improve the transformation efficiency of the prepared strain bacteria, and also facilitate the user to do not need to configure the corresponding culture medium.

【技术实现步骤摘要】
一种超级感受态细菌制备试剂盒
本技术涉及一种试剂盒，具体涉及一种超级感受态细菌制备试剂盒，属于生物

技术介绍
感受态细胞(competentcell):理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态，主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性，这种孔洞会被细胞自身所修复，在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法,CaCl2,RbCl(KCl)等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Competentcell)，现有的感受态细胞试剂盒一般只具有包装试剂的作用，对实验的过程没有任何帮助。但现有的感受态细胞试剂盒很难克服上述问题。
技术实现思路
本技术要解决的技术问题是克服的现有的感受态细胞试剂盒一般只具有包装试剂的作用的问题，提供一种超级感受态细菌制备试剂盒。为了解决上述技术问题，本技术提供了如下的技术方案：本技术提供了一种超级感受态细菌制备试剂盒，包括试剂盒、盒盖、铰链、LB平板、超级感受态细菌培养液试管、超级感受态制备试剂A试管、超级感受态制备试剂B试管、乙醇试管、无菌仪器盒、塑料枪头、镊子、细菌培养试管、锁簧和锁孔，试剂盒的顶部设置有盒盖，试剂盒与盒盖之间通过铰链连接，试剂盒的内部设置有超级感受态细菌培养液试管，超级感受态细菌培养液试管的一侧设置有超级感受态制备试剂A试管，超级感受态制备试剂A试管的一侧设置有超级感受态制备试剂B试管，超级感受态制备试剂B试管的一侧设置有乙醇试管，试剂盒的底部设置有LB平板，LB平板的顶部设置有无菌仪器盒，无菌仪器盒的内部设置有塑料枪头，塑料枪头的一侧设置有镊子，无菌仪器盒的一侧设置有细菌培养试管，试剂盒的表面设置有锁孔，盒盖的表面设置有锁簧。作为本技术的一种优选技术方案，超级感受态细菌培养液试管、超级感受态制备试剂A试管、超级感受态制备试剂B试管和乙醇试管的表面均设置有刻度线。本技术所达到的有益效果是：该装置是一种超级感受态细菌制备试剂盒，超级感受态细菌制备试剂盒是在传统超级感受态细菌制备方法的基础上进行适当改良而成，操作便捷，转化效率高。使用本试剂盒可以使感受态效率达到108-109cfu/μg质粒。对于小的质粒效率略高，而对于大的质粒则效率略低一些。用本试剂盒制备的超级感受态细菌不仅可以转化质粒，而且非常适合于转化普通的连接产物，特别适合于转化平端连接等需要高转化效率的情况。使用本试剂盒操作简单，细菌培养好后仅需60分钟左右即可完成超级感受态细菌的制备。本试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。对于一些用于蛋白表达或病毒质粒构建的特殊大肠杆菌也适用，制备出来的感受态菌转化质粒肯定没有问题，但如果转化连接产物有时效果不如DH5α等其它常见的细菌。本试剂盒提供了专门用于制备超级感受态的特殊细菌培养液，可以提高制备出来的感受态菌的转化效率，同时也方便了用户，不必自行配置相应的培养液。本试剂盒可以分多次使用，共可以制备足够进行100次转化的感受态细菌。附图说明附图用来提供对本技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本技术的实施例一起用于解释本技术，并不构成对本技术的限制。在附图中：图1是本技术的结构示意图；图中：1、试剂盒；2、盒盖；3、铰链；4、LB平板；5、超级感受态细菌培养液试管；6、超级感受态制备试剂A试管；7、超级感受态制备试剂B试管；8、乙醇试管；9、无菌仪器盒；10、塑料枪头；11、镊子；12、细菌培养试管；13、锁簧；14、锁孔。具体实施方式以下结合附图对本技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本技术，并不用于限定本技术。实施例1如图1所示，本技术提供一种超级感受态细菌制备试剂盒，包括试剂盒1、盒盖2、铰链3、LB平板4、超级感受态细菌培养液试管5、超级感受态制备试剂A试管6、超级感受态制备试剂B试管7、乙醇试管8、无菌仪器盒9、塑料枪头10、镊子11、细菌培养试管12、锁簧13和锁孔14,试剂盒1的顶部设置有盒盖2，试剂盒1与盒盖2之间通过铰链3连接，试剂盒1的内部设置有超级感受态细菌培养液试管5，超级感受态细菌培养液试管5的一侧设置有超级感受态制备试剂A试管6，超级感受态制备试剂A试管6的一侧设置有超级感受态制备试剂B试管7，超级感受态制备试剂B试管7的一侧设置有乙醇试管8，试剂盒1的底部设置有LB平板4，LB平板4的顶部设置有无菌仪器盒9，无菌仪器盒9的内部设置有塑料枪头10，塑料枪头10的一侧设置有镊子11，无菌仪器盒9的一侧设置有细菌培养试管12，试剂盒1的表面设置有锁孔14，盒盖2的表面设置有锁簧13。超级感受态细菌培养液试管5、超级感受态制备试剂A试管6、超级感受态制备试剂B试管7和乙醇试管8的表面均设置有刻度线。该装置是一种超级感受态细菌制备试剂盒，当需要用该装置时，1.涂平板：为取得最佳的感受态效率，必须先把甘油菌或其它形式保存的菌种涂LB平板4，并培养过夜。2.接种：取一有新鲜培养的菌种的LB平板4，后续操作均在超净台内进行。把镊子11的顶端在70%酒精中蘸一下，并在酒精灯上略略烧一下，使镊子11的顶端处于无菌状态。用镊子11夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，从平板上挑取一个单克隆，然后把蘸有菌种的塑料枪头10放到装有3毫升LB的细菌培养试管12内。上述操作也可以使用接种环等进行操作。3.培养：37℃约200rpm培养过夜，通常培养时间控制在16小时左右为宜。不宜超过18小时。4.再接种培养：根据需要制备的超级感受态细菌的量，按照1:500的比例用新鲜培养的过夜菌接种培养。例如取100微升的新鲜过夜菌到50毫升本试剂盒提供的超级感受态细菌培养液中，37℃约200rpm培养。通常在大约培养2.5-3.5小时后OD600可以达到0.6-0.7。5.制备感受态细菌：(1)在培养的细菌OD600达到0.6-0.7时，把培养的菌液置于冰浴中，冷却15分钟。注意：后续所有操作均须在4度或冰浴进行。(2)4℃4000g离心5分钟收集细菌，弃上清。注意：离心机必须预先冷却。(3)如果离心沉淀前的菌量为50毫升，按后续操作进行，如果是其它体积则按比例换算后进行后续操作。(4)用20毫升预冷的超级感受态制备试剂A轻轻重悬细菌沉淀。悬浮时一定要很轻很慢，否则会影响效果。(5)冰浴15分钟。（6)4℃4000g离心5分钟收集细菌，弃上清。注意：离心机必须预先冷却。(7)用2毫升预冷的超级感受态制备试剂B轻轻重悬细菌沉淀。悬浮时一定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超级感受态细菌制备试剂盒，包括试剂盒(1)、盒盖(2)、铰链(3)、LB平板(4)、超级感受态细菌培养液试管(5)、超级感受态制备试剂A试管(6)、超级感受态制备试剂B试管(7)、乙醇试管(8)、无菌仪器盒(9)、塑料枪头(10)、镊子(11)、细菌培养试管(12)、锁簧(13)和锁孔(14)，其特征在于，所述试剂盒(1)的顶部设置有所述盒盖(2)，所述试剂盒(1)与所述盒盖(2)之间通过所述铰链(3)连接，所述试剂盒(1)的内部设置有所述超级感受态细菌培养液试管(5)，所述超级感受态细菌培养液试管(5)的一侧设置有所述超级感受态制备试剂A试管(6)，所述超级感受态制备试剂A试管(6)的一侧设置有所述超级感受态制备试剂B试管(7)，所述超级感受态制备试剂B试管(7)的一侧设置有所述乙醇试管(8)，所述试剂盒(1)的底部设置有所述LB平板(4)，所述LB平板(4)的顶部设置有所述无菌仪器盒(9)，所述无菌仪器盒(9)的内部设置有所述塑料枪头(10)，所述塑料枪头(10)的一侧设置有所述镊子(11)，所述无菌仪器盒(9)的一侧设置有所述细菌培养试管(12)，所述试剂盒(1)的表面设置有所述锁孔(14)，所述盒盖(2)的表面设置有所述锁簧(13)。...

【技术特征摘要】
1.一种超级感受态细菌制备试剂盒，包括试剂盒(1)、盒盖(2)、铰链(3)、LB平板(4)、超级感受态细菌培养液试管(5)、超级感受态制备试剂A试管(6)、超级感受态制备试剂B试管(7)、乙醇试管(8)、无菌仪器盒(9)、塑料枪头(10)、镊子(11)、细菌培养试管(12)、锁簧(13)和锁孔(14)，其特征在于，所述试剂盒(1)的顶部设置有所述盒盖(2)，所述试剂盒(1)与所述盒盖(2)之间通过所述铰链(3)连接，所述试剂盒(1)的内部设置有所述超级感受态细菌培养液试管(5)，所述超级感受态细菌培养液试管(5)的一侧设置有所述超级感受态制备试剂A试管(6)，所述超级感受态制备试剂A试管(6)的一侧设置有所述超级感受态制备试剂B试管...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙伯乐，
申请(专利权)人：上海碧云天生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：上海,31