一种集化疗与免疫疗法为一体的纳米制剂及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种集化疗与免疫疗法为一体的纳米制剂及制备方法。本发明专利技术采用超声乳化法结合溶剂挥发法制得装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂；通过优化超声强度和时间，调节内水相和油相的比例，所制得的聚乳酸纳米制剂具有粒径小且均一，分散性好等优点。本发明专利技术所述的载黄芩苷聚乳酸纳米制剂具有活化抗原提呈细胞和杀伤黑色素肿瘤细胞的双重功能，为化疗与免疫疗法相结合的新型治疗肿瘤的方法奠定了基础。

Nanometer preparation integrating chemotherapy and immunotherapy and preparation method thereof

The invention provides a nano preparation which integrates chemotherapy and immunotherapy and a preparation method thereof. The invention adopts the method of ultrasonic emulsification solvent evaporation method combined with polylactic acid nanoparticles loading baicalin; by optimizing the ultrasonic intensity and time, adjust the water phase and oil phase ratio, the prepared polylactic acid nanoparticles with small particle size and uniform, has the advantages of good dispersion. Carrying baicalin the polylactic acid nanoparticles possess activation of antigen-presenting cells and the dual function of anti melanoma tumor cells, laid the foundation for new method of tumor therapy for chemotherapy and immunotherapy combined with the.

【技术实现步骤摘要】
一种集化疗与免疫疗法为一体的纳米制剂及制备方法
本专利技术涉及医药工程的药物制剂领域，尤其涉及一种粒径小且均一、分散性好，具有免疫与化疗双功能的载黄芩苷纳米制剂及其制备方法。
技术介绍
近年来，虽然医药药品不断进步，但是中国传统中草药仍然在医院被广泛使用，也可以作为佐剂或主要的治疗剂来治疗疾病。黄芩(ScutellariaebaicalensisGeorgi.)的根是一种重要的中国大宗药材，常与其他药材结合被用作利尿剂、泻药、退热药、解热和抗恶性肿瘤药剂等。其中，黄芩苷是黄芩干燥根中提取的黄酮类化合物的主要组成成分，具有多方面药理作用，如抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎和抗癌等作用。最近，越来越多报道证明了黄芩苷具有潜在的抗肿瘤活性。虽然这些效用的机制尚未很好地被理解，先前也有报告表明黄芩苷具有控制癌细胞的生长，并诱导细胞凋亡的功效。迄今为止，有越来越多的研究表明，一些中药成分在低剂量下可以通过激活自身免疫系统功能，来攻击肿瘤细胞；然而，中药表现出的抗肿瘤药效呈剂量依赖性，高剂量才表现出对某些体内正常细胞的细胞毒作用。此外，黄芩苷的难溶性给黄芩苷的药效带来了许多缺陷，如在溶液中稳定性差、吸收差和生物利用度低等。为了克服这些限制，建立一种药物递送系统，例如纳米粒子、脂质体、微乳剂和聚合物植入装置等正在成为可行的替代方案之一，同时也可以改善黄芩苷生物利用度。装载有各种治疗剂的纳米粒子作为药物载体，可以在血液中较长时间的循环，增加肿瘤细胞中的药物浓度，进而提高对肿瘤细胞的杀伤效果；另外，通过激活自身免疫系统实现对肿瘤细胞的清除，将有利于残余肿瘤细胞的彻底清除。此外，树突细胞(DC)是免疫系统中介导免疫反应的关键细胞，它们能够捕获和加工抗原，并将抗原与MHC复合物呈递到DC细胞表面，，诱导T细胞活化，从而构建内源性和适应性免疫应答反应。针对DC易于摄取颗粒型抗原的特点，将具有免疫激活功能的药物包埋装载到纳米颗粒内，有效提高DC的摄取能力，进而更有效地活化DC细胞。可降解聚合物聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PELA)等是目前生物医药研究中的重要材料，具有良好的生物安全性和生物相容性，并且已被FDA批准用于药物递送和药物制剂组分；和铝盐佐剂疫苗相比，基于聚乳酸类材料的纳米制剂在疫苗递送研究中尤为瞩目，采用聚乳酸制备的纳米颗粒佐剂在促进抗原交叉提呈、增强Th1细胞免疫应答方面具有独特的优势，同时颗粒佐剂也能够显著提升疫苗的体液免疫应答。近几年，PLGA、PLA和PELA纳米制剂被开发作为药物递送系统，具有良好的生物相容性和生物可降解性、改善药物的溶解度、生物利用度高、可控制药物释放和良好的稳定性等优点。疫苗所引起的免疫应答首先需要免疫细胞的活化，即B细胞和T细胞的活化。这两类细胞的活化从根本上来说都需要抗原提呈细胞(APC)发挥功能。而DC是主要的抗原提呈细胞之一，因此，针对DC设计的载黄芩苷纳米制剂，以期能够大大增强DC的活化水平，进而增强体内免疫应答。本专利技术所述的纳米制剂作用于递送黄芩苷至树突细胞(DC)和黑色素瘤(B16)细胞，载黄芩苷的聚乳酸纳米粒与DC共培养，研究了其对DC的免疫调节功能。与此同时，进行了载黄芩苷的聚乳酸纳米粒与B16细胞共孵育，通过细胞凋亡测定实验和细胞周期分析研究，考察其对黑色素瘤细胞的杀伤功能。这为开发集免疫活化与肿瘤杀伤于一体的治疗策略奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术针对黄芩苷的药理作用及其理化特性设计了聚乳酸-聚羟基乙酸装载黄芩苷的纳米制剂，采用超声乳化结合溶剂挥发法制备了均一可控、粒径小、分散性好的可包埋装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂，提高其溶解性和生物利用度，实现载黄芩苷聚乳酸纳米制剂对抗原提呈细胞的活化作用和对黑色素瘤细胞的杀伤作用。本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂，所述装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂具有粒径小且均一，分散性良好的特点；制备粒径为80-400nm的纳米粒，PDI为0.1-0.4，优选粒径为90-120nm,PDI小于0.15。本专利技术中所述聚乳酸类纳米制剂优选粒径大小为90-120nm,例如可以是90nm、95nm、110nm、115nm、118nm或120nm。当所述聚乳酸类纳米制剂粒径越小，越容易被细胞摄取，例如粒径为90-120nm时，纳米制剂被摄取量可能会越大。纳米制剂发挥其免疫与化疗的功能的可能性越大。本专利技术中所述载黄芩苷纳米制剂粒径分散系数范围为0.1-0.4，例如可以是0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4，优选为小于0.15。第二方面，本专利技术还提供了一种如本专利技术第一方面所述的集化疗与免疫疗法于一体的装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：(1)将聚乳酸类材料溶解于有机溶剂作为油相，将黄芩苷溶解于磷酸缓冲液(PBS)中作为内水相，将表面活性剂溶解于水中作为外水相；(2)将内水相倒入油相中，在冰水浴条件下超声制备油包水型初乳液，将所述初乳液倒入含有一定量表面活性剂的外水相中，冰水浴条件下超声制备水包油包水型预复乳液，然后将预复乳液倒入含有一定量表面活性剂的外水相中，得到复乳液。(3)将所述复乳液进一步溶剂挥发固化，得到装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂。本专利技术所述的粒径均一、分散性好、集化疗与免疫疗法于一体的装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂的制备方法。具体步骤如下：将聚乳酸类材料溶解于有机溶剂作为油相(O)，将黄芩苷溶解于PBS中作为内水相(W1)，将表面活性剂溶解于水中作为外水相1(W2)，将表面活性剂溶解于水中作为外水相2(W3)。将内水相倒入油相中，在冰水浴条件下超声制备油包水型初乳液(W1/O)，将所述初乳液倒入含有一定量表面活性剂的外水相(W2)中，冰水浴条件下超声制备水包油包水型预复乳液(W1/O/W2)，然后将预复乳液倒入含有一定量表面活性剂的外水相(W3)中，得到复乳液。将所述复乳液进一步溶剂挥发固化一定时间后，乳液经离心洗涤得到装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂。本专利技术的步骤(1)中，所述聚乳酸类材料包括但不限于聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PELA)等，优选为聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)；所述聚乳酸类材料的浓度为2％-20％，优选为10％-20％。所述聚乳酸类材料的分子量优选为10000-100000。本专利技术的步骤(1)中，所述有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮中的任意一种或其组合物，优选为二氯甲烷。所述表面活性剂为聚乙烯醇(PVA)、胆酸钠、乳化剂T-20(Tween20)等，优选为胆酸钠。优选地，所述表面活性剂的浓度为0.5-10％，例如可以是0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、10％，优选为0.5-2.0％。本专利技术的步骤(2)中，所述内水相和油相的体积比为1:5-1:20，例如可以是1:5、1:10、1:15、1:20等，优选为1:10。优选地，所述外水相和油相的体积比为1:4-1:10，例如可以是1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10，优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂，其特征在于，所述装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂具有粒径小且均一，分散性良好的特点，制备粒径为80‑400nm的纳米粒，分散性PDI值为0.1‑0.4，优选粒径为90‑120nm,PDI小于0.15。

【技术特征摘要】
1.一种装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂，其特征在于，所述装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂具有粒径小且均一，分散性良好的特点，制备粒径为80-400nm的纳米粒，分散性PDI值为0.1-0.4，优选粒径为90-120nm,PDI小于0.15。2.如权利要求1所述的装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂，其特征在于，所述装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂包埋黄芩苷；优选地，所述黄芩苷纯度为98％，包埋率为25％以上，装载率为5.0μg/mg以上。3.如权利要求1-2所述的装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将聚乳酸类材料溶解于有机溶剂作为油相，将黄芩苷溶解于PBS中作为内水相，将表面活性剂溶解于水中作为外水相；(2)将内水相倒入油相中，在冰水浴条件下超声制备油包水型初乳液(W1/O)，将所述初乳液倒入含有一定量表面活性剂的外水相(W2)中，冰水浴条件下超声制备水包油包水型预复乳液(W1/O/W2)，然后将预复乳液倒入含有一定量表面活性剂的外水相(W3)中，得到复乳液；(3)将所述复乳液进一步溶剂挥发固化，得到装载黄芩苷的聚乳酸纳米制剂。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述聚乳酸类材料包括但不限于聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)，聚乳酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：王慧梅，王连艳，韩淑兰，张贵锋，杨婷媛，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23