一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂及其在黄羽肉鸡饲料中的应用制造技术

一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂及其在黄羽肉鸡饲料中的应用，其中，该饲料添加剂由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶40%‑60%，黑曲霉脂肪酶40%‑60%。因此，本发明专利技术具有能够明显增加黄羽肉鸡回肠内微生物种类的多样性、增强黄羽肉鸡对油脂的消化率、从而达到减轻肉鸡营养性腹泻的优点。

Feed additive containing lipase from different sources and its application in yellow feather broiler feed

A feed additive containing different sources of lipase and its application in yellow feathered broilers in which the feed additive comprises the following components in weight percentage: 40% to 60% chicken pancreatic lipase, lipase from Aspergillus niger 40% 60%. Therefore, the invention has the advantages of obviously increasing the diversity of the microbial species in the ileum of yellow feather broiler and enhancing the digestibility of the Yellow Feather Broiler to the grease, thereby reducing the nutritive diarrhea of the broiler.

【技术实现步骤摘要】
一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂及其在黄羽肉鸡饲料中的应用
本专利技术涉及饲料添加剂领域,尤其是涉及一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂及这种饲料添加剂在黄羽肉鸡饲料中的应用。
技术介绍
油脂饲料具有代谢能值高的特点，其能值是碳水化合物和蛋白质的2.25倍，是养鸡专业户进行肉鸡标准化生产饲养时日粮中不可缺少的重要原料之一，因此，养殖户都会在肉鸡饲料中添加一定比例的油脂，以满足肉鸡的生长需要，畜禽日粮中添加油脂已成为提高高能营养的技术途径之一。然而，近几年来，能量饲料原料尤其是油脂的价格在不断攀升，如何提高饲料中能量的利用率，减少油脂添加量，降低饲料成本，提高养殖效益，同时减少高油脂对畜禽带来的一系列的影响和危害日益成为养殖企业关注的热点。脂肪酶，作为代谢脂肪最基本的酶，若缺乏将会造成脂肪消化不良机体紊乱等现象危及机体健康。单胃动物自身能够分泌淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等内源性消化酶，但幼龄动物消化机制尚未发育健全，内源脂肪酶分泌不足。当内源胰脂肪酶和胆汁酸分泌量不足时，脂肪则不能被畜禽机体充分利用，从而导致脂肪的浪费和损失，同时，脂肪的不完全利用也会带来多种不良症状，如营养性腹泻和脂肪肝，影响肉鸡的健康生长及养殖综合效益。为解决上述问题，有学者尝试将脂肪酶作为饲料添加剂添加到肉鸡日粮中，补充幼龄动物内源脂肪酶分泌不足，以达到提高肉鸡对油脂利用率的目的。但是，在反复试验过程中效果不甚理想，回肠内微生物的种类并没有明显增加，肉禽营养性腹泻并没有明显改善，分析可能的原因之一是饲喂肉鸡的脂肪酶来源单一，不能完全分解利用不同类型的油脂，导致无法满足肉鸡对脂肪酸的需求。如何添加不同来源脂肪酶以达到提高油脂利用率，降低养殖成本，提高养殖综合效益的目的，成为人们普遍关注的热点之一。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术向社会提供一种能够明显增加黄羽肉鸡回肠内微生物种类的多样性，提高黄羽肉鸡对油脂的消化率，从而达到减轻肉鸡营养性腹泻的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂。本专利技术还提供一种能够明显增加黄羽肉鸡回肠内微生物种类的多样性的、增强黄羽肉鸡对油脂的消化率、从而达到减轻肉鸡营养性腹泻的肉鸡饲料。本专利技术的技术方案是：提供一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶40%-60%，黑曲霉脂肪酶40%-60%。作为对本专利技术的改进，由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶45%-55%，黑曲霉脂肪酶45%-55%。作为对本专利技术的改进，所述鸡胰脂肪酶是通过下述方法制备的：（1）粗鸡胰脂肪酶的制备；（2）鸡胰脂肪酶的分离纯化；（21）硫酸铵沉淀；（22）超滤浓缩；（23）葡聚糖凝胶（SephadexG-100）分子过滤层析；（24）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测；作为对本专利技术的改进，所述粗鸡胰脂肪酶的制备包括下述步骤：（11）将鸡胰腺捣成胰浆，加入缓冲液，4℃条件下磁力搅拌2h；（12）过滤，取溶液，1500rpm-2000rpm离心去除第一沉淀，溶液加入丙酮，继续磁力搅拌25min-40min，然后在4℃条件下，1500rpm-2000rpm离心15min-30min，第二沉淀用75%丙酮溶解搅拌，再离心，得第三沉淀；（13）干燥第三沉淀，得固体粉末；（14）将所述固体粉末加入到4℃的氯仿-甲醇（氯仿与甲醇的体积比为2:1）中，磁力搅拌15min-30min，然后在4℃条件下、1500rpm-2000rpm离心，得第四沉淀，第四沉淀溶于乙醚中，再在4℃条件下、1500rpm-2000rpm离心，得第五沉淀，第五沉淀溶于丙酮中，再将第五沉淀干燥，得粗酶粉。作为对本专利技术的改进，所述步骤（21）硫酸铵沉淀包括下述步骤：（211）、将上述粗酶粉溶于50mL去离子水中制成粗酶液，将装有50mL粗酶液的小烧杯放在另一个装有少量冰水的大烧杯内，并置于磁力搅拌器上缓慢搅拌；（212）、一边缓慢搅拌，一边缓慢加入10.00g、15.00g、20.00g、25.00g、30.00g、35.00g硫酸铵至终浓度为20%、30%、40%、50%、60%、70%（w/v），该步骤应在10min内完成；然后继续搅拌15min-20min；（214）、接着10000rpm离心8-12min；弃去上清液，将沉淀悬浮于1~2倍沉淀物体积的0.05mol/LpH为7.5磷酸缓冲液，10000rpm离心出去残留的不溶性物质；（216）、测定上清液中的酶活力与蛋白质含量，计算浓缩酶液的比活力和纯化倍数；其中，比活力=酶活力单位/毫克蛋白质；纯化倍数=每步比活力/第一步比活力。本专利技术还提供一种肉鸡饲料，该肉鸡饲料含有上述的任意一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，饲料添加剂为0.01%-0.02%，基料为99.8%-99.9%。作为对本专利技术的改进，所述基料是基础日粮或低能日粮。作为对本专利技术的改进，其中，所述基础日粮由下述重量百分比的组分组成：玉米50%-65%，豆粕15%-30%，玉米蛋白粉3%-6%，酒糟蛋白饲料(DDGS)4%-6%,四级大豆油2%-6%，次粉0.1%-5%，石粉1.3%-1.6%，磷酸氢钙0.6%-1.5%，食盐0.3%-0.4%，赖氨酸0.3%-0.5%，固体蛋氨酸0.4%-1.2%，苏氨酸0.2%-0.8%，第一预混料1%。本专利技术还提供含不同来源脂肪酶的饲料添加剂在黄羽肉鸡饲料中的应用。本专利技术还提供含有不同来源脂肪酶的饲料对黄羽肉鸡回肠微生物多样性方面影响的应用。本专利技术提供一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，所述饲料添加剂中不同来源脂肪酶由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶40%-60%，黑曲霉脂肪酶40%-60%。当将由所述鸡胰脂肪酶和黑曲霉脂肪酶按照上述比例配制后作为饲料添加剂添加到黄羽肉鸡日粮中，可达到补充肉鸡体内内源脂肪酶分泌不足，提高粗脂肪利用率，且相对于现有技术，由于饲料添加剂中新添加了鸡脂肪酶是鸡胰脂肪酶和黑曲霉脂肪酶的组合，鸡胰组合脂肪酶在黄羽肉鸡体内发挥的作用更稳定、持久，活性更高；同时，不同来源的鸡胰脂肪酶和黑曲霉脂肪酶可协同作用由于鸡胰脂肪酶和黑曲霉脂肪酶来源不一样，两者可协同作用，可分解利用肉鸡日粮中不同类型的油脂，提高不同类型脂肪利用率，明显增加黄羽肉鸡回肠内微生物种类的多样性，减少黄羽肉鸡的脂肪肝和营养性腹泻。因此，本专利技术具有能够明显增加黄羽肉鸡回肠内微生物种类的多样性，提高黄羽肉鸡日粮中脂肪利用率，从而达到减轻肉鸡营养性腹泻的目的。附图说明图1是葡聚糖凝胶（SephadexG-100）过滤层析洗脱曲线图。图2是纯化步骤的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测图。图3是微生物16SrDNA基因V3区基因片段的聚合酶链反应（PCR）图。图4是微生物16SrDNA基因V3区基因片段的聚合酶链反应（PCR）图。图5是微生物16SrDNA基因V3区基因片段变性梯度凝胶电泳（DGGE）指纹图谱。具体实施方式本专利技术中，特别说明的是，所述“不同来源”指的是脂肪酶的来源不同，其中，鸡胰脂肪酶来自鸡胰腺，黑曲霉脂肪酶来自黑曲霉。本专利技术中，饲料中的基础日粮由下述重量百分比的组分组成，具体实施例如下：实施例1玉米50%，豆粕20%，玉米蛋白粉6%，酒糟蛋白饲料(DDGS)6%,四级大豆油6%本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于，由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶40%‑60%，黑曲霉脂肪酶40%‑60%。

【技术特征摘要】
1.一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于，由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶40%-60%，黑曲霉脂肪酶40%-60%。2.根据权利要求1所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶45%-55%，黑曲霉脂肪酶45%-55%。3.根据权利要求1或2所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：所述鸡胰脂肪酶是通过下述方法制备的：粗鸡胰脂肪酶的制备；鸡胰脂肪酶的分离纯化；（21）硫酸铵沉淀；（22）超滤浓缩；（23）葡聚糖凝胶（SephadexG-100）分子过滤层析；（24）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测。4.根据权利要求3所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：所述粗鸡胰脂肪酶的制备包括下述步骤：（11）将鸡胰腺捣成胰浆，加入缓冲液，4℃条件下磁力搅拌2h；（12）过滤，取溶液，1500rpm-2000rpm离心去除第一沉淀物，溶液加入丙酮，继续磁力搅拌25min-40min，然后在4℃条件下，1500rpm-2000rpm离心15min-30min，第二沉淀物用75%丙酮溶解搅拌，再离心，得第三沉淀物；（13）干燥第三沉淀物，得固体粉末；（14）将所述固体粉末加入到4℃的氯仿-甲醇（氯仿与甲醇的体积比为2:1）中，磁力搅拌15min-30min，然后在4℃条件下、1500rpm-2000rpm离心，得第四沉淀物，第四沉淀物溶于乙醚中，再在4℃条件下、1500rpm-2000rpm离心，得第五沉淀物，第五沉淀物溶于丙酮中，再将第五沉淀物干燥，得粗酶粉。5.根据权利要求3所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：所述步骤（21）硫酸铵沉淀包括下述步骤：（211）、将上述粗酶粉溶于50m...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴广兵，左建军，龚俊勇，袁琨，
申请(专利权)人：吴广兵，左建军，龚俊勇，袁琨，
类型：发明
国别省市：广东,44