一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，包括以下步骤：(Ⅰ)采用鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌制作参考拉曼增强光谱，包括利用拉曼光谱仪扫上述致病菌，以得到拉曼增强光谱；(Ⅱ)利用拉曼光谱仪扫待检测的样品，以得到样品的拉曼增强光谱；(III)将样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱进行比对，即根据拉曼光谱的特征峰峰位与强度进行定性识别，或者对样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱中的950～1300cm

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法
本专利技术涉及一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，属于卫生健康与食品安全检测领域。
技术介绍
在细菌性食物中毒临床病例中，沙门氏菌引起的食物中毒常居榜首，是引起急性胃肠炎的主要病原菌之一，其可导致人畜共患病，临床上病发率正逐年上升。鼠伤寒沙门氏菌是一群非适应性或泛嗜性的沙门氏菌，具有广泛的宿主，是目前世界各国分离率最高的菌型之一。鼠伤寒沙门氏菌是引起小儿肠道感染最常见的致病血清，而抗菌药物是治疗鼠伤寒沙门氏菌引起肠道感染必不可少的手段。但是不少沙门氏菌已对多种抗生素产生耐药性，并出现多重耐药性，尤其是鼠伤寒沙门氏菌。头孢菌素类抗生素是临床上应用广泛的一类抗生物，第三代头孢菌素有着独特的药效学和较低的耐药率，因而是用于治疗沙门氏菌侵袭性感染和严重腹泻最常用的药物。对鼠伤寒沙门氏菌的抑制作用原理是通过与细菌内膜上青霉素结合蛋白PBPs相结合，抑制转肽酶在细胞壁合成的最后一步交叉连接中的转肽作用，使交叉连接不能形成，影响细胞壁合成，导致细菌溶菌死亡。而耐头孢菌素鼠伤寒沙门氏菌的出现及数量的增加已引起全世界的关注，因该菌极易产生耐药性，使抗菌药物疗效较差，病程迁延不愈，成为临床治疗的难点。近年来，由于各种抗菌药物的广泛应用，导致出现许多新型耐药菌株。某些重症感染者会因抗菌药物剂量不足延误治疗时机，或盲目的大剂量治疗造成药物中毒。在致病菌检验方面，正确、快速的报告病原菌和耐药菌成为治疗环节中的重中之重。
技术实现思路
鉴于
技术介绍
中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，其能解决检测过程繁琐、耗时长等问题。为了达到上述目的，本专利技术提供一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，所述样品为食品样品或临床样品中，包括以下步骤：(Ⅰ)采用鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌制作参考拉曼增强光谱，包括利用拉曼光谱仪扫上述致病菌，以得到拉曼增强光谱；(Ⅱ)利用拉曼光谱仪扫待检测的样品，以得到样品的拉曼增强光谱；(III)将样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱进行比对，即根据拉曼光谱的特征峰峰位与强度进行定性识别，或者对样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱中的950～1300cm-1波段进行主成分-线性判别分析(PCA-LDA)，实现对鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的鉴别；所述鼠伤寒沙门氏非耐药菌的特征谱峰为663cm-1、780cm-1、875cm-1、958cm-1、990cm-1、1062cm-1、1164cm-1和1252cm-1；所述鼠伤寒沙门氏耐药菌的特征谱峰为663cm-1、825cm-1、920cm-1、958cm-1、990cm-1、1062cm-1、1210cm-1和1252cm-1。在根据本专利技术所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，在步骤(I)之前，还包括鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌菌悬液的制备。在根据本专利技术所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，所述制备包括合成拉曼增强试剂、制备细菌培养基以及配置所述菌悬液。在根据本专利技术所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，主成分分析采用的软件为SPSS。在根据本专利技术所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，拉曼光谱仪的扫描参数：激光功率为200-250mw，激发光波长为785nm，扫描光谱范围为400～1800cm-1，积分时间为5-20s，分辨率为4cm-1。合成拉曼增强试剂的具体操作过程为：取10mL氯金酸溶液至圆底烧瓶中，加热搅拌至溶液微沸，然后加入1mL浓度为2％的柠檬酸三钠溶液，继续保持微沸3min，最后将圆底烧瓶冷却，得到检测用纳米金溶胶颗粒。制备细菌培养基的具体步骤：称取4.3mg的营养肉汤培养基于三角瓶中，加入100ml纯净水后加热溶解至溶液澄清，降温后调节pH值至7.0-7.4，在0.103Mpa，121℃中灭菌15-20min。制备细菌待测液的过程：将甘油保藏的鼠伤寒沙门氏非耐药菌与耐药菌菌株融化并分别接种于培养基中，37℃，100rpm/min震荡培养3-7hrs，取1ml菌液于离心管中，4℃7000rpm/min离心5min，去除上清液加入1ml无菌生理盐水悬浮后再次离心洗涤；以上操作重复三次，得到细菌待测液。制作拉曼光谱过程：取所述纳米金溶胶与所述某一细菌待测液按照(1-5):1混匀后，取100μl置于样品池中，用于拉曼光谱检测。本专利技术的有益效果：与目前的各种致病菌的检测技术相比，表面增强拉曼光谱技术具有样本制备简单、高灵敏度、检测速度快的优点；拉曼图谱直观地显示耐药菌与非耐药菌的特征差异，实现了耐药菌与非耐药菌的分类，对于临床检测细菌耐药性具有实际应用价值。附图说明图1为鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的SERS谱图；图2为两种致病菌三个PC得分因子的三维散点图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案以及优点更清楚、明确，以下将结合具体实施例，对本专利技术进一步详细说明。制作鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的拉曼图谱的过程：拉曼增强试剂的合成：吸取10mL氯金酸溶液至圆底烧瓶中，利用恒温加热磁力搅拌器加热搅拌至溶液微沸，然后加入1mL浓度为2％的柠檬酸三钠溶液，继续保持微沸3min，最后将圆底烧瓶置于冰水浴中搅拌冷却，呈酒红色，得到检测用纳米金溶胶颗粒。培养基的配置：称取4.3mg的营养肉汤培养基于三角瓶中，加入100ml纯净水后加热溶解至溶液澄清，降温后调节pH值至7.2±0.2，0.103Mpa，121℃灭菌15-20min，备用。细菌样品的制备：将甘油保藏的鼠伤寒沙门氏菌耐药菌与非耐药菌用接种环粘取接种于NB培养基中，37℃，100rpm/min震荡培养2-8hrs，取1ml菌液于离心管中，4℃7000rpm/min离心5min，去除上清液加入1ml无菌生理盐水悬浮后再次离心洗涤。以上操作重复三次，得到待测菌悬液。采集拉曼光谱图：采用便携式表面增强拉曼光谱仪进行检测，激光功率为200-250mw，激发光波长为785nm，扫描光谱范围为400～1800cm-1，积分时间为5-20s，分辨率为4cm-1，每个样品重复扫描3次后取平均图谱。取纳米金溶胶与样品按照(1-5)：1混匀后，立即检测，收集拉曼光谱图。数据处理方法：本专利技术可采用由SPSS公司开发的SPSS软件对拉曼光谱图数据通过主成分-判别分析，从而进行鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的鉴别。在用统计分析方法研究多变量的课题时，变量个数太多就会增加课题的复杂性。人们自然希望变量个数较少而得到的信息较多。在很多情形，变量之间是有一定的相关关系的，当两个变量之间有一定相关关系时，可以解释为这两个变量反映此课题的信息有一定的重叠。主成分分析是对于原先提出的所有变量，将重复的变量(关系紧密的变量)删去多余，建立尽可能少的新变量，使得这些新变量是两两不相关的，而且这些新变量在反映课题的信息方面尽可能保持原有的信息；即设法将原来变量重新组合成一组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，包括以下步骤：(Ⅰ)采用鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌制作参考拉曼增强光谱，包括利用拉曼光谱仪扫上述致病菌，以得到拉曼增强光谱；(Ⅱ)利用拉曼光谱仪扫待检测的样品，以得到样品的拉曼增强光谱；(III)将样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱进行比对，即根据拉曼光谱的特征峰峰位与强度进行定性识别，或者对样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱中的950～1300cm

【技术特征摘要】
1.一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，包括以下步骤：(Ⅰ)采用鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌制作参考拉曼增强光谱，包括利用拉曼光谱仪扫上述致病菌，以得到拉曼增强光谱；(Ⅱ)利用拉曼光谱仪扫待检测的样品，以得到样品的拉曼增强光谱；(III)将样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱进行比对，即根据拉曼光谱的特征峰峰位与强度进行定性识别，或者对样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱中的950～1300cm-1波段进行主成分-线性判别分析(PCA-LDA)，实现对鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的鉴别；所述鼠伤寒沙门氏非耐药菌的特征谱峰包括663cm-1、780cm-1、875cm-1、958cm-1、990cm-1、1062cm-1、1164cm-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张萍，郑大威，刘晓莹，林太凤，王惠琴，易鹏，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11