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诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法技术

技术编号:1557188 阅读:191 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法,目的是降低杜仲胶的生产成本,提高生产率。将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于添加了2,4-D和6-BA的固体MS或B↓[5]培养基上,培养得到愈伤组织,烘干的愈伤组织粉末在苯或三氯甲烷中浸提24-48小时,再用甲醇沉淀出杜仲胶。该方法简单实用,适合于杜仲胶的工厂化生产。(*该技术在2018年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及愈伤组织的诱导及从愈伤组织中提取目的物的方法,特别是涉及杜仲愈伤组织的诱导及从愈伤组织中提取杜仲胶的方法。目前,国内外生产杜仲胶通常要经过播种、育苗、移栽,育成成龄树后再从树叶中提取杜仲胶,需要8-10年时间,土地、人力和物力等的投资较大,提胶方法主要有发酵法、甲苯法、碱浸法和冻胶法等,技术复杂,费时、费力。本专利技术的目的是提供一种方法,使杜仲愈伤组织在室内大量快速繁殖,并从中提取杜仲胶,实现杜仲胶的快速工厂化生产,降低生产成本,提高生产效率。为实现上述目的,本专利技术采取以下技术方案。这种包括(1)培养愈伤组织将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于加入了2-6μM2,4-D和5-10μM 6-BA,琼脂7g/l的B5或MS培养基上,诱导愈伤组织,并进行继代培养和收获愈伤组织。(2)将收获的愈伤组织在70-80℃下烘干至恒重,然后粉碎、过筛;(3)将粉末浸入苯或三氯甲烷中浸提24-48小时,然后过滤,向滤液中加入1-1.5倍量的甲醇,在25-26℃下沉淀1-2小时,弃去沉淀液,自然干燥沉淀物。用上述方法生产杜仲胶,简单、实用、高效。只需播种少量种子,即可获得大量可用于培养的茎和叶,而且不受季节限制。愈伤组织采取固体培养,方便简单,提胶方法也简单易行,不需要特殊设备,因而成本较低,不需太多的投资,就可进行杜仲胶的工厂化生产。下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1播种杜仲种子,采取幼苗的叶片和茎段,常规消毒后,接种于添加了4.5μM2,4-D(2,4一二氯苯氧乙酸)和8.9μM 6-BA(6-苄基腺嘌呤)的B5琼脂培养基上,琼脂为7g/l。在26-28℃下进行暗培养,诱导愈伤组织形成,其愈伤组织的诱导率为97.7%。每30-35天对愈伤组织进行一次继代培养,边继代培养边收获愈伤组织,将收获的愈伤组织在75℃下烘干至恒重,粉碎后用60目筛过筛,将所得粉末浸入苯提取液中,苯用量为样品6倍(重量比)苯液完全浸没了样品。浸提32小时,然后过滤,向滤液中加入1.5倍量的甲醇,在25℃下沉淀1小时,弃去沉淀液,自然干燥沉淀物,得到杜仲胶。杜仲胶的得率为2.92%。实施例2基本方法和步骤与实施例1相同,所不同的是,向B5琼脂培养基中添加的是2μM2,4-D和5μM6-BA,愈伤组织的诱导率为50.4%。愈伤组织烘干粉末在苯提取液中浸提24小时,杜仲胶的得率为1.80%。实施例3基本方法和步骤与实施例1相同,所不同的是,向B5琼脂培养基中添加6μM2,4-D和10μM 6-BA,愈伤组织的诱导率为84.4%,愈伤组织烘干粉末在苯提取液中浸提48小时,滤液在1倍量的甲醇中沉淀2小时,杜仲胶的得率为1.89%。实施例4基本方法同实施例1,只是采用培养基为MS,其诱导率为90.0%,杜仲胶得率为1.68%。实施例5基本方法同实施例1,只是溶剂为三氯甲烷,其诱导率仍为90.0%,而得率为1.67%。实施例6将实施例1得到的自然干燥沉淀物以4-5倍量(重量比)的乙醚溶解,回收乙醚得到精制杜仲胶,其纯度为98.2%。用上述方法得到的杜仲胶,经红外光谱和紫外光谱检测、比较,证明与从植株中直接得到的杜仲胶相同。权利要求1.一种,其特征在于它包括(1)培养愈伤组织将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于加入了2-6μM2,4-D和5-10μM6-BA,琼脂7g/l的B5或MS培养基上,诱导愈伤组织,并进行继代培养和收获愈伤组织。(2)将收获的愈伤组织在70-80℃下烘干至恒重,然后粉碎、过筛;(3)将粉末浸入苯或三氯甲烷中浸提24-48小时,然后过滤,向滤液中加入1-1.5倍量的甲醇,在25-26℃下沉淀1-2小时,弃去沉淀液,自然干燥沉淀物。2.根据权利要求1所述的,其特征在于在所述的2,4-D浓度为4.5μM,6-BA的浓度为8.9μM。3.根据权利要求1所述的,其特征在于杜仲幼苗的叶片和茎段在培养基上的培养为26-28℃的温度下暗培养。4.根据权利要求1所述的,其特征在于所述的粉碎后60-80目下过筛。5.根据权利要求1所述的,其特征在于所述的用苯或三氯甲烷浸提的时间为32小时。6.根据权利要求1所述的,其特征在于所述的自然干燥沉淀物以乙醚溶解,挥掉或回收乙醚得到精制杜仲胶。全文摘要本专利技术涉及一种,目的是降低杜仲胶的生产成本,提高生产率。将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于添加了2,4-D和6-BA的固体MS或B文档编号C08C1/02GK1252215SQ9812069公开日2000年5月10日 申请日期1998年10月27日 优先权日1998年10月27日专利技术者杨振堂, 臧埔, 赵景辉 申请人:杨振堂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法,其特征在于它包括:(1)培养愈伤组织:将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于加入了2-6μM2,4-D和5-10μM6-BA,琼脂7g/l的B↓[5]或MS培养基上,诱导愈伤组织,并进行继代培养和收获愈 伤组织。(2)将收获的愈伤组织在70-80℃下烘干至恒重,然后粉碎、过筛;(3)将粉末浸入苯或三氯甲烷中浸提24-48小时,然后过滤,向滤液中加入1-1.5倍量的甲醇,在25-26℃下沉淀1-2小时,弃去沉淀液,自然干燥沉淀物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:杨振堂臧埔赵景辉
申请(专利权)人:杨振堂
类型:发明
国别省市:22[中国|吉林]

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