一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用制造技术

本发明专利技术提供一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用，其特征在于包括以下顺序进行的步骤：(1)进行供试液制备、(2)色谱条件、(3)全时段多波长叠加指纹图谱的建立、(4)主成分分析和聚类分析。本发明专利技术为一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用的方法，该方法结合了现代测试分析技术和信息处理方法，为传统大宗中药材川芎的质量控制提供一种全面、稳定、可靠的评估方法。

Construction and application of a full time multi wavelength overlay fingerprint of Ligusticum chuanxiong Hort

The invention provides a full time Chuanxiong construction and application of multi wavelength overlapping fingerprint, which is characterized by comprising the following steps: (1 order) for sample preparation and chromatographic conditions (2), (3) the establishment of multi wavelength overlapping fingerprints of all time, (4) principal component analysis and clustering. The invention relates to a construction method and application of a multi wavelength overlapping full time Chuanxiong fingerprint, the method is combined with modern analytical technology and method of information processing, provides a comprehensive, stable and reliable evaluation method for the quality control of the traditional staple of Ligusticum chuanxiong.

【技术实现步骤摘要】
一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用
本专利技术属于一种中药材和中成药的质量检测
，具体是一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用。
技术介绍
中药川芎为伞形科(Umbelliferae)藁本属(Ligusticum)多年生草本植物川芎(LigusticumchuanxiongHort.)的根茎，主产于四川省，云南、贵州、甘肃等省也有栽培。川芎具有活血行气、祛风止痛等功效，常用于胸痹心痛、胸胁刺痛、月经不调等的治疗。现代化学和药理研究表明，川芎的化学成分主要包括挥发油、酚酸类、生物碱类和内酯类等。由于中药指纹图谱具有完整性、特异性和再现性的特点，已在中药材质量控制和模式识别研究中得到了广泛应用，并且世界卫生组织和中国国家食品药品监督管理局也推荐使用色谱指纹图谱作为中药质量控制与评价的手段。但是由于中药材化学成分复杂多样，当前常用的单波长检测下的指纹图谱很难反映全部成分信息。波长叠加法是波谱学和光谱学定量分析中常用的方法，在钯、乙醇和槲皮素等含量的测定中表现良好。据此我们提出了多波长叠加指纹图谱的新方法，并在川芎饮片中得到了良好的效果，该方法可为川芎饮片的质量控制和评价提供科学依据。
技术实现思路
根据以上技术问题，本专利技术提供一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用，其特征在于包括以下顺序进行的步骤：(1)进行供试液制备精确称量0.5g川芎饮片粉末，加入10mL的70％甲醇水溶液，300W水浴超声30min，然后将其摇匀，摇匀后静置，静置30-60min，摇匀，静置30-60min，上清液过0.2μm滤膜至进样瓶；(2)色谱条件仪器：LC-20A高效液相色谱仪，配备DGU-20A3在线脱气机、SPD-20A紫外检测器、LC-20AB高压输液泵、CTO-10AS柱温箱和SIL-20A自动进样器(ShimadzuCorporation，Japan)；色谱柱：安捷伦Poroshell120EC-C18(4.6mm×100mm，2.7μm)接安捷伦EclipseXDB-C18保护柱(4.6mm×12.5mm，5μm)；检测波长为230、260、290、320nm，总流速为0.8mL/min，柱温35℃；流动相：A为0.1％磷酸的水溶液，B为乙腈；梯度洗脱程序：0～20min，10～32％的B；20～25min，32～46％的B；25～36min，46～55％的B；36～60min，55～80％的B；60～63min，80～10％的B；63～70min，10％的B；(3)全时段多波长叠加指纹图谱的建立选定多波长叠加的检测波长为230、260、290、320nm；分别从ShimadzuLabsolution色谱工作站中导出不同检测波长下的AIA格式数据文件；使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件转换为TXT格式；然后利用EXCEL2013对TXT格式数据中的检测信号值进行全时段多波长叠加，指纹图谱采用平均数法并另存为TXT格式；最后将TXT格式文件导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软作图；以样品和指纹图谱全时段的检测信号值为变量，利用SPSS23.0进行数据处理，斯皮尔曼相关系数表示样品与指纹图谱的相似度；(4)主成分分析和聚类分析以样品多波长叠加图谱全时段的检测信号值为原始数据，用SPSS23.0进行主成分分析；以样品和指纹图谱全时段的检测信号值为原始数据，导入SPSS23.0软件进行聚类分析，采用组间连接法，以余弦距离法作为样品间距离计算方法进行系统聚类分析。本专利技术的有益效果为：本专利技术为一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用的方法，该方法结合了现代测试分析技术和信息处理方法，为传统大宗中药材川芎的质量控制提供一种全面、稳定、可靠的评估方法。波长叠加法是定量分析中常用的方法，在钯、乙醇和槲皮素等含量的测定中表现良好。据此本专利技术首次提出了多波长叠加指纹图谱的新方法，并在川芎饮片中得到了良好的效果，该方法可为川芎饮片的质量控制和评价提供科学依据。本专利技术核心技术为多波长叠加技术的应用，具体为：选定多波长叠加的检测波长为230、260、290、320nm。分别从ShimadzuLabsolution色谱工作站中导出不同检测波长下的AIA格式数据文件；使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件转换为TXT格式；然后利用EXCEL2013对TXT格式数据中的检测信号值进行全时段多波长叠加，指纹图谱采用平均数法并另存为TXT格式；最后将TXT格式文件导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软作图。以样品和指纹图谱全时段的检测信号值为变量，利用SPSS23.0进行数据处理，斯皮尔曼相关系数表示样品与指纹图谱的相似度。附图说明图1是不同波长检测下的样品色谱图；图2是多波长叠加指纹图谱；(C：川芎饮片，G：藁本饮片，D：当归饮片)图3是主成分分析得分图；图4是聚类分析图(C：川芎饮片，G：藁本饮片，D：当归饮片)。具体实施方式根据实施例所示，对本专利技术进行进一步说明：下面通过具体实施方式来进一步描述本专利技术所述川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用方法，以下实例包括了该方法的精密度、稳定性、重复性试验。这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。1.样品来源和试剂16个川芎饮片购自国内各大药店。为验证指纹图谱可靠性和专一性，同时随机采购2个来源的藁本饮片和2个来源的当归饮片作为外类群。所有样品分析前40℃烘干至恒重，粉碎过50目筛，保存于-20℃的冰箱中。乙腈(色谱纯，FisherScientific，USA)；磷酸(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)；超纯水(Millipore，USA)自制。2.供试液的制备精确称量0.5g川芎饮片粉末，加入10mL的70％甲醇水溶液，300W水浴超声30min，摇匀，静置，上清液过0.2μm滤膜至进样瓶。3.色谱条件仪器：LC-20A高效液相色谱仪，配备DGU-20A3在线脱气机、SPD-20A紫外检测器、LC-20AB高压输液泵、CTO-10AS柱温箱和SIL-20A自动进样器(ShimadzuCorporation，Japan)。色谱柱：安捷伦Poroshell120EC-C18(4.6mm×100mm，2.7μm)接安捷伦EclipseXDB-C18保护柱(4.6mm×12.5mm，5μm)。检测波长为230、260、290、320nm，总流速为0.8mL/min，柱温35℃。流动相：A为0.1％磷酸的水溶液，B为乙腈。梯度洗脱程序：0～20min，10～32％的B；20～25min，32～46％的B；25～36min，46～55％的B；36～60min，55～80％的B；60～63min，80～10％的B；63～70min，10％的B。4.方法学考察精密度：取同一供试品溶液，按照上述色谱条件，连续进样6次，记录主要色谱峰的峰面积积分值，结果峰面积的RSD为0.85-2.53％，符合指纹图谱技术要求。稳定性：取同一供试品溶液，按照上述色谱条件，分别于制样后0、2、4、6、8、12h进样测定，记录主要色谱峰的峰面积积分值，结果峰面积的RSD为0.36-1.84％，说明供试品溶液在12h内稳定，符本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用，其特征在于包括以下顺序进行的步骤：(1)进行供试液制备精确称量0.5g川芎饮片粉末，加入10mL的70％甲醇水溶液，300W水浴超声30min，摇匀，静置30‑60min，上清液过0.2μm滤膜至进样瓶；(2)色谱条件仪器：LC‑20A高效液相色谱仪，配备DGU‑20A3在线脱气机、SPD‑20A紫外检测器、LC‑20AB高压输液泵、CTO‑10AS柱温箱和SIL‑20A自动进样器(Shimadzu Corporation，Japan)；色谱柱：安捷伦Poroshell 120EC‑C18(4.6mm×100mm，2.7μm)接安捷伦Eclipse XDB‑C18保护柱(4.6mm×12.5mm，5μm)；检测波长为230、260、290、320nm，总流速为0.8mL/min，柱温35℃；流动相：A为0.1％磷酸的水溶液，B为乙腈；梯度洗脱程序：0～20min，10～32％的B；20～25min，32～46％的B；25～36min，46～55％的B；36～60min，55～80％的B；60～63min，80～10％的B；63～70min，10％的B；(3)全时段多波长叠加指纹图谱的建立选定多波长叠加的检测波长为230、260、290、320nm；分别从Shimadzu Labsolution色谱工作站中导出不同检测波长下的AIA格式数据文件；使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件转换为TXT格式；然后利用EXCEL2013对TXT格式数据中的检测信号值进行全时段多波长叠加，指纹图谱采用平均数法并另存为TXT格式；最后将TXT格式文件导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软作图；以样品和指纹图谱全时段的检测信号值为变量，利用SPSS23.0进行数据处理，斯皮尔曼相关系数表示样品与指纹图谱的相似度；(4)主成分分析和聚类分析以样品多波长叠加图谱全时段的检测信号值为原始数据，用SPSS23.0进行主成分分析；以样品和指纹图谱全时段的检测信号值为原始数据，导入SPSS23.0软件进行聚类分析，采用组间连接法，以余弦距离法作为样品间距离计算方法进行系统聚类分析。...

【技术特征摘要】
1.一种川芎饮片全时段多波长叠加指纹图谱的构建及应用，其特征在于包括以下顺序进行的步骤：(1)进行供试液制备精确称量0.5g川芎饮片粉末，加入10mL的70％甲醇水溶液，300W水浴超声30min，摇匀，静置30-60min，上清液过0.2μm滤膜至进样瓶；(2)色谱条件仪器：LC-20A高效液相色谱仪，配备DGU-20A3在线脱气机、SPD-20A紫外检测器、LC-20AB高压输液泵、CTO-10AS柱温箱和SIL-20A自动进样器(ShimadzuCorporation，Japan)；色谱柱：安捷伦Poroshell120EC-C18(4.6mm×100mm，2.7μm)接安捷伦EclipseXDB-C18保护柱(4.6mm×12.5mm，5μm)；检测波长为230、260、290、320nm，总流速为0.8mL/min，柱温35℃；流动相：A为0.1％磷酸的水溶液，B为乙腈；梯度洗脱程序：0～20min，10～32％的B；20～25min，32～46％的B；25～36min，46～55％的B；36～60m...

【专利技术属性】
技术研发人员：王涛，
申请(专利权)人：绵阳市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：四川,51