一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法技术

本发明专利技术涉及一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法，该方法步骤为取罗汉松种子粗粉，加水浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法加热提取6～9小时，收集馏出液，加入石油醚萃取，取石油醚层减压回收溶剂，浓缩液静置或冷藏后抽滤，干燥，得粗结晶，加入水重结晶，洗涤、干燥即得。采用本发明专利技术制备川芎嗪，步骤少，周期短，操作简便，产品高纯度，设备投入少，可大幅度降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药化学、天然药物化学和医药
，具体涉及一种从罗汉松种子中高效提取分离纯化高纯度川芎嗪的方法。
技术介绍
罗汉松实为竹柏科植物土杉Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don或短叶土杉Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don var.maki(Sieb.)Endl.的种子及花托。文献记载，罗汉松实具有补肾益肺，治血虚面色萎黄，心胃痛的功效。罗汉松在广西北海市已有较大规模种植，种植面积达1.5万亩，每年可产出大量的罗汉松实。罗汉松实的花托部分可当成水果直接食用，或制成果酒或保健酒后上市销售。但罗汉松实的种子部分却未能加以综合开发利用，造成了药材资源的浪费。因此，对罗汉松实的种子部分开展精深加工研究，物尽其用，减少资源浪费，提高药材附加值，是当前迫切需要解决的问题。有研究表明，罗汉松种子和花托药用氨基酸含量较高，且富含钙、镁矿质元素；花托醇提物具有降血脂、抗氧化和保肝作用。我们研究发现，罗汉松种子含有重要的药用成分——川芎嗪，这可能与其具有治心胃痛的功效有关。川芎嗪又称四甲基吡嗪，为无色针状结晶，具有特殊异臭。现代药理学研究表明，川芎嗪具有抗血小板聚集、增加冠脉血流量、改善微循环及增加脑血流作用。目前，川芎嗪可通过以下三种途径获得：一是从川芎药材中提取分离纯化；二是化学合成法制备；三是利用微生物发酵法制备。从川芎药材提取分离纯化制备川芎嗪的方法较多。中国专利技术专利CN200910032515.9和CN201010247117.1公开了川芎嗪的制备方法，这两种方法通过乙醇回流提取、反复萃取、柱层析和重结晶步骤获得纯度大于90％的产品；专利技术专利CN200810045194.1公开了一种综合提取纯化川芎中川芎嗪、阿魏酸和挥发油的方法，该法通过酸水回流提取、离子交换树脂柱分离和萃取步骤获得纯度80％左右的川芎嗪。以上这些方法都需要柱层析分离纯化，并进行反复萃取，操作过程繁琐，周期长，并且，川芎嗪在川芎药材中的含量极低，因此，产品得率较低。专利技术专利CN201410572434.9公开了一种超临界CO2流体从川芎中制备川芎嗪的方法，该法虽然技术先进，但需特殊装置加压提取，且仍需要柱层析分离纯化，工业化应用受设备条件限制。化学合成法制备川芎嗪，如中国专利技术专利CN201410610247.5和CN201410548902.9公开的方法，虽然收率较高，但需要大量有机溶剂并通过调节pH或萃取等步骤获得。生物合成法如中国专利技术专利CN200910096814.9和CN201010104264.3公开的方法，需用培养基，且微生物培养周期长，条件要求苛刻。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的制备步骤繁琐、生产周期长，产品纯度低或需用大量化学试剂等问题，提供一种新的快速提取分离获得高纯度川芎嗪的方法。该法工艺简便，易于控制，提取周期短，所获产品纯度高，具有更好的工业化优势。本专利技术所述的方法包括如下步骤：(1)提取：取罗汉松种子，粉碎成10～30目的粗粉，加入药材质量10～20倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法加热提取6～9小时，收集馏出液；(2)分离纯化：取馏出液，加入石油醚萃取2～3次，每次加入石油醚的体积为馏出液体积的0.5～2倍，合并2～3次萃取的石油醚层，记录初始体积，于30～60℃减压回收石油醚，至回收的石油醚体积大于等于初始体积的95％时，停止回收，浓缩液室温静置8～24小时或于0～10℃冷藏8～12小时，抽滤，或自然挥干溶剂或30～60℃干燥，即得纯度大于95％的川芎嗪粗品，粗品用水重结晶，洗涤、干燥即得纯度大于98％的川芎嗪精品。上述提取分离方法，其特征在于步骤(2)中所述石油醚的沸程为30～60℃或60～90℃。本专利技术提取分离所得川芎嗪粗品和精品均为无色针状晶体，粗品经气相色谱-串联质谱(GC-MS-MS)测定并进行数据库搜索，结果鉴定出两个化合物，其中主成分为四甲基吡嗪，即川芎嗪，分子式为C8H12N2，CAS号：1124-11-4，相对含量97.27％(见附图1)。川芎嗪精品采用高效液相色谱(HPLC)，以峰面积归一化法测定纯度，结果纯度为99.80％(见附图2)。川芎嗪精品经显微熔点仪测定，熔点为82.5～84.0℃。质谱测定结果显示，川芎嗪精品质谱图与标准图谱一致(见附图3)。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：1、本专利技术采用水蒸气蒸馏法直接提取川芎嗪，与乙醇回流提取法和超临界CO2流体萃取法相比，所获得的提取物中川芎嗪相对含量较高，其它杂质成分少，易于分离纯化。2、本专利技术川芎嗪的分离纯化过程不需采用柱色谱进行分离，仅通过简单萃取即可获得高纯度川芎嗪，操作步骤少，周期短，操作简便，设备投入少，可大幅度降低生产成本。3、本专利技术采用石油醚直接对馏出液进行萃取，石油醚对川芎嗪溶解度大，且沸点低，易于回收循环利用，减少能耗，节约溶剂，环境污染小。附图说明图1 川芎嗪粗品GC-MS-MS测定总离子流图图2 HPLC峰面积归一化法检测川芎嗪精品纯度色谱图图3 川芎嗪精品质谱图具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明，但本专利技术要求保护的范围并不局限于下列实施例。实施例1取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过10目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量10倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取6小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30～60℃的石油醚萃取2次，每次石油醚用量与馏出液等体积，合并2次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于30℃减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的99％时，停止回收，浓缩液自然挥干溶剂，得川芎嗪结晶，HPLC检测纯度为95.2％，用水重结晶，洗涤、干燥即得川芎嗪精品0.01g，HPLC检测纯度为98.5％。实施例2取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过10目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量15倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取8小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30～60℃的石油醚萃取2次，每次加入石油醚体积为馏出液体积的1.5倍，合并2次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于40℃减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的98％时，停止回收，浓缩液室温静置12小时，抽滤，得川芎嗪结晶，HPLC检测纯度为96.4％，用水重结晶，洗涤、干燥即得川芎嗪精品0.012g，HPLC检测纯度为99.5％。实施例3取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过10目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量20倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取9小时，收集馏出液，置分液漏斗中，加入沸程为30～60℃的石油醚萃取3次，每次加入石油醚体积为馏出液体积的0.5倍，合并3次萃取的石油醚层，用旋转蒸发仪于50℃减压回收石油醚，至回收的石油醚体积等于初始体积的95％时，停止回收，浓缩液4℃冷藏8小时，抽滤，得川芎嗪结晶，HPLC检测纯度为96.0％，用水重结晶，洗涤、干燥即得川芎嗪精品0.015g，HPLC检测纯度为99.0％。实施例4取罗汉松种子100g，去除杂质，粉碎，过16目筛，投入圆底烧瓶中，加入药材质量12倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法，加热提取7小时，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法，其特征在于所述的方法包括下列步骤：(1)提取：取罗汉松种子，粉碎成10～30目的粗粉，加入药材质量10～20倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法加热提取6～9小时，收集馏出液；(2)分离纯化：取馏出液，加入石油醚萃取2～3次，每次加入石油醚的体积为馏出液体积的0.5～2倍，合并2～3次萃取的石油醚层，记录初始体积，于30～60℃减压回收石油醚，至回收的石油醚体积大于等于初始体积的95％时，停止回收，浓缩液室温静置8～24小时或于0～10℃冷藏8～12小时，抽滤，或自然挥干溶剂或30～60℃干燥，即得纯度大于95％的川芎嗪粗品，粗品用水重结晶，洗涤、干燥即得纯度大于98％的川芎嗪精品。

【技术特征摘要】
1.一种从罗汉松种子高效提取分离高纯度川芎嗪的方法，其特征在于所述的方法包括下列步骤：(1)提取：取罗汉松种子，粉碎成10～30目的粗粉，加入药材质量10～20倍量的水，浸泡30分钟，用水蒸气蒸馏法加热提取6～9小时，收集馏出液；(2)分离纯化：取馏出液，加入石油醚萃取2～3次，每次加入石油醚的体积为馏出液体积的0.5～2倍，合并2～3次萃取的石油醚层，记录初始体积，于30～60...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄增琼，曾凡艳，
申请(专利权)人：黄增琼，
类型：发明
国别省市：广西;45