人胎盘胶原及其制备方法技术

技术编号:1552891 阅读:210 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种制备人胎盘胶原的方法,其特征是利用健康产妇的胎盘无胎粪污染的周边部分胎盘组织,经清洗、打碎、加胃蛋白酶消化、提取、混匀等处理后,可以制得无菌无副作用的人胎盘胶原。人胎盘胶原不引发受术者产生免疫反应,存留时间长,矫形效果优于牛胶原同类产品。人胎盘胶原用于填充小型凹陷性皮肤缺损。(*该技术在2012年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属医用生物材料领域。目前国际上用以填充小型凹陷性皮肤缺陷(如疤痕、皱纹、青年痤疮疤痕等)的生物材料为注射性牛胶原。临床证明牛胶原可能引起人体对异种系蛋白的免疫反应。为了避免人体对异种系蛋白的免疫反应,寻找存留时间长、矫形效果优于牛胶原的生物材料,用于整形美容、填充小型凹陷性皮肤缺陷,对人胎盘胶原进行了研究。取健康产妇的胎盘,冷冻保存过夜,次日精选无胎粪污染的周边部分胎盘组织,经清洗后将组织剪碎用丙酮浸泡,清洗。将剪碎的胎盘置于0.5mol/L乙酸中并打碎,加胃蛋白酶(0.1-2.9g/100g湿组织)消化。离心,留沉淀A。上清液加NaOH溶液,弃沉淀,上清液经透析、离心,留沉淀(胶原A)。沉淀A经NaCl(5-15%)洗,用Na2HPO4反复提取,离心去除清洗液,沉淀用柠檬酸缓冲液(0.1-0.4mol/L,PH2.5-4.0)提取,离心,留沉淀(胶原B)。将胶原A和胶原B按不同比例(10∶1,9∶1,……,1∶1)混匀,对磷酸缓冲液透析至平衡。加入生长激素(0.01-0.2μ/ml)和利多卡因,分散化使之通过6号针头,安全检验合格后用于填充皮肤小型凹陷性缺陷。若无特别说明,以上操作均在无菌、0-4℃条件下进行。本生物材料不引发受术者产生免疫反应,存留时间长,矫形效果优于牛胶原同类产品。最佳实施例取无肝炎、艾滋病及其他传染病,无遗传性胶原病的胎盘的无污染的周边部分,用含酶抑制剂的磷酸缓冲液喷淋冲洗清除血液污染至胎盘组织呈乳白色。将组织剪碎后用丙酮浸泡过夜,次日更换二次,再用磷酸缓冲液清洗5次。将剪碎的胎盘置于0.5mol/L乙酸中(PH2.5)打碎,并加胃蛋白酶(0.1-2.0g/100g湿组织),消化1-3天(具体剂量及天数依胎盘匀浆液的乳化程度确定)。离心30分钟,14000rpm,留沉淀(沉淀A)。上清中逐滴加入10mol/LNaOH调PH至7.2-7.8,弃沉淀,上清对0.02mol/LNa2HPO4透析4-6天,离心,弃上清,留沉淀(胶原A)。沉淀A用5倍体积10%NaCL洗8次,再用5倍体积的0.067mol/LNa2HPO4反复提取3次,离心去除上清液,沉淀用5倍体积的柠檬酸缓冲液(PH3·7、0.15mol/L)提取4次,离心去上清,留沉淀(胶原B)。将胶原A与胶原B按不同比例(1∶0,4∶1,3∶1,2∶1)混匀,对磷酸缓冲液透析至平衡(PH7.0-7.4),加入生长激素(0.01-0.2μ/ml)和利多卡因(0.1-0.5%)。以上各部位依患者及注射部位不同而选定。分散化使之通过6号针头,通过安全试验后可投入使用。以上过程无特殊说明均在0-4℃条件下进行,全部无菌操作。权利要求1.一种制备人胎盘胶原的方法,其特征在于将健康产妇胎盘之无胎粪污染的周边部分胎盘组织,清洗、剪碎后置于乙酸中并打碎,加胃蛋白酶消化,离心留沉淀A;上清液经透析离心留沉淀(胶原A);沉淀A经NaCl洗,用Na2HPO4提取,离心去除清洗液,沉淀用柠檬酸缓冲液提取,离心留沉淀(胶原B);胶原A与胶原B按不同比例混匀对磷酸缓冲液透析至平衡,再加入生长激素和利多卡因即可。2.根据权利要求1所述制备人胎盘胶原的方法,其特征在于胃蛋白酶的量为0.1-2.9g/100g湿组织。3.根据权利要求1所述的制备人胎盘胶原的方法,其特征在于NaCl的浓度为5-15%。4.根据权利要求1所述的制备人胎盘胶原的方法,其特征在于柠檬酸缓冲液的浓度为0.1-0.4mol/L,PH2.5-4.0。5.根据权利要求1所述的制备人胎盘胶原的方法,其特征在于胶原A和胶原B按10∶1、9∶1、8∶1、7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1的比例混匀。6.根据权利要求1所述的制备人胎盘胶原的方法,其特征在于所加入的生长激素的量为0.01-0.2μ/ml。全文摘要一种制备人胎盘胶原的方法,其特征是利用健康产妇的胎盘无胎粪污染的周边部分胎盘组织,经清洗、打碎、加胃蛋白酶消化、提取、混匀等处理后,可以制得无菌无副作用的人胎盘胶原。人胎盘胶原不引发受术者产生免疫反应,存留时间长,矫形效果优于牛胶原同类产品。人胎盘胶原用于填充小型凹陷性皮肤缺损。文档编号A61L31/00GK1081379SQ92108780公开日1994年2月2日 申请日期1992年7月29日 优先权日1992年7月29日专利技术者刘秉慈 申请人:中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备人胎盘胶原的方法,其特征在于:将健康产妇胎盘之无胎粪污染的周边部分胎盘组织,清洗、剪碎后置于乙酸中并打碎,加胃蛋白酶消化,离心留沉淀A;上清液经透析离心留沉淀(胶原A);沉淀A经NaCl洗,用Na↓[2]HPO↓[4]提取,离心去除清洗液,沉淀用柠檬酸缓冲液提取,离心留沉淀(胶原B);胶原A与胶原B按不同比例混匀对磷酸缓冲液透析至平衡,再加入生长激素和利多卡因即可。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员:刘秉慈
申请(专利权)人:中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所
类型:发明
国别省市:11[中国|北京]

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