脂质体包封的亲和性药物制造技术

本说明书提供一种脂质体抗叶酸剂组合物，其包含：包括内部空间的脂质体；安置在所述内部空间内的生物活性抗叶酸剂；连接至所述脂质体的外部的空间稳定剂；和靶向部分，所述靶向部分包含对至少一种叶酸盐受体具有特异亲和性的蛋白质，所述靶向部分连接至所述空间稳定剂和所述脂质体的外部中的至少一者。

Liposome encapsulated affinity drug

This manual provides a liposome antifolic composition comprising liposomes including internal space; disposed in the internal space of the biological activity of antifolates; stabilizer is connected to the external liposome; and the target part, the target part contains specific affinity the protein has at least one folate receptor, at least one of the outside of the target part connected to the stabilizer and the liposome in.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂质体包封的亲和性药物相关申请本申请要求于2014年8月14日提交的美国临时申请第62/037,597号、2015年3月9日提交的美国临时申请第62/130,493号和2015年3月13日提交的美国临时申请第62/133,265号的权益。通过援引并入每一个这些申请的全部内容。
技术介绍
由于癌症类型的多样性、参与疾病进展的机制和与潜在的患者遗传组成相关的患者变异性，癌症是非常难以治疗的疾病。治疗癌症的早期努力涉及使用细胞毒性剂，包括抗叶酸剂。抗叶酸剂是指拮抗(即阻断)叶酸(维生素B9)作用的一类分子。叶酸在体内的主要功能是充当参与丝氨酸、甲硫氨酸、胸苷和嘌呤生物合成的各种甲基转移酶的辅因子。因此抗叶酸剂抑制细胞分裂、DNA/RNA合成和修复以及蛋白质合成。引入抗叶酸剂作为抗癌剂的基本原理是基于叶酸盐对所有分裂细胞的存活是重要的，因为叶酸盐是细胞复制期间DNA(核酸)合成的必要成分。任何细胞(无论是正常细胞还是癌性细胞)吸收叶酸，主要由还原的叶酸盐载体(RFC)介导，其是对叶酸具有低亲和性的丰富的跨膜转运蛋白。由于癌细胞是快速生长的细胞，因此对叶酸盐形式的DNA前体具有高需求，所以它们对抗叶酸剂的作用易感。快速生长的正常细胞，例如排列在胃肠道和骨髓细胞的细胞，也使用主要经由RFC提供的叶酸盐而快速分裂。因此正常细胞也对抗叶酸剂易感，因为抗叶酸剂用于浸润和杀死癌细胞的RFC介导的转运机制也具有导致杀死快速生长的正常细胞的附带效应的可能性，由此导致不希望的抗叶酸剂相关毒性。抗叶酸剂通过干扰叶酸的作用、剥夺癌细胞的需要增殖或生长的DNA前体而起作用。作为一类的抗叶酸剂利用其在癌症治疗中的抗增殖作用，以抑制细胞生长和分裂，这导致癌细胞死亡。快速复制的癌细胞与大多数正常细胞相比需要的叶酸盐量增加，导致近70年前抗叶酸剂作为抗癌剂的临床开发。然而，虽然基于抗叶酸剂的疗法显示对癌症治疗有效，但由于迫切的临床困境，其临床发展常常脱轨。这个困境来自两个竞争的临床动态。一方面，将抗叶酸剂设计为叶酸盐模拟分子，其中大多数叶酸盐模拟分子旨在通过使用RFC作为优选的跨膜转运机制而到达癌细胞。另一方面，体内快速更新的正常组织，例如骨髓或肠道组织细胞，像癌细胞一样，也是高度叶酸盐依赖性的，并且也使用RFC作为主要的跨膜叶酸盐细胞供应机制。这两种临床动力学的净结果是例如骨髓和胃肠(GI)道细胞通常是危及患者生命的抗叶酸剂相关毒性的非常普遍的部位。这些毒性中的一些包括粘膜炎、腹泻、贫血、中性粒细胞减少和低白细胞计数。在患者中这些抗叶酸剂相关的顽固性副作用的后果是，表现出高度有效的细胞毒性或抗癌性质的抗叶酸剂通常在其开发过程中失败，或迄今为止在临床实践中应用有限，这是因为这些抗叶酸剂还倾向于在正常细胞中具有不可接受的毒性形式的虚弱性副作用。作为一类的抗叶酸剂仍然是一种有希望的癌症治疗方式，尽管对患者存在严重甚至危及生命的毒性的相关风险。挑战在于找出以减少和/或避免对正常细胞的损害的方式有效递送抗叶酸剂的方式。最近，由于获得了对癌症的更新颖的替代疗法，尽管抗叶酸剂具有在杀死癌细胞方面的卓越有效性，但是抗叶酸剂与这些疗法相比已经失去了优势。
技术实现思路
对含有水性生物活性剂如抗癌剂(抗肿瘤剂)的叶酸盐受体具有亲和性和特异性的中性或阴离子免疫脂质体对于在其细胞表面呈递叶酸盐受体的细胞具有出人意料的有效性。在一个示例性实施方式中，提供一种脂质体抗叶酸剂组合物。该脂质体抗叶酸剂组合物包含：包含内部空间的脂质体；设置在所述内部空间内的生物活性抗叶酸剂；连接至所述脂质体的外部的PEG；和靶向部分，该靶向部分包含对至少一种叶酸盐受体具有特异亲和性的蛋白质，所述靶向部分连接至所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者。对于权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，所述PEG可以具有200道尔顿～5000道尔顿的数量平均分子量(Mn)。还提供了示例性脂质体抗叶酸剂组合物。该示例性脂质体抗叶酸剂组合物包括：包含脂质体的介质，所述脂质体包括内部空间；设置在所述内部空间内的水性生物活性抗叶酸剂；靶向部分，该靶向部分包含对至少一种叶酸盐受体具有特异亲和性的蛋白质，所述靶向部分位于脂质体的外部。该组合物中的介质可以是水性溶液。水性溶液可以包含选自由甘露醇、海藻糖、山梨醇和蔗糖组成的组的至少一种冷冻保护剂。脂质体抗叶酸剂组合物还可以包含连接到脂质体外部的空间稳定剂，其中靶向部分连接到空间稳定剂和脂质体外部中的至少一者。所述空间稳定剂是选自由以下组成的组中的至少一种：聚乙二醇(PEG)、聚-L-赖氨酸(PLL)、单唾液酸神经节苷脂(GM1)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(丙烯酰胺)(PAA)、聚(2-甲基-2-恶唑啉)、聚(2-乙基-2-恶唑啉)、磷脂酰聚甘油、聚[N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺]、两性聚-N-乙烯基吡咯烷酮、L-氨基酸类聚合物和聚乙烯醇。所述PEG可以具有200道尔顿～5000道尔顿的数量平均分子量(Mn)。在任何示例性组合物、脂质体、产品、试剂盒和方法中，可以引入以下段落的额外特征：脂质体抗叶酸剂组合物还可以包含设置在所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者上的免疫刺激剂和可检测标志物。脂质体抗叶酸剂组合物可以具有其中免疫刺激剂和可检测标志物中的至少一个与所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者共价键合的特征。所述免疫刺激剂可以是选自由蛋白质免疫刺激剂、核酸免疫刺激剂、化学免疫刺激剂、半抗原和佐剂组成的组中的至少一种。例如，所述免疫刺激剂可以是异硫氰酸荧光素(FITC)。作为另一实例，所述免疫刺激剂可以是选自由荧光素、DNP、β葡聚糖、β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖组成的组中的至少一种。所述可检测标志物可以是选自由荧光素和异硫氰酸荧光素(FITC)组成的组中的至少一种。作为实例，所述免疫刺激剂和所述可检测标志物相同，例如其可以是异硫氰酸荧光素(FITC)。脂质体抗叶酸剂组合物的直径可以为30nm～150nm，例如，40nm～70nm。作为另一特征，脂质体可以是阴离子脂质体或中性脂质体。例如，脂质体的ζ电势可以小于或等于零，例如为0～-150mV，或-30mV～-50mV。脂质体抗叶酸剂组合物包含脂质体。脂质体可以由任何脂质体成分形成。例如，脂质体成分可以包含阴离子脂质和中性脂质中的至少一种。作为另一实例，脂质体成分是选自由以下物质组成的组中的至少一种：DSPE、DSPE-PEG-马来酰亚胺、HSPC、HSPC-PEG、胆固醇、胆固醇-PEG和胆固醇-马来酰亚胺。作为另一实例，脂质体成分包含选自由以下物质组成的组中的至少一种：DSPE、DSPE-PEG-FITC、DSPE-PEG-马来酰亚胺、胆固醇和HSPC。如所讨论的，脂质体可以包封水性溶液。例如，脂质体可以包封生物活性抗叶酸剂和水性药学可接受载剂。药学可接受载剂可以包含海藻糖，例如5重量％～20重量％的海藻糖。药学可接受载剂可以包含浓度为5mM～200mM并且pH为2.8～6的柠檬酸盐缓冲液。与其它成分无关，药学可接受载剂可以包含总浓度为50mM～500mM的乙酸钠和乙酸钙。生物活性抗叶酸剂可以是水溶性的。作为实例，脂质体抗叶酸剂组合物可以具有脂质体，并且一些脂质体可以包含少于200,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂质体抗叶酸剂组合物，其包含：包括内部空间的脂质体；设置在所述内部空间内的生物活性抗叶酸剂；连接至所述脂质体的外部的PEG；和靶向部分，其包含对至少一种叶酸盐受体具有特异亲和性的蛋白质，所述靶向部分连接至所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.14 US 62/037,597;2015.03.09 US 62/130,493;1.一种脂质体抗叶酸剂组合物，其包含：包括内部空间的脂质体；设置在所述内部空间内的生物活性抗叶酸剂；连接至所述脂质体的外部的PEG；和靶向部分，其包含对至少一种叶酸盐受体具有特异亲和性的蛋白质，所述靶向部分连接至所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者。2.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述PEG的数量平均分子量(Mn)为200～5000道尔顿。3.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，所述脂质体抗叶酸剂组合物还包含免疫刺激剂、可检测标志物和马来酰亚胺中的至少一种，所述免疫刺激剂、可检测标志物和马来酰亚胺中的至少一种设置在所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者上。4.如权利要求3所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述免疫刺激剂和可检测标志物中的至少一种与所述PEG和所述脂质体的外部中的至少一者共价键合。5.如权利要求3所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，免疫刺激剂是选自由蛋白质免疫刺激剂、核酸免疫刺激剂、化学免疫刺激剂、半抗原和佐剂组成的组中的至少一种。6.如权利要求3所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述免疫刺激剂是异硫氰酸荧光素(FITC)。7.如权利要求3所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述免疫刺激剂是选自由以下物质组成的组中的至少一种：荧光素、DNP、β葡聚糖、β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖。8.如权利要求3所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述可检测标志物是选自由荧光素和异硫氰酸荧光素(FITC)组成的组中的至少一种。9.如权利要求3所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述免疫刺激剂和所述可检测标志物相同。10.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体的直径为30nm～150nm。11.如权利要求10所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体的直径为40nm～70nm。12.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体为阴离子脂质体或中性脂质体。13.如权利要求12所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体的ζ电势小于或等于零。14.如权利要求12所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体的ζ电势为0～-150mV。15.如权利要求12所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体的ζ电势为-30mV～-50mV。16.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体由脂质体成分形成。17.如权利要求16所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体成分包含阴离子脂质和中性脂质中的至少一种。18.如权利要求16所述的脂质体，其中，所述脂质体成分是选自由以下物质组成的组中的至少一种：DSPE、DSPE-PEG-马来酰亚胺、HSPC、HSPC-PEG、胆固醇、胆固醇-PEG和胆固醇-马来酰亚胺。19.如权利要求16所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体成分包含选自由以下物质组成的组中的至少一种：DSPE、DSPE-PEG-FITC、DSPE-PEG-马来酰亚胺、胆固醇和HSPC。20.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体包封水性溶液。21.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述脂质体包封生物活性抗叶酸剂和水性药学可接受载剂。22.如权利要求21所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述药学可接受载剂包含海藻糖。23.如权利要求21所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述药学可接受载剂包含5重量％～20重量％的海藻糖。24.如权利要求21所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述药学可接受载剂包含浓度为5mM～200mM并且pH为2.8～6的柠檬酸盐缓冲液。25.如权利要求21所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述药学可接受载剂包含总浓度为50mM～500mM的乙酸钠和乙酸钙。26.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述生物活性抗叶酸剂是水溶性的。27.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，每个脂质体包含少于200,000个分子的所述生物活性抗叶酸剂。28.如权利要求27所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，每个脂质体包含10,000～100,000个分子的所述生物活性抗叶酸剂。29.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述生物活性抗叶酸剂是培美曲塞。30.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述生物活性抗叶酸剂是洛美曲索。31.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述生物活性抗叶酸剂是选自由下述物质组成的组中的至少一种：甲氨蝶呤、雷替曲塞、氨基蝶呤、普拉曲沙、洛美曲索、洛美曲索的噻吩类似物、洛美曲索的呋喃类似物、三甲曲沙、LY309887和GW1843U89。32.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述生物活性抗叶酸剂是选自由下述物质组成的组中的至少一种：氯胍、乙胺嘧啶、甲氧苄啶以及6-位取代的吡咯并和噻吩并[2,3d]吡咯并嘧啶类的GARFT抑制剂。33.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述生物活性抗叶酸剂处于5～8的pH。34.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述生物活性抗叶酸剂处于2～6的pH。35.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述靶向部分经由马来酰亚胺官能团共价结合至选自由脂质体成分和PEG分子组成的组中的至少一种。36.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述靶向部分对选自由以下组成的组中的至少一种具有特异亲和性：叶酸盐受体α、叶酸盐受体β和叶酸盐受体δ。37.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述靶向部分对选自由以下组成的组中的至少两种具有特异亲和性：叶酸盐受体α、叶酸盐受体β和叶酸盐受体δ。38.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述靶向部分对叶酸盐受体α、叶酸盐受体β和叶酸盐受体δ具有特异亲和性。39.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述靶向部分对肿瘤细胞表面抗原上的表位具有特异亲和性，所述肿瘤细胞表面抗原存在于肿瘤细胞表面上但在非肿瘤细胞上不存在或不可及。40.如权利要求39所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述肿瘤细胞是恶性细胞。41.如权利要求39所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述肿瘤细胞表面抗原是选自由以下组成的组中的至少一种：叶酸盐受体α、叶酸盐受体β和叶酸盐受体δ。42.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述靶向部分是包含抗体的抗原结合序列的蛋白质。43.如权利要求42所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，抗体的所述抗原结合序列包含抗体来源的一个或多个互补决定区。44.如权利要求42所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述蛋白质包含抗体。45.如权利要求42所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述靶向部分是选自由以下组成的组中的至少一种：抗体、人源化抗体、抗体的抗原结合片段、单链抗体、单域抗体、双特异性抗体、合成抗体、聚乙二醇化抗体和多聚体抗体。46.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，每个脂质体包含至多200个靶向部分。47.如权利要求1所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，每个脂质体包含30～200个靶向部分。48.一种将生物活性抗叶酸剂递送至在其表面上表达叶酸盐受体的肿瘤的方法，所述方法包括：以递送治疗有效剂量的生物活性抗叶酸剂的量对所述肿瘤施用权利要求1所述的组合物。49.如权利要求48所述的方法，其中，所述肿瘤位于受试对象中，并且所述施用选自由以下组成的组：输注；注射；胃肠外施用；和局部施用。50.如权利要求49所述的方法，其中，所述受试对象是人。51.如权利要求48所述的方法，其中，所述方法将脂质体抗叶酸剂组合物选择性地递送至所述肿瘤，其速率为不表达叶酸盐受体的细胞的2倍。52.一种制备权利要求16所述的组合物的方法，所述方法包括：形成混合物，所述混合物包含：脂质体成分；在水性溶液中的生物活性抗叶酸剂；靶向部分；将所述混合物均质化以在所述水性溶液中形成脂质体；和将所述混合物挤出穿过膜以形成将所述生物活性抗叶酸剂包封在水性溶液中的脂质体。53.如权利要求52所述的方法，所述方法还包括以下步骤：在所述挤出步骤后除去在脂质体外部的水性溶液中的过量生物活性抗叶酸剂。54.如权利要求53所述的方法，所述方法还包括以下步骤：在所述除去步骤后冻干所述组合物以形成冻干组合物。55.如权利要求54所述的方法，所述方法还包括以下步骤：通过在所述冻干步骤后将所述冻干组合物溶解在溶剂中来重构所述冻干组合物。56.如权利要求52所述的方法，其中，所述混合物包含选自由甘露醇、海藻糖、山梨醇和蔗糖组成的组中的至少一种。57.如权利要求52所述的方法，其中，一种或多种脂质体成分还包含空间稳定剂。58.如权利要求52所述的方法，其中，所述空间稳定剂是选自由以下组成的组中的至少一种：聚乙二醇(PEG)、聚-L-赖氨酸(PLL)、单唾液酸神经节苷脂(GM1)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(丙烯酰胺)(PAA)、聚(2-甲基-2-恶唑啉)、聚(2-乙基-2-恶唑啉)、磷脂酰聚甘油、聚[N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺]、两性聚-N-乙烯基吡咯烷酮、L-氨基酸类聚合物和聚乙烯醇。59.如权利要求58所述的方法，其中，所述PEG的数量平均分子量(Mn)为200道尔顿～5000道尔顿。60.如权利要求55所述的方法，其中，所述溶剂是水性溶剂。61.一种脂质体抗叶酸剂组合物，其包含：包含脂质体的介质，所述脂质体包括内部空间；设置在所述内部空间内的水性生物活性抗叶酸剂；靶向部分，其包含对至少一种叶酸盐受体具有特异亲和性的蛋白质，所述靶向部分设置于所述脂质体的外部。62.如权利要求61所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述介质是水性溶液。63.如权利要求61所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述介质是包含选自由甘露醇、海藻糖、山梨醇和蔗糖组成的组中的至少一种冷冻保护剂的水性溶液。64.如权利要求61所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其还包含：连接到所述脂质体的外部的空间稳定剂，其中所述靶向部分连接于所述空间稳定剂和所述脂质体外部中的至少一者。65.如权利要求64所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述空间稳定剂是选自由以下组成的组中的至少一种：聚乙二醇(PEG)、聚-L-赖氨酸(PLL)、单唾液酸神经节苷脂(GM1)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(丙烯酰胺)(PAA)、聚(2-甲基-2-恶唑啉)、聚(2-乙基-2-恶唑啉)、磷脂酰聚甘油、聚[N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺]、两性聚-N-乙烯基吡咯烷酮、L-氨基酸类聚合物和聚乙烯醇。66.如权利要求65所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述PEG的数量平均分子量(Mn)为200道尔顿～5000道尔顿。67.如权利要求61所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其还包含免疫刺激剂、可检测标志物和马来酰亚胺中的至少一种，所述免疫刺激剂、可检测标志物和马来酰亚胺中的至少一种设置在所述空间稳定剂和所述脂质体的外部中的至少一者上。68.如权利要求67所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述免疫刺激剂和可检测标志物中的至少一种与所述空间稳定剂和所述脂质体的外部中的至少一者共价键合。69.如权利要求67所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，免疫刺激剂选自由蛋白质免疫刺激剂、核酸免疫刺激剂、化学免疫刺激剂、半抗原和佐剂组成的组中的至少一种。70.如权利要求67所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述免疫刺激剂是异硫氰酸荧光素(FITC)。71.如权利要求67所述的脂质体抗叶酸剂组合物，其中，所述免疫刺激剂是选自由以下物质组成的组中的至少一种：荧光素、DNP、β葡聚糖、β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖。72.如权利要求67所述的脂质体抗叶酸剂组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·尼基萨，J·瓦尔盖瑟，
申请(专利权)人：LEAF控股集团公司，
类型：发明
国别省市：美国,US