式（Ⅰ）的寡肽及其与药物上可接受的酸或碱形成的盐， Ａ↓［１］－Ａ↓［２］－Ａ↓［３］－Ａ↓［４］ （Ⅰ） 其中： Ａ↓［１］为选自甘氨酸，苏氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，肌氨酸，丙氨酸，（Ｃ↓［２－６］）酰基－甘氨酸的氨基酸残基或不存在； Ａ↓［２］为选自至少被一个（Ｃ↓［１－６］）烷基，苄基或（Ｃ↓［２－６］）酰基选择性Ｎα－取代的亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，赖氨酸，鸟氨酸的氨基酸残基，或是脯氨酸残基或不存在； Ａ↓［３］为选自脯氨酸，亮氨酸，异亮氨酸和缬氨酸的氨基酸残基； Ａ↓［４］为选自任意在Ｃ－端位选择性酰胺化的精氨酸，亮氨酸和谷氨酰胺的氨基酸残基，或是胍基丁胺残基，或不存在； 条件是只能不存在Ａ↓［１］，Ａ↓［２］和Ａ↓［４］其中一个； 所说化合物进一步的特性在于上述氨基酸残基和胍基丁胺残基的侧链基团可以被选自（Ｃ↓［１－６］）烷基，苄基或（Ｃ↓［２－６］）酰基的一个或多个取代基选择性取代；而且每个所说氨基酸残基可在带有侧链的碳原子上以Ｄ－或Ｌ－形式存在，或以可能的非对映体或对映体中的一种形式存在。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及由C-活性蛋白质(以下简称CRP)片段衍生的寡肽，它们作为免疫调节剂以及在治疗心血管疾病和炎症方面的用途。CRP是一般具有非常低血液浓度的一种蛋白质，发炎后它可增至两千倍〔J.J.Morley和J.Kushner，Am.N.Y.Acad.Sci.，389，406-418(1989)〕。F.A.Robey等人在J.Biol.Chem.，262，No.15，7053-7057(1987)中公开了与某些吞噬作用激素非常相似的三种CRP四肽序列。化学合成的四肽有助于fagocytic白细胞和过氧化物的产生，并以似吞噬作用激素方式诱导单核细胞产生白细胞介素1。象吞噬作用激素一样，这三种CRP四肽被体内蛋白酶迅速代谢和灭活。现在，令人惊奇地发现，所说CRP四肽片段的化学改性类似物被赋予免疫调节活性，而且可用于治疗心血管疾病和炎症，例如，治疗败血症休克。因此，本专利技术涉及式(I)的寡肽及其与药物上可接受的酸或碱形成的盐，A1-A2-A3-A4(I)其中A1为选自苏氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，肌氨酸，丙氨酸，甘氨酸和(C2-6)酰基一甘氨酸的氨基酸残基或不存在；A2为选自至少被一个(C1-6)烷基，苄基或(C2-6)酰基选择性Nα-取代的亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，赖氨酸，鸟氨酸，和脯氨酸的氨基酸残基或不存在；A3为选自脯氨酸，亮氨酸，异亮氨酸和缬氨酸的氨基酸残基；A4为选自在C-端位选择性酰胺化的精氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺的氨基酸残基，或是胍基丁胺残基，或不存在；条件是只能不存在A1，A2和A4其中一个；所说化合物进一步的特性在于上述氨基酸残基和胍基丁胺残基的侧链基团可以被选自(C1-6)烷基，苄基或(C2-6)酰基的一个或多个基团进一步取代，而且每个所说氨基酸残基可以在Cα上以D-或L-形式，或以可能的非对映体或对映体中的一种形式存在。本专利技术优选的一组化合物是一些式(I)化合物及其与药物上可接受的酸或碱形成的盐，其中A1为选自甘氨酸，苏氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，肌氨酸，丙氨酸，(C2-6)酰基-甘氨酸的氨基酸残基或不存在；A2为选自被一个(C1-6)烷基，苄基或(C2-6)酰基Nα-取代的赖氨酸的氨基酸残基；A3为脯氨酸；A4为任意在C-端位酰胺化的谷氨酰胺，亮氨酸，精氨酸，或是胍基丁胺残基，或不存在；所说化合物进一步的特性在于所说氨基酸残基和胍基丁胺残基的侧链基团可以被选自(C1-6)烷基，苄基或(C2-6)酰基的一个或多个基团选择性取代，而且每个所说氨基酸残基可以在Cα上以D或L形式，或以可能的非对映体或对映体中的一种形式存在。所说(C1-6)烷基指，例如，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，3-甲基-戊基，正己基和相应位置的异构体。所说(C2-6)酰基指，例如，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，己酰基和相应位置的异构体。本专利技术另一个目的涉及式(I)的寡肽作为免疫调节剂和在治疗心血管疾病和炎症如败血症休克中的用途。通式(I)的化合物可以用本领域普通技术人员熟知的肽合成方法，固相或溶液合成法制备〔例如，见Merrifield，R.B.，Biochemistry，3，1385(1964)〕。除非另有说明，氨基酸残基将用于Cα的L-构型中。优选地，合成是在溶液中进行，以所选氨基酸为起始原料，通过逐步加成所需的氨基酸形成寡肽。当然，也可以先组合成二或三肽单元。尽管寡肽的合成可以从任何氨基酸开始，并且可以在N-端或C-端两个方向进行，但还是优选在N-端方向进行。这些氨基酸或，如果需要，预先合成的二或三肽可以直接使用或以通过酯化使羧基被保护，例如用叔丁基(tBu)，或/和通过酰胺化使氨基被保护，例如用苄氧基羰基(Z)，的相关衍生物形式使用，而且，在这种情况下，适宜选择保护侧链基团，例如用2，2，5，7，8-五甲基-苯并二氢吡喃-6-磺酰基(Pmc)，叔丁氧羰基(Boc)或三氟乙酸(TFA)进行保护。这些保护反应可以用肽化学中普通技术人员熟悉的方法进行。当然，上述保护的衍生物也可以是商品。但最好在与随后的氨基酸缩合之前除去α-氨基部分的保护基，例如，用中等强度的酸(如三氟乙酸)酸解，或用氢气或氢供体如甲酸或其盐，三乙基硅烷，碱中的肼等等催化氢解来实现。而且，最好根据用来去保护的氨基酸和其它因素(如果存在)选择在适当钯催化剂存在下进行。然后，与随后的氨基酸残基进行缩合，这些残基的不包括在所说反应中的部分被适当保护。该缩合反应可以用几种已知方法中的一种来实现。具体地说，可用活性酯，例如，琥珀酰亚胺(Su)，氟化物(F)或缩合剂如苯并三唑-1-基-氧-三-(二甲氨基)-磷鎓六氟磷酸酯(BOP)，溴-三-吡咯烷鎓-磷鎓六氟磷酸酯(PyBroP)，二环己基碳化二亚胺(DCC)等等，任选在催化剂如1-羟基-苯并三唑(HOBT)，4-二甲基-氨基-吡啶(DMAP)，三乙胺(TEA)，N-甲基-吗啉，N-甲基-咪唑等存在下进行。至于氨基酸的Nα-烷基衍生物，可以在低温下，在氰基硼氢化钠，选择性还原剂存在下，在极性溶剂，优选甲醇中，通过用适当的醛处理得到。当需要C-端位是酰胺形式的式(I)寡肽时，带有这一部分的商品氨基酸可以用作起始原料，或可以用HOBT铵盐，或当A4是胍基丁胺残基时，用胍基丁胺本身来酰胺化C-端氨基酸。其中A1和/或A2是酰化氨基酸残基的式(I)化合物可以在低温下，在催化剂如DMAP存在下，通过用适当酰基-酐处理得到。或者可以使用具有Nα-酰基-氨基酸残基的商品。所得产物可以通过从适当溶剂中结晶纯化，或如果需要，用已知的色谱技术如反相色谱法和离子交换色谱法纯化。下面将提供制备本专利技术一些改性寡肽的实施例。氨基酸衍生物，保护片段和改性寡肽的HPLC分析是在下列实验条件下进行的柱 Lichrosorb RP-18温度 25℃(除非另有说明)流量 1.5ml/分钟检测器 Jasco875-UV(230nm)洗脱剂A90％水，10％乙腈，0.1％三氟乙酸(TFA)洗脱剂B乙腈，0.1％TFA洗脱剂C水，0.1％TFA梯度 (I)从0—40％B于A中(20’)至80％B于A中(10’)(II)从0—50％A于C中(20’)至100％A(3’)，至40％B于A中(20’)。除非另有说明，否则所有合成步骤均在室温下进行。110℃用6MHCl水解22小时后，用Beckman SYSTEMGOLD氨基酸分析仪测定氨基酸的组成和比例。为了更加明了，下面实施例所用缩写的含意列表如下BDHA-Cl苄基二甲基十六烷基氯化铵Boc叔丁氧羰基(Boc)20二-叔丁基-碳酸氢盐BOP苯并三唑-1-基-氧-三-(二甲氨基)-磷鎓六氟磷酸酯BSAN，O-双(三甲基甲硅烷基)-乙酰胺DCC二环己基碳化二亚胺DMAP 4-二甲氨基-吡啶DMF二甲基甲酰胺F 氟化物HOBT 1-羟基-苯并三唑Pmc2，2，5，7，8-五甲基-苯并二氢吡喃-6-磺酰基PyBroP 溴-三-吡咯烷鎓-磷鎓六氟磷酸酯tBu叔丁基TBAF 四丁基氟化铵TEA三乙胺TFA三氟乙酸Su 琥珀酰亚胺Z 苄氧羰基实施例1H-Sar-Lys-Pro-Arg-OH·2AcOHA)在50℃和60分钟内将8.64m本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：P·卡勒托，F·里奥诺，F·马库科尔，G·哥拉墨，P·马思卡尼，M·皮诺利，S·卡比莱托，
申请(专利权)人：伊塔尔法马科联合股份公司，
类型：发明
国别省市：
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