一种化合物，该化合物选自下列一组肽：ＡＳＱＱＧＴＡＡＬＱＫＥＬＫＲＩＫＩＰＤＹＳＤＳＦＫＩＫＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）；ＧＴＡＡＬＱＫＥＬＫＲＩＫＩＰＤＹＳＤＳＦＫＩＫＨＬＧＫＧＨ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）；ＬＱＫＥＬＫＲＩＫＩＰＤＹＳＤＳＦＫＩＫＨＬ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）；ＱＱＧＴＡＡＬＱＫＥＬＫＲＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）；或ＧＴＡＡＬＱＫＥＬＫＲＩＫＩＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）．２．一种化合物，该化合物选自下列一组肽：ＳＳＱＩＳＭＶＰＮＶＧＬＫＦＳＩＳＮＡＮＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）；ＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）；ＣＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）；ＣＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）；ＮＶＧＬＫＦＳＩＳＮＡＮＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）；ＡＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）；ＩＡＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）；ＩＫＡＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）；ＩＫＩＡＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）；ＩＫＩＳＡＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）；ＩＫＩＳＧＡＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）；ＩＫＩＳＧＫＡＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）；ＩＫＩＳＧＫＷＡＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＡＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＡＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＡＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＡＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＡＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）；ＩＫＩＳＧＡＷＡＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１）；ＩＡＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＫＱＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）；ＩＫＩＳＧＫＦＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）；ＩＫＩＳＧＫＷＤＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）；ＩＫＩＳＧＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）；ＫＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）；ＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）；ＫＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）；ＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）；ＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）；ＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）；ＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫＫＷＫＡＡＡＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＦＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）；ＩＫＩＳＧＫＡβ（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＡβ－（３－ｐｙｒｉｄｙｌ）ＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）；ＱＫＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）；ＡＤＡＤＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＦＤＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＷＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＫＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＦＫＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５）；ＩＫＩＳＧＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＦＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＦＦＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）；ＩＫＩＳＧＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＦＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）；ＩＫＩＳＧＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＦＦＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）；ＫＷＫＡＱＷＲＦＬＫＫＷＫＡＱＷＲＦＬＫＫＷＫＡＱＷＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３）；ＣＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＰＬＣ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９）；ＩＫＫＲＡＩＳＦＬＧＫＫＷＱＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＷＫＲＦＬＫＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＷＫＲＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＬＫＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４）；ＩＫＩＳＧＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１）；ＫＷＱＬＲＳＫＧＫＩＫＩＦＫＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３）；ＩＫＩＳＧＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＫＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）Ａβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７）；ＩＫＩＳＧＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）Ａβ－（ｌ －ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＥＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＷＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＥＫＫＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３）；ＫＷＡＦＡＫＫＱＫＫＲＬＫＲＱＷＬＫＫＦ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４８）；ＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＡＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４９）；ＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）Ａβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０）；ＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）Ａβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）；ＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）Ａβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）Ａβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）；ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）Ａβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３）；ＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６）；ＫＷＫＡＱＷＲＦＬＫＫＷＫＡＱＷＲＦＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９）；ＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＲＦＬＫＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０）；ＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＦＲＦＬＫＫＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＫＡＱＦＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）；ＫＷＫＡＱＫＲＦ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３）；ＣＫＷＫＡＱＫＲＦＬＫＭＳＣ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４）；ＣＫＷＫＡＱＫＲＦＣ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＱＫＲＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６）；ＫＷＫＡＦＦＲＦＬＫＫＷＫＡＦＦＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＡＷＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２３）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＦＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２４）；ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＡＦＲＦＬＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５）；或ＩＫＩＳＧＫＷＫＡＡβ－（ｌ－ｎａｐｈｔｈｙｌ）ＡＲＦＬＫ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２６）．（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为1994年3月11日的美国专利申请08/209,762的部分延续，申请08/209,762是申请日为1994年1月14日的美国专利申请08/183,222的部分延续，申请08/183,222是申请日为1993年7月15日的美国专利申请08/093,202的部分延续，申请08/093,202是申请日为1993年3月12日的美国专利申请08/030,644的部分延续。本专利技术涉及来自或基于杀菌性通透性增强蛋白质多肽及其在治疗上的应用。杀菌性通透性增强蛋白质(BPI)是从哺乳动物多形核嗜中性白细胞(PMNs)颗粒中分离出来的一种蛋白质，PMNs是哺乳动物抵抗微生物入侵所必需的血细胞。经酸提取并结合离子交换层析(Elsbach，1979，J.Biol.Chem.25411000)或E.coli亲合层析(Weiss et al.，1987，Blood 69652)已从PMNs中分离出人BPI，并对广谱革兰氏阴性细菌具有明显杀菌活性。人BPI分子量约为55,000道尔顿(55KD)。人BPI全部氨基酸序列以及编码BPI的DNA核苷酸序列已由Gray et al.，1989，J.Biol.Chem.2649505阐明，此处引用以供参考(见Gray et al.附图说明图1)。BPI的杀菌效力表现出对敏感的革兰氏阴性菌具有高度特异性。BPI杀死革兰氏阴性细胞的精确机制尚不清楚，但已知BPI必须先附着到敏感的革兰氏阴性细菌表面。BPI与细菌的这种最初的结合涉及碱性(即带正电荷)蛋白质BPI与脂多糖(LPS)上带负电荷的位点之间的静电相互作用。LPS也称作“内毒素”，因为它具有刺激炎症反应的作用。BPI也能中和它所结合的LPS之内毒素活性。由于BPI对革兰氏阴性菌的杀菌特性和其结合并中和LPS的能力，BPI可用于治疗由革兰氏阴性细菌引起的哺乳动物疾病，包括败血症，内毒素血症和脓毒血症。BPI的这些双重特性使它对这类治疗给药特别有效并具优势。相应于人BPI氨基末端部分的一段蛋白质裂解片段具有天然来源的人55KD全蛋白的LPS结合和中和活性及抗菌活性。与氨基末端部分相反，分离的人BPI羧基末端区域仅表现出微量可测的抗菌活性(Ooi et al.，1991，J.Exp.Med.174649)。用重组DNA技术生产出含有人NPI全蛋白质氨基末端前199个氨基酸残基的23KD蛋白，命名为“rBPI23”(见Gazzano-Santoro et al.，1992，Infect.Immun.604754-4761)。rBPI23的人体临床试验已经开始。当rBPI23与LPS同时注射时，可显著改善内毒素的炎症反应。其它结合并中和内毒素的多肽在本领域中是已知的。一个例子是来自鲎阿米巴状细胞的鲎属抗脂多糖因子(LALF)(Warren etal.，1992，Imfect.Immunol.602506-2513)，另一个例子是来自多粘菌(Bacillas polymyxa)称为多粘菌素B1的环状阴离子脂肽。多粘菌素B1由6个α，γ-二氨基丁酸残基，一个D-苯丙氨酸，一个亮氨酸，一个苏氨酸和一个6-甲基辛酰结构部分组成(Morrison and Jacobs，1976，Immunochem.13813-818)并且也具杀菌能力。缺失脂肪酸部分的多粘菌素类似物也是已知的，该类似物保留LPS结合能力但不能检测到杀菌活性(Danner et al.，l989，Antimicrob，Agents Chemother，331428-1434)。在合成的环化的多粘菌素类似物中也发现相似的特征(Rustici et al.，1993，Science 259361-365)。已知的抗菌肽包括杀菌肽(cecropins)和爪蟾抗菌肽(maga-inins)。杀菌肽是在鳞翅目昆虫血淋巴中发现的一个抗菌肽家族(Wade et al.，1990，Proc，Natl.Acad.Sci.USA.874761-4765)，爪蟾抗菌肽是在非洲爪蟾皮肤和胃粘膜中发现的一个抗菌肽家族(Zasloff et al.，1988，Proc，Natl.Acad.Sci.USA.85910-913)。这些肽是线型的其长度范围从约20到大约40个氨基酸。已报道了一种来自猪肠粘膜的活性较低的哺乳动物杀菌肽，即杀菌肽P1(Boman et al.，1993，Infect.Immun.612978-2984)。据报道杀菌肽与爪蟾抗菌肽相比具有更强的杀菌活性而对哺乳动物细胞的细胞毒性则较弱。杀菌肽和爪蟾抗菌肽具有特征性的连续亲水脂α-螺旋区这一结构区是杀菌活性所不可缺少的。到现在为止发现的具有最高活性的杀菌肽是杀菌肽A.杀菌肽A的前10个氨基酸序列与BPI氨基酸序列90-99有一定的同源性。然而，已证明是其杀菌活性所必需的杀菌肽A其它27个氨基酸则与BPI基本无同源性。爪蟾抗菌肽与BPI序列的同源性更小。本申请感兴趣的是在PCT国际申请PCT/US91/05758中公开的涉及含BPI和一阴离子化合物的组合物，所说的组合物表现出(1)无杀菌活性，(2)内毒素中和活性。阴离子化合物优选一种蛋白质如血清白蛋白的但也可以是多糖，如肝素。另外，Weiss et al.(1975，J.Clin，Invest，5533-42)公开了肝素硫酸盐和LPS能阻断BPI增强通透性活性的表达。然而，没有参考文献公开BIP实际上中和肝素的生物学活性。肝素结合并不一定就意味肝素中和作用。例如肝素结合生长因子(HBGF)家族需要肝素作为辅助因子来引起生物学反应。GBGF的例子包括成纤维细胞生长因子(FGF-1，FGF-2)和内皮细胞生长因子(ECGF-1，ECGF-2)。参与凝血过程蛋白酶中的抗凝血酶III的抑制作用是另一个例证表明肝素结合蛋白发挥活性需要肝素的结合而同时确实并不中和肝素。其正中和肝素的肝素结合蛋白(例如血小板因子IV，鱼精蛋白和凝血酶敏感蛋白)对使用肝素作为辅助因子的肝素结合蛋白所产生的活性一般是抑制性的。BPI(包括其氨基末端片段)具有一些其它重要的生物学活性。例如在申请日为1993年3月12日的共同待批和共同转让的美国专利申请08/030,644及其部分延续的申请日为1993年7月15日的美国专利申请08/093,202中已显示BPI具有肝素结合和肝素中和活性，此处引用其公开的内容以供参考。由于肝素近年来的临床应用，BPI的这些肝素结合和中和活性具有重要的意义。在外科手术如心肺旁路，心脏插管和血液透析手术中为防止手术期间的血液凝固，通常以达到400V/kg的剂量注射肝素。当在手术期间为抗凝血效应而注射肝素时，手术后治疗的一个重要方面是迅速中和肝素的效力以便恢复正常的凝血功能。通常，鱼精蛋白用于中和肝素。鱼精蛋白是一类简单，富含精氨酸，强碱性，低分子量的蛋白质。单独给药时，鱼精蛋白(通常以鱼精蛋白硫酸盐的形式)具有抗凝血效力。当有肝素存在的条件下给药时，会形成稳定的复合物并且两种药物的抗血凝活性消失。然而，鱼精蛋白明显的降血压和类过敏副作用限制了其临床应用。因此，由于BPI的肝素结合和中和活性，它有可能作为鱼精蛋白的替代物在临床上用于中和肝素同时避免了限制鱼精蛋白应用的有害副作用本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：RG利特尔二世，
申请(专利权)人：爱克索马技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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