一种米根霉及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种米根霉及其用途，其形态特征：米根霉Y5 (

【技术实现步骤摘要】
一种米根霉及其用途
本专利技术涉及生物
，具体来说涉及一种米根霉，同时还涉及该米根霉在降解废弃烟叶方面的用途。
技术介绍
本专利技术涉及生物
，具体来说涉及一种米根霉，同时还涉及该米根霉在降解废弃烟叶方面的用途。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述问题而提供的一种能降解废弃烟叶，环境友好，安全性高，生长条件宽泛，易于培养和存活的米根霉。本专利技术的另一目的在于提供该米根霉在降解废弃烟叶方面的用途。本专利技术的一种米根霉，其形态特征：在PDA培养基上培养，菌落疏松，初呈白色，后变成黑褐色；菌丝匍匐枝爬行、无色；假根发达，指状或根状分枝；孢囊梗直立或稍弯曲，呈褐色；孢子囊呈球形或近球形，呈黑色；可分泌糖化酶、纤维素酶等。该菌种已于2015年12月3日保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：湖北省武汉市武昌珞珈山，武汉大学），保藏号：CCTCCM2015720，名称为：米根霉Y5(RhizopusoryzaeY5)。本专利技术的一种米根霉Y5(RhizopusoryzaeY5)的分离，包括以下步骤：（一）米根霉Y5的分离步骤：选取腐烂烟草叶片，剪取病健交界处组织（3mm×3mm），将其置于70%乙醇中浸泡30s，然后经无菌水漂洗3次。消毒后的组织样品置于PDA平板上，于30℃黑暗条件下培养，3天后平板上长出疏松的菌丝，初呈白色，后变为灰褐色或黑褐色。显微镜镜检发现，菌丝匍匐爬行、无色，假根发达、分枝呈指状或根状，孢囊根直立或稍弯曲，孢子囊（直径60-250μm不等）呈球形或近球形，孢囊孢子（直径5-8μm不等）呈椭圆形、球形等。将该菌株进行单孢纯化。（二）培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，水1000ml，pH6.8-7.2。（三）菌种的保种和传代：用18×180mm的试管，盛PDA培养基9ml，做成斜面，接种细菌，30℃培养4-5天，置4℃保存，12个月转种一次。（四）菌种的形态特征：该菌形成的菌落在PDA平板上，30℃，培养3d，长出疏松的菌丝，初呈白色，后变为灰褐色或黑褐色。菌丝匍匐爬行、无色，假根发达、分枝呈指状或根状，孢囊根直立或稍弯曲，孢子囊（直径60-250μm不等）呈球形或近球形，孢囊孢子（直径5-8μm不等）呈椭圆形、球形等。经显微镜镜检及18srDNAITS1-5.8s-ITS2序列分析结果，将这一菌株记为米根霉(RhizopusoryzaeY5)。（五）菌种的培养特性培养温度15-45℃，最适温度范围30-37℃；培养初始pH3.5-10，最适5.0-9.0；培养盐浓度1-6.5%，最佳1%；可培养碳源有核糖醇、D-阿拉伯糖醇、L-阿拉伯糖、D-纤维二糖、β-环状糊、糊精、D-果糖、D-半乳糖醛酸龙胆二糖、α-D-葡萄糖、甘油、麦芽糖、麦芽三糖、D-甘露糖、D-山梨醇、D-海藻糖、木糖醇、d-木糖、癸二酸、L-脯氨酸；可培养氮源有尿素、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、尿酸等。本专利技术与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本专利技术筛选获得的菌株来源于烟叶本身，环境友好、安全，生长条件宽泛，易于培养和存活。经废弃烟叶降解试验表明，米根霉Y5能够加快废弃烟叶的分解，快速完成废弃烟叶到生物有机肥的发酵，发酵过程中还伴随酒香味。同废弃烟叶自然堆置发酵相比，废弃烟叶发酵温度上升快，烟叶腐烂速度快，腐烂程度较为彻底。该菌剂用湿菌与菌种保藏液配制而成，菌体保藏液为0.25%吉冷胶、及0.03%的Tween40非离子型表面活性剂。该菌剂可以直接喷雾或浇撒至废弃烟叶上。本专利技术是专门针对降解废弃烟叶开发的微生物菌剂。由于是微生物菌剂，对环境友好，安全性高，有利于无公害生产、有机生产。本专利技术对烤烟田间采集的废弃新鲜烟叶及卷烟工业废弃的烤后烟叶均具有较强的分解、降解能力，可将其用于所有废弃烟叶的处理，既解决了废弃新鲜烟叶随意处理导致病害的发生与传播的问题，又可充分利用废弃烟叶这类可再生资源进行生物有机肥的发酵，变废为宝。用于废弃烟叶处理的生产操作过程简单，提高了废弃烟叶的降解速率。具体实施方式一种米根霉Y5(RhizopusoryzaeY5)的分离，包括以下步骤：选取腐烂烟草叶片，剪取病健交界处组织（3mm×3mm），将其置于70%乙醇中浸泡30s，然后经无菌水漂洗3次。米根霉Y5在PDA平板上30℃培养3d，长出疏松的菌丝，初呈白色，后变为灰褐色或黑褐色。菌丝匍匐爬行、无色，假根发达、分枝呈指状或根状，孢囊根直立或稍弯曲，孢子囊（直径60-250μm不等）呈球形或近球形，孢囊孢子（直径5-8μm不等）呈椭圆形、球形等。该菌可分泌糖化酶、纤维素酶等。将上述降解废弃烟叶的米根霉菌株Y5在PDA培养基平板上30℃培养5天，无菌水洗涤培养基表面的孢子，无菌纱布过滤，收集孢子液，然后6000rpm离心10分钟，取米根霉Y5孢子与菌体保藏液配成菌剂，菌剂成品活菌孢子浓度为1×104-1×108个/ml。菌体保藏液由0.25%吉冷胶及0.03%的Tween40非离子型表面活性剂的水溶液组成。所用马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，水1000ml，pH6.8～7.2，经120℃灭菌20分钟后分装、待用。米根霉Y5对废弃烟叶降解的试验配制PDA平板，待平板冷却后，每皿中央接种米根霉Y5菌饼（直径5mm，菌落边缘取菌饼），30℃黑暗条件下培养。5天后无菌水洗涤培养基表面的孢子，无菌纱布过滤，收集孢子液，然后6000rpm离心10分钟，取米根霉Y5孢子与菌体保藏液配成菌剂，菌剂成品活菌孢子浓度为1×104-1×108个/ml。菌体保藏液由0.25%吉冷胶及0.03%的Tween40非离子型表面活性剂的水溶液组成。选取烤后的废弃烟叶（品种：云烟85）进行降解试验，每处理干烟叶10公斤。对照组Ⅰ喷无菌水处理，将3L无菌水均匀喷雾至烟苗叶片表面，然后将烟叶堆置发酵；处理组Ⅱ喷雾米根霉1×104个/ml孢子液，将3L孢子液均匀喷雾至烟苗叶片表面，然后将烟叶堆置发酵；处理组Ⅲ喷雾米根霉1×108个/ml孢子液，将3L孢子液均匀喷雾至烟苗叶片表面，然后将烟叶堆置发酵。记录各处理堆置中心烟叶的温度、pH的变化情况，观察烟叶的腐烂状况及降解烟叶的气味。表1米根霉Y5菌剂施用30天后对废弃烟叶的降解效果处理发酵温度（%）发酵pH烟叶腐烂程度发酵气味对照Ⅰ358.7不充分恶臭米根霉处理组Ⅱ389.5充分醇香米根霉处理组Ⅲ399.5充分醇香废弃烟叶降解试验结果表明，米根霉菌剂处理组能够很好降解废弃烟叶以上所述，仅是本专利技术的较佳实施例而已，并非对本专利技术作任何形式上的限制，任何未脱离本专利技术技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本专利技术技术方案的范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种米根霉Y5 (

【技术特征摘要】
1.一种米根霉Y5(RhizopusoryzaeY5)，其特征在于所述菌种的保藏号为...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪汉成，李文红，唐兴贵，蔡刘体，刘雪梅，张之矾，周红江，邱雪柏，商胜华，曹毅，贾蒙骜，陈兴江，陆宁，孟建玉，兰黔贵，
申请(专利权)人：贵州省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：贵州,52